Temporal and spatial expression analysis of allatostatin C (AST-C) and prothoracicotropic hormone (PTTH) genes in the brain of the silkworm, Bombyx mori (Lepidoptera: Bombycidae)

2015·1.5 MB·

by  Ling, Gan

昆虫学报!"#$%&#’(’)’*+"$,+&+"$!!"#$%&’(!()"*#$*&+-*’’ ./0$’&1’+2)&34156781%&’(1&*1&&%
GH型咽侧体抑制素#6IDHG$和促前胸腺激素
释放激素#JDDK$基因在家蚕脑
组织中的时空表达分析
甘9玲’!%! 刘喜龙’! 何宁佳’!!
"’]西南大学蚕基因组生物学国家重点实验室!重庆A&&*’()%]西南大学荣昌校区动物医学系!重庆荣昌A&%A+&#
摘要" %目的&咽侧体抑制素在昆虫体内具有重要的调控功能’ 本研究比较了家蚕=’(?<K(’.+TF型咽侧体抑制素
"B##BJ/WJBJ0K T! ?D^FT#与促前胸腺激素释放激素"\Y/J=/YB606/JY/\06=/Y;/KU! G^^>#基因在不同发育阶段家蚕脑组
织中转录表达的模式及其在脑组织的表达定位!以期为家蚕!,L3;的功能研究提供重要的线索’ %方法&利用脑组
织芯片数据分析比较?D^FT和 G^^>基因在家蚕脑组织中的发育表达特征!‘^FGT‘验证其芯片数据!分析!,L3;
在不同发育阶段家蚕中枢神经系统中的表达模式!并用全组织包埋原位杂交技术对!,L3;和 8LLD在脑组织的表
达进行定位’ %结果& !,L3;和8LLD在不同发育阶段家蚕脑组织中有相似的转录表达模式!且都在脑组织外侧一
对神经分泌细胞中表达’ %结论&!,L3;可能与8LLD以相同的转录表达模式共同参与家蚕的变态发育调控’
关键词" 家蚕) TF型咽侧体抑制素) 转录) 表达模式) 原位杂交) 时空表达模式
中图分类号" M,++99文献标识码" ?99文章编号"&A(AF+%,+"%&’(#&*F&*&+F&+
D#,2’4()(-3&2(%0()#524#&&0’-(-()1&0&’"())(%’&%(%0-G"6IDHG# (-3
24’%.’4($0$’%4’20$.’4,’-#"JDDK# /#-#&0-%.#*4(0-’"%.#&0)L8’4,!
/#*012 *#"’"M#203’2%#4($ N’,*1$03(##
H?L<0K:’!%! <PXQ0F</K:’! >IL0K:F!0B’!!"’]DJBJUfU$<B8/YBJ/Y$/VD0#5[/Y;HUK/;US0/#/:$!
D/"J=[UWJXK0@UYW0J$! T=/K:k0K:A&&*’(! T=0KB) %]EU\BYJ;UKJ/VgUJUY0KBY$_U.060KU! ‘/K:6=BK:
TB;\"W! D/"J=[UWJXK0@UYW0J$! ‘/K:6=BK:! T=/K:k0K:A&%A+&! T=0KB#
6*&%4($%$ %?0;& ?##BJ/WJBJ0KW\#B$0;\/YJBKJYU:"#BJ/Y$Y/#UW0K 0KWU6JW]^=UJYBKW6Y0\J0/K U7\YUWW0/K
\BJJUYKW/VB##BJ/WJBJ0KFT "?D^FT# BK. \Y/J=/YB606/JY/\06=/Y;/KU"G^^># :UKUW0K .0VVUYUKJ
.U@U#/\;UKJB#WJB:UW/V=’(?<K(’.+[UYU6/;\BYU.! BK. J=U0YU7\YUWW0/K #/6BJ0/K 0K J=U8YB0K [BW
.UJU6JU. J/W"\\#$0;\/YJBKJ6#"UWV/YJ=UV"K6J0/KB#WJ".$/V?D^FT:UKU0K =5(’.+]%_UJ=/.W&
_06Y/BYYB$.BJB[UYUBKB#$ZU. J/6/;\BYUJ=U.U@U#/\;UKJB#U7\YUWW0/K \BJJUYKW/V?D^FTBK. G^^>
:UKUW]‘^FGT‘ [BW6/K."6JU. J/6/YY/8/YBJUJ=U;06Y/BYYB$.BJBBK. BKB#$ZUJ=U.U@U#/\;UKJB#
U7\YUWW0/K \BJJUYK /V!,L3;0K J=U6UKJYB#KUY@/"WW$WJU;]^=UJYBKW6Y0\J0/K #/6BJ0/K /V?D^FTBK. G^^>
:UKUW0K J=U8YB0K [BW/8WUY@U. "W0K:[=/#U;/"KJ+& /+#> =$8Y0.0ZBJ0/K]%‘UW"#JW& ^=UYUW"#JWW=/[U.
J=BJ?D^FTBK. G^^>:UKUWW=BYU. J=UW0;0#BYJYBKW6Y0\J0/K \BJJUYK! BK. 8/J= [UYUU7\YUWWU. 0K B\B0Y/V
#BJUYB##$KU"Y/WU6YUJ/Y$6U##W/VJ=U8YB0K /VJ=UW0#5[/Y;]%T/K6#"W0/K& ?D^FTBK. G^^>:UKUW;B$8U
0K@/#@U. 0K J=UYU:"#BJ0/K /V;UJB;/Y\=/W0WJ=Y/":= J=UWB;UJYBKW6Y0\J0/K U7\YUWW0/K \BJJUYK]
7#1 8’43&$ =’(?<K(’.+) B##BJ/WJBJ0KFT) JYBKW6Y0\J0/K) U7\YUWW0/K \BJJUYK) +& /+#> =$8Y0.0ZBJ0/K)
JU;\/YB#BK. W\BJ0B#U7\YUWW0/K \BJJUYK
99咽侧体抑制素"B##BJ/WJBJ0K! ?D^#是昆虫体内一 合成而得名"GYBJJ2#$)]! ’,),) SUK.UKB2#$)]!
组非常重要的神经肽! 最初从蟑螂 -+0)’0#2.$ ’,,*#’ 之后大量咽侧体抑制素类似物已从另外几
0>&"#$#$中分离!因抑制了咽侧体保幼激素的生物 类昆虫如绿头苍蝇;$))+01’.$ C’(+#’.+$ "E"@U2#$)]!
基金项目$国家自然科学基金项目"2’%&’)&*#
作者简介$甘玲!女!’,*)年生!四川资中人!博士!副教授!研究方向为生物化学与分子生物学!IF;B0#$:#,&),aW0KB]6/;
!通讯作者T/YYUW\/K.0K:B"J=/Y!IF;B0#$=U40BaW["]U."]6K
收稿日期‘U6U0@U.$%&’(F&2F&,)接受日期?66U\JU.$%&’(F&(F’)
*期 甘9玲等$ TF型咽侧体抑制素"?D^FT#和促前胸腺激素释放激素"G^^>#基因在家蚕脑组织中的时空表达分析 99*&*
’,,2#(烟草天蛾 B$&7>"$ /2K#$ "fYB;UY2#$)]! 喂饲新鲜桑叶!在温度为 %A i%+c!相对湿度为
’,,’# 等中分离出来’ 尽管这些类似物在上述昆虫 *&di)(d!光周期为’%<e’%E的条件下饲养’
中并没有抑制保幼激素生物合成的作用!但仍被归 质 粒 和 菌 株$ \HI_F^FUBW$@U6J/Y购 买 自
于咽侧体抑制素家族’ 据结构特点!咽侧体抑制素
GY/;U:B公司$大肠杆菌 E>($由本实验室保存
被划分为2 组$?F型咽侧体抑制素 "?D^F?#"GYBJJ
备用’
2#$)]! ’,),#!SF型咽侧体抑制素 "?D^FS# "</YUKZ
9;<:试剂
2#$)]! ’,,(B) ’,,(8 #及 TF型咽侧体抑制素"?D^F
^Y0Z/#"PK@0JY/:UK公司!上海#)氯仿"重庆化学
T#"fYB;UY2#$)]! ’,,’#’ ?D^F?最早从雌性太平
试剂总厂#)异丙醇"重庆川东化工化学试剂厂#)_F
洋折翅蠊 -+0)’0#2.$ 0>&"#$#$ 的后脑复合体中得到
_<g反转录试剂盒"GY/;U:B公司!北京#)无水乙醇
分离"GYBJJ2#$)]! ’,),) R//.=UB. 2#$)]! ’,),#!而
"重庆化学试剂总厂#)GT‘试剂盒"上海生工#)
?D^FS最初从咖啡两点蟋 E.<))>/?+($">)$#>/中分
GT‘地高辛标记探针合成试剂盒"GT‘EPHGY/8U
离出来"</YUKZ2#$)]! ’,,(B! ’,,(8#’ ?D^FT最早
在 烟 草 天 蛾 B5 /2K#$ 中 证 实 其 序 列 为 D$KJ=UW0Wf0J#"‘/6=U公司!德国#)地高辛核酸检测
\Mg‘b‘MTNbLGPDTb"fYB;UY2#$)]! ’,,’#’ TF型 试剂盒"EPHL"6#U06?60. EUJU6J0/K f0J#"‘/6=U公
咽侧体抑制素肽家族在 L末端具有环化阻碍的结 司!德国#)胶回收试剂盒 "^BfB‘B公司!中国#)
构!在 T末端为没有环化的FGPDTb序列!而在两个 GT‘产物回收试剂盒 "^BfB‘B公司!大连#)抽提质
内部的半胱氨酸之间有’ 个二硫桥"DJB$BK. ^/8U! 粒试剂盒 "^BfB‘B公司!大连#’ 多聚甲醛"南京化
%&&*#’ 长期以来!,L3;被认为仅出现在全变态的
学试剂有限公司#)马来酸"湖北巨胜科技有限公
昆虫中!然而随着基因组学和转录基因组学研究的
司#)染色剂 LS^3STPG"北京赛驰生物科技有限公
不断深入!并结合不断发展的质谱分析技术!在半变
司#) 焦碳酸二乙酯"上海生工#)^[UUKF%&"上海生
态的昆虫(介虫和螯肢动物等也发现并检测到了
工#) Ad多聚甲醛"多聚甲醛 %& :!%(& ;<双蒸
?D^FT肽成员"DJB$BK. ^/8U! %&&*#’ 结构和功能
水#)%& nDDT"\>*#"2]& ;/#3<氯化钠!&]2 ;/#3<
研究分析表明!无脊椎动物中 ?D^FT样肽为脊椎动
柠檬酸钠#)洗脱缓冲液"\>*](#"&]’ ;/#3<马来
物生长抑素的对应物!参与了生长及发育的控制
酸!&]’( ;/#3<氯化钠!&]2d ^[UUKF%&#)马来酸缓
"gUUKWJYB! %&&,#’ 脑外侧神经分泌细胞是产生神
经肽的重要位点!G^^>已被报道在家蚕脑外侧神 冲液"\>*](#"&]’ ;/#3<马来酸!&]’( ;/#3<氯化
经分泌细胞产生"fB[B5B;02#$)]! ’,,&) _0Z/:"6=0 钠#)检测缓冲液"\>,](#"&]’ ;/#3<^Y0WF>T#!&]’
2#$)]!’,,&) _6SYB$UY2#$)]!%&&*#’ 但目前尚未见 ;/#3<氯化钠#) 封阻溶液"\>*](#"&]’ ;/#3<马
对 ?D^FT基因在家蚕脑组织的表达进行定位的文 来酸!&]’( ;/#3<氯化钠! ’d 封阻剂#)抗体溶液
献报道’ "抗地高辛抗体#)染色液"染色剂 LS^3STPG#)
家蚕脑组织基因芯片数据分析表明!尽管家蚕 EIGT处理水"&]’d EIGT#)GS^缓冲液"GSD 缓
中都存在 ?D^F?! ?D^FS及 ?D^FT基因!但仅有 冲液!&]’d ^[UUKF%&#’
!,L3;在 ( 龄第 * 天幼虫(化蛹第 ’ 天(化蛹第 2 9;=:家蚕芯片数据分析
天(化蛹第( 天及化蛹第* 天的家蚕脑组织中表达 基于家蚕芯片表达数据中的脑组织芯片表达数
"HBK 2#$)]! %&’’#’ 为了进一步理解家蚕中 ?D^FT 据"登录号$HDI%(2A%#!比较分析家蚕 !,L3;与
的可能作用!本研究利用芯片数据和 ‘^FGT‘技术 8LLD在( 龄* 天幼虫"g*#!化蛹第’ 天"G’#!化蛹
分析了!,L3;在不同发育阶段家蚕脑组织及中枢神 第2 天"G2#!化蛹第( 天"G(#及化蛹第* 天"G*#
经系统"6UKJYB#KUY@/"WW$WJU;! TLD#"不包括脑#的 的发育表达特征’
表达特征! 用全组织包埋原位杂交技术对 !,L3;在 9;>:FDHJGF反应
脑组织中的转录表达进行定位检测!并与 G^^>进 通过‘^FGT‘!分析和比较家蚕( 龄第2 天幼虫
行比较分析!为!,L3;的功能研究提供重要的线索’ "g2#(( 龄第( 天幼虫"g(#(( 龄第* 天幼虫"g*#(
游走期蚕"熟蚕#"R#(化蛹第’ 天"G’#(化蛹第2
9:材料与方法 天"G2#(化蛹第( 天"G(#(化蛹第* 天"G*# 时期家
蚕脑与TLD中 ?D^FT基因的表达’ 每个时期取约
9;9:供试材料 2& 头家蚕的脑及 TLD 在解剖镜下迅速分离!采用
家蚕$为\(& 品系!由西南大学蚕基因库提供! ^Y0Z/#法进行‘L?的提取!并利用_F_<g反转录酶
99*&) 昆虫学报!"#$ %&#’(’)’*+"$ ,+&+"$ ()卷
进行%( !<体系反转录’ 反转录得到的 6EL?利 ’%c条件下保存’ 用于 !,L3;和 8LLD表达谱分
用内参引物"表’#进行扩增检测!反应条件$,Ac 析及内参的引物信息见表 ’! 引物采用 GY0;UY
预变性A ;0K),Ac变性A& W!((c退火A& W!*%c GYU;0UY(]& 软件进行设计!并由上海英骏有限责
延伸A( W!共%( 个循环)最后*%c终延伸’& ;0K) 任公司合成’
表9:家蚕基因$BC6片段的扩增引物
D(*)#9:O)0/’-+$)#’%03#240,#4&+&#3%’ (,2)0"1 $BC6"4(/,#-%’"/#-#&0-/#*012 *#"’
基因 引物序列"(o-2o# 退火温度"c# 扩增产物大小"8\#
HUKU GY0;UYWUk"UK6U ?KKUB#0K:JU;\UYBJ"YU GY/."6JW0ZU
b$H^^^^H^^^HHHH^^^^^HT
!,L3; (* 2(A
‘$^TH^H^^?^^T?T^^HTHH?
b$H^??^?TH?T^T?T^?^?HHH?H?H^^^^H^^^HHHH^^^^^HT
!,L3;3L* (* 2*)
‘$H^??^?TH?T^T?T^?^?HHH?H?^TH^H^^?^^T?T^^HTHH?
b$?TTT?H?T?TH?HTTT?H
8LLD (, 2+*
‘$T?T???T?THTT?THT^H
b$H^??^?TH?T^T?T^?^?HHH?H??TTT?H?T?TH?HTTT?H
8LLD3L* (, 2,’
‘$H^??^?TH?T^T?T^?^?HHH?H?T?T???T?THTT?THT^H
b$^TH^T?^TH^HH^??HH^T??
60)2 (( +’,
‘$^^^H^?^TT^^^HTTT^^HH^
9;?:原位杂交 在冰上冷却( ;0K 后!按探针效率检测提供的相应
9]?]99探针的制备$分别用引物 ?D^FTFb3?D^FTF‘ 的倍数用杂交液进行稀释!并在(Ac的条件下孵育
和G^^>Fb3G^^>F‘"表’#!以家蚕( 龄第* 天幼虫 2 =)用 (Ac预热的杂交液洗涤组织 % 次!每次 ’&
的6EL?为模板!通过 GT‘扩增目的基因片段’ ;0K)在杂交液eGS^为 ’e’"@3@#的混合液中洗
GT‘扩增程序如下$,Ac A ;0K),Ac A& W!(*3(,c ’& ;0K!最后在GS^中洗’& ;0K)在检测缓冲液e封
阻液为,e’"@3@#的混合溶液中!室温条件下保温2&
A& W!*%c2& W!2( 个循环)*%c’& ;0K)Ac保存备
;0K)组织在抗体溶液中室温条件下保温A = 后!在
用’ 将上述GT‘产物用’](d的琼脂糖凝胶进行电
GS^中洗涤 ’& 次)将组织在染色液中染色约
泳检测!用溴化乙锭染色观察!并在紫外光下用消毒
%& ;0K!然后用GS^冲洗’ 杂交完成的脑组织被放
过的干净刀片切下含目的片段的胶条’ 按照 GT‘
于甘油中!在双目显微镜下观察并拍照’ 在杂交过
产物回收试剂盒上操作说明!回收目的片段!随之进
程中!体外转录合成的正义链探针作为对照组’
行连接和转化’ 并进行阳性克隆质粒的提取及体外
9;A:数据分析
转录’ 最后进行探针的效率检测’
基因的相对表达量采用芯片数据信号实际值以
9]?]<9家蚕全包埋脑组织的制备$在解剖镜下取出
% 为底取对数!并用_06Y/W/VJI76U#作图’
( 龄第* 天家蚕幼虫脑组织!快速地用 GSD 进行洗
涤之后!在Ad的多聚甲醛溶液中Ac温度条件下固
<:结果
定过夜’ 随之在甲醇与 GSD 的比例分别为 (&d!
*(d! ,(d及 ’&&d的浓度条件下进行梯度脱水
<;9:基于芯片数据比较34567与 8559的发育表
’& ;0K’ 最后置于’&&d的甲醇中-%&c储存备用’
达分析
9]?]=9( 龄第* 天家蚕幼虫脑全组织包埋杂交$将
脑组织芯片发育表达特征显示!?D^FT基因与
保存备用的( 龄第* 天家蚕幼虫脑组织在室温条件
G^^>基因有相似的发育表达模式!在g* 时期的家蚕
下!在甲醇与 GSD 的比例"@3@#分别为,(d! *(d
脑组织高量表达!而当进入蛹期后表达下降 "图’#’
和(&d的浓度条件下复水’& ;0K)用GS^溶液简单
<;<:34567在家蚕脑组织及 GCI中发育表达的
洗涤后!在2*c的温度条件下用蛋白酶 f消化’& FDHJGF分析
;0K)在GS^溶液洗涤两次后!在Ad的多聚甲醛溶 通过‘^FGT‘分析!比较 !,L3;在不同时期家
液中Ac温度条件下固定%& ;0K)用 GS^溶液洗涤 蚕脑组织及TLD中的发育表达特征’ 结果显示!脑
两次后!脑组织在(Ac的条件下!杂交液中预杂交 组织中!,L3;基于 ‘^FGT‘的表达特征"图%#与芯
2& ;0K)冻存的探针在)&c的条件下热变性( ;0K! 片数据"图’#基本一致!都在化蛹前高量表达!进入
*期 甘9玲等$ TF型咽侧体抑制素"?D^FT#和促前胸腺激素释放激素"G^^>#基因在家蚕脑组织中的时空表达分析 99*&,
蛹期后降低!在蛹后期又上升’ !,L3;基因在 TLD
中的表达模式与脑组织表达情况相似!表明脑组织
中!,L3;的表达模式与整个中枢神经系统的一致性
"图%#’
<;=:34567基因在家蚕脑组织中的表达定位
将分别克隆有家蚕!,L3;和8LLD的 \_E’)F^
重组质粒 EL?作为模板!用含有 EPHF.L^G成分的
GT‘地高辛标记探针合成试剂盒进行探针标记’
将标记的探针进行* 个浓度梯度的稀释!并取’ !<
图’9家蚕脑组织芯片数据!,L3;与8LLD
基因发育表达特征 进行标记效率测定! 结果表明在%&& n稀释倍数以
b0:]’9_06Y/BYYB$F8BWU. !,L3;BK. 8LLD:UKUU7\YUWW0/K 内% 个被检测基因的杂交信号清楚’ 以其杂交信号
\Y/V0#UW0K J=U8YB0K /V=’(?<K(’.+ 清楚程度和稀释后总体积的综合考虑!选择’&& n
g*$(龄第*天幼虫EB$F*(J=0KWJBY#BY@B)G’$化蛹第’天’WJ.B$
稀释倍数!用于全脑组织包埋原位杂交实验’ 显微
BVJUY\"\BJ0/K)G2$化蛹第2天2Y..B$BVJUY\"\BJ0/K)G()化蛹第(
镜"放大倍数为’& nA&#下观察的结果显示!!,L3;
天(J=.B$BVJUY\"\BJ0/K]图中数值为芯片信号实际值以%为底的
在家蚕脑组织中一对外侧神经分泌细胞中表达"图
对数字’ ^=UK";UYB#W0K J=UV0:"YUYU\YUWUKJJ=UB6J"B#@B#"UW/K B
#/:% W6B#U] 2$ S! T#’ !,L3;阳性细胞的位置明显与 8LLD相
图%9!,L3;在家蚕脑组织和中枢神经系统中的发育表达特征
b0:]%9EU@U#/\;UKJB#U7\YUWW0/K \Y/V0#UW/V!,L3;:UKUW0K J=U8YB0K BK. 6UKJYB#KUY@/"WW$WJU;"TLD# /V=’(?<K(’.+
_$EL?分子量标准物EL?_BY5UY)g2$(龄第2天幼虫EB$F2(J=0KWJBY#BY@B)g($(龄第(天幼虫EB$F((J=0KWJBY#BY@B)g*$(龄第*天幼虫
EB$F*(J=0KWJBY#BY@B)R$游走期蚕’WJ.B$BVJUYJ=U8U:0KK0K:/V[BK.UY0K:)G’$化蛹第’天’WJ.B$BVJUY\"\BJ0/K)G2$化蛹第2天2Y..B$BVJUY
\"\BJ0/K)G($化蛹第(天(J=.B$BVJUY\"\BJ0/K)G*$化蛹第*天*J=.B$BVJUY\"\BJ0/K]60)2作内参’ 60)2:UKU[BW"WU.BWJ=U0KJUYKB#6/KJY/#]
同"图2$ I#’ 为了进一步证实 !,L3;与 8LLD在 G^^>促进前胸腺合成和释放蜕皮激素"H0#8UYJ2#
家蚕脑组织表达的共位性!使用 8LLD和 !,L3;探 $)]! %&&%#’ 除了 G^^>!脑也产生了其他影响前胸
针的混合物进行原位杂交!杂交信号仍然定位于家 腺合成蜕皮激素的神经肽!如$>"B等"’,,,#研究
蚕脑外侧对称的神经分泌细胞"图2$ H!>#’ 表明!家蚕脑抑前胸腺肽"\Y/J=/YB606/WJB06\U\J0.U!
G^DG#能抑制前胸腺释放蜕皮激素)之后!NB;BKB5B
=:讨论 等"%&&(#研究表明家蚕脑组织表达的肌动抑制神
经肽"S/;;/F;$/W"\\YUWW0K! S_D#抑制了前胸腺的
?D^FT是神经肽信号物质’ 基于家蚕脑组织芯 活性’ 因此!不难推测脑不仅产生促前胸腺因子!也
片数据的提示!并鉴于基因表达模式与功能之间密 产生抑前胸腺因子!共同调节发育过程中家蚕血淋
切的相关性!本研究开展了神经肽基因 !,L3;在不 巴蜕皮激素滴度复杂的模式’ 早期研究显示家蚕脑
同发育阶段家蚕脑组织和 TLD 的转录表达模式分 组织的外侧神经分泌细胞产生了促前胸腺激素
析’ 并利用原位杂交技术对!,L3;在家蚕脑组织的 G^^>"fB[B5B;02#$)]! ’,,&) _0Z/:"6=02#$)]!
表达进行定位!通过与已知功能基因 8LLD表达位 ’,,&#!我们的实验也证实了这一结果!并发现 !,L3
点的比较!为家蚕未知基因 !,L3;的后期功能研究 ;与8LLD在家蚕( 龄第* 天幼虫脑组织中的表达
提供重要的线索’ 共位化’ 在果蝇中几个神经肽已经被定位到外侧神
脑是昆虫发育调控的中心!研究表明脑神经肽 经分泌细胞’ 在果蝇脑组织!外侧神经分泌细胞产
99*’& 昆虫学报!"#$ %&#’(’)’*+"$ ,+&+"$ ()卷
图29家蚕!,L3;及8LLD在脑组织中的原位杂交
b0:]29J& /+#> =$8Y0.0ZBJ0/K /V!,L3;BK. 8LLD:UKUW0K J=U8YB0K /V=’(?<K(’.+
?!E!b$分别为8LLD! !,L3;及8LLD和!,L3;探针混合杂交的对照 ^=U6/KJY/#W/V8LLD! !,L3;BK. J=U;07J"YU/V8LLDBK. !,L3;
=$8Y0.0ZBJ0/K!YUW\U6J0@U#$)S!T$箭头所指为!,L3;探针杂交信号^=U=$8Y0.0ZBJ0/KW0:KB#/V!,L3;BW0K.06BJU.8$BKBYY/[)I$箭头所指为
8LLD探针杂交信号^=U=$8Y0.0ZBJ0/KW0:KB#/V8LLDBW0K.06BJU.8$BKBYY/[)H!>$箭头所指为!,L3;与8LLD探针共同的杂交信号 ^=U
6/;;/K=$8Y0.0ZBJ0/KW0:KB#/V!,L3;BK.8LLDBW0K.06BJU.8$BKBYY/[]
生了离子转运肽"P^G#(促前胸腺激素"G^^>#(黑 G^GTW是昆虫从幼虫到蛹变态发育的主控细胞’ 如
化诱导神经肽"6/YBZ/K0K# 和短神经肽 b"WLGb# I6‘直接转导%&I的信号!从而控制了昆虫蜕皮和
"T=/02#$)]! %&&() _6SYB$UY2#$)]! %&&*) LpWWU#2# 变态的许多生物学过程及发育过程 "‘0..0V/Y. 2#
$)]! %&&)) GBY5 2#$)]! %&&)) <UU2#$)]! %&&)#’ $)]! %&&2#’ f0;等"%&&A#的研究显示 T/YBZ/K0K 参
GY/6J/#0K也被发现在果蝇脑侧面的神经分泌细胞中 与了蜕皮行为的协调作用’
表达"与 T/YBZ/K0K 共位化# "^B$#/Y2#$)]! %&&A) 尽管长期以来人们知道昆虫的变态发育依赖于
PWBB62#$)]! %&&A#’ 此外!>/WWB0K 等"%&&+#通过全 蜕皮激素和保幼激素之间的相互协调!但对其调控
组织包埋原位杂交和免疫组化研究表明!%&I结合 因子之间如何协调以及呈怎样的表达调控模式知之
的核受体 I6‘F?和 I6‘FS’ 也在家蚕产生 G^^>的 甚少’ 本研究中家蚕神经肽基因 !,L3;也在 G^GTW
细 胞 " \Y/J=/YB606/JY/\06=/Y;/KU\Y/."6U. 6U##W! 表达!而且在 ( 龄第 * 天家蚕幼虫的脑组织中!
G^GTW#!即外侧神经分泌细胞表达’ 根据已有的研 G^GTW是唯一表达 !,L3;的细胞’ !,L3;与 8LLD
究信息!我们发现在昆虫脑外侧神经分泌细胞表达 在脑组织中相似的发育表达模式及表达定位特征!暗
的基因都直接或间接地与变态发育相关!因此推测 示?D^FT与G^^>可能以相同的表达模式共同参与
*期 甘9玲等$ TF型咽侧体抑制素"?D^FT#和促前胸腺激素释放激素"G^^>#基因在家蚕脑组织中的时空表达分析 99*’’
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的分泌!后来相继在家蚕脑组织中也得到证实
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用!但 G^^>产生和释放的分子机制仍停留于早期 </YUKZ_R!fU##KUY‘!>/VV;BKKf>!’,,(B]?VB;0#$/VKU"Y/\U\J0.UW
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模式的比较分析和在脑组织表达位点的共位化证
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据也将为 G^^>调控的分子机制及功能研究提供
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新的线索’ "IKW0VUYB! HY$##0.BU#$ B..0J0/KB#;U;8UYW/VBVB;0#$/V
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