IV. Les vaccins ADN PDF
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VETAGRO SUP CAMPUS VETERINAIRE DE LYON Année 2013 - Thèse n° FONCTIONNALITE, SECURITE ET IMMUNOGENICITE DE TROIS NOUVEAUX VACCINS ENCODANT LA TERT CANINE, FELINE OU HYBRIDE DESTINES A UN FUTUR USAGE THERAPEUTIQUE CONTRE LES CANCERS DU CHIEN ET DU CHAT THESE Présentée à l’UNIVERSITE CLAUDE-BERNARD - LYON I (Médecine - Pharmacie) et soutenue publiquement le 2 juillet 2013 pour obtenir le grade de Docteur Vétérinaire par Gabriel CHAMEL Né (e) le 21 décembre 1988 à Chamonix Mont-Blanc VETAGRO SUP CAMPUS VETERINAIRE DE LYON Année 2013 - Thèse n° FONCTIONNALITE, SECURITE ET IMMUNOGENICITE DE TROIS NOUVEAUX VACCINS ENCODANT LA TERT CANINE, FELINE OU HYBRIDE DESTINES A UN FUTUR USAGE THERAPEUTIQUE CONTRE LES CANCERS DU CHIEN ET DU CHAT THESE Présentée à l’UNIVERSITE CLAUDE-BERNARD - LYON I (Médecine - Pharmacie) et soutenue publiquement le 2 juillet 2013 pour obtenir le grade de Docteur Vétérinaire par Gabriel CHAMEL Né (e) le 21 décembre 1988 à Chamonix Mont-Blanc 1 2 Départements et corps enseignant du campus vétérinaire devLyon de VETAGRO SUP Civilité Nom Prénom Unités pédagogiques Grade M. ALOGNINOUWA Théodore Unité pédagogique Pathologie du bétail Professeur M. ALVESDEOLIVEIRA Laurent Unité pédagogique Gestion des élevages Maître de conférences Mme ARCANGIOLI Marie-Anne Unité pédagogique Pathologie du bétail Maître de conférences M. ARTOIS Marc Unité pédagogique Santé Publique et Vétérinaire Professeur Maître de conférences Contr M. BARTHELEMY Anthony Unité pédagogique Anatomie Chirurgie (ACSAI) actuel Mme BECKER Claire Unité pédagogique Pathologie du bétail Maître de conférences Unité pédagogique Pathologie morphologique et clini Maître de conférences Contr M. BELLI Patrick que des animaux de compagnie actuel Unité pédagogique Pathologie morphologique et clini Mme BELLUCO Sara Maître de conférences que des animaux de compagnie Mme BENAMOUSMITH Agnès Unité pédagogique Equine Maître de conférences M. BENOIT Etienne Unité pédagogique Biologie fonctionnelle Professeur M. BERNY Philippe Unité pédagogique Biologie fonctionnelle Professeur Mme BONNETGARIN Jeanne-Marie Unité pédagogique Biologie fonctionnelle Professeur Mme BOULOCHER Caroline Unité pédagogique Anatomie Chirurgie (ACSAI) Maître de conférences M. BOURDOISEAU Gilles Unité pédagogique Santé Publique et Vétérinaire Professeur M. BOURGOIN Gilles Unité pédagogique Santé Publique et Vétérinaire Maître de conférences Unité pédagogique Biotechnologies et pathologie de l Maître de conférences Contr M. BRUYERE Pierre a reproduction actuel Unité pédagogique Biotechnologies et pathologie de l M. BUFF Samuel Maître de conférences a reproduction M. BURONFOSSE Thierry Unité pédagogique Biologie fonctionnelle Maître de conférences Maître de conférences Contr M. CACHON Thibaut Unité pédagogique Anatomie Chirurgie (ACSAI) actuel Unité pédagogique Pathologie médicale des animaux M. CADORE Jean-Luc Professeur de compagnie Mme CALLAITCARDINAL Marie-Pierre Unité pédagogique Santé Publique et Vétérinaire Maître de conférences M. CAROZZO Claude Unité pédagogique Anatomie Chirurgie (ACSAI) Maître de conférences Unité pédagogique Pathologie médicale des animaux M. CHABANNE Luc Professeur de compagnie Mme CHALVETMONFRAY Karine Unité pédagogique Biologie fonctionnelle Maître de conférences M. COMMUN Loïc Unité pédagogique Gestion des élevages Maître de conférences Maître de conférences Stagi Mme DE BOYER DES ROCHES Alice Unité pédagogique Gestion des élevages aire Mme DELIGNETTEMULLER Marie-Laure Unité pédagogique Biologie fonctionnelle Professeur M. DEMONT Pierre Unité pédagogique Santé Publique et Vétérinaire Professeur Maître de conférences Contr Mme DESJARDINS PESSON Isabelle Unité pédagogique Equine actuel Mme DJELOUADJI Zorée Unité pédagogique Santé Publique et Vétérinaire Maître de conférences Unité pédagogique Pathologie médicale des animaux Mme ESCRIOU Catherine Maître de conférences de compagnie M. FAU Didier Unité pédagogique Anatomie Chirurgie (ACSAI) Professeur Unité pédagogique Pathologie morphologique et clini Mme FOURNEL Corinne Professeur que des animaux de compagnie M. FRANCK Michel Unité pédagogique Gestion des élevages Professeur M. FREYBURGER Ludovic Unité pédagogique Santé Publique et Vétérinaire Maître de conférences M. FRIKHA Mohamed-Ridha Unité pédagogique Pathologie du bétail Maître de conférences M. GENEVOIS Jean-Pierre Unité pédagogique Anatomie Chirurgie (ACSAI) Professeur Mme GILOTFROMONT Emmanuelle Unité pédagogique Biologie fonctionnelle Professeur M. GONTHIER Alain Unité pédagogique Santé Publique et Vétérinaire Maître de conférences Mme GRAIN Françoise Unité pédagogique Gestion des élevages Professeur M. GRANCHER Denis Unité pédagogique Gestion des élevages Maître de conférences Mme GREZEL Delphine Unité pédagogique Santé Publique et Vétérinaire Maître de conférences Unité pédagogique Biotechnologies et pathologie de l M. GUERIN Pierre Professeur a reproduction Mme GUERINFAUBLEE Véronique Unité pédagogique Santé Publique et Vétérinaire Maître de conférences Unité pédagogique Pathologie médicale des animaux Mme HUGONNARD Marine Maître de conférences de compagnie M. JUNOT Stéphane Unité pédagogique Anatomie Chirurgie (ACSAI) Maître de conférences M. KECK Gérard Unité pédagogique Biologie fonctionnelle Professeur M. KODJO Angeli Unité pédagogique Santé Publique et Vétérinaire Professeur 3 Maître de conférences Stagi Mme LAABERKI Maria-Halima Unité pédagogique Santé Publique et Vétérinaire aire M. LACHERETZ Antoine Unité pédagogique Santé Publique et Vétérinaire Professeur Mme LAMBERT Véronique Unité pédagogique Gestion des élevages Maître de conférences Mme LE GRAND Dominique Unité pédagogique Pathologie du bétail Maître de conférences Mme LEBLOND Agnès Unité pédagogique Santé Publique et Vétérinaire Professeur Mme LEFRANCPOHL Anne-Cécile Unité pédagogique Equine Maître de conférences M. LEPAGE Olivier Unité pédagogique Equine Professeur Mme LOUZIER Vanessa Unité pédagogique Biologie fonctionnelle Maître de conférences Unité pédagogique Pathologie morphologique et clini M. MARCHAL Thierry Professeur que des animaux de compagnie Inspecteur en santé publiqu Mme MIALET Sylvie Unité pédagogique Santé Publique et Vétérinaire e vétérinaire (ISPV) Maître de conférences Stagi Mme MICHAUD Audrey Unité pédagogique Gestion des élevages aire M. MOUNIER Luc Unité pédagogique Gestion des élevages Maître de conférences M. PEPIN Michel Unité pédagogique Santé Publique et Vétérinaire Professeur Unité pédagogique Pathologie morphologique et clini M. PIN Didier Maître de conférences que des animaux de compagnie Unité pédagogique Pathologie médicale des animaux Mme PONCE Frédérique Maître de conférences de compagnie Mme PORTIER Karine Unité pédagogique Anatomie Chirurgie (ACSAI) Maître de conférences Maître de conférences Stagi Mme POUZOTNEVORET Céline Unité pédagogique Anatomie Chirurgie (ACSAI) aire Mme PROUILLAC Caroline Unité pédagogique Biologie fonctionnelle Maître de conférences Mme REMY Denise Unité pédagogique Anatomie Chirurgie (ACSAI) Professeur M. ROGER Thierry Unité pédagogique Anatomie Chirurgie (ACSAI) Professeur M. SABATIER Philippe Unité pédagogique Biologie fonctionnelle Professeur M. SAWAYA Serge Unité pédagogique Anatomie Chirurgie (ACSAI) Maître de conférences Maître de conférences Contr Mme SEGARD Emilie Unité pédagogique Anatomie Chirurgie (ACSAI) actuel Mme SERGENTET Delphine Unité pédagogique Santé Publique et Vétérinaire Maître de conférences Maître de conférences Contr Mme SONET Juliette Unité pédagogique Anatomie Chirurgie (ACSAI) actuel M. THIEBAULT Jean-Jacques Unité pédagogique Biologie fonctionnelle Maître de conférences M. VIGUIER Eric Unité pédagogique Anatomie Chirurgie (ACSAI) Professeur Unité pédagogique Pathologie morphologique et clini Maître de conférences Contr Mme VIRIEUXWATRELOT Dorothée que des animaux de compagnie actuel M. ZENNER Lionel Unité pédagogique Santé Publique et Vétérinaire Professeur 4 Remerciements A Monsieur le Professeur Frédéric BERARD De la faculté de médecine de Lyon, Pour nous faire l’honneur d’accepter la présidence de ce jury de thèse, Hommages respectueux A Monsieur le Docteur Ludovic FREYBURGER Du campus vétérinaire de Lyon de VETAGRO SUP, Pour avoir encadré ce travail avec rigueur et disponibilité. Pour tous vos conseils avisés qui m’ont été précieux à la fois pour cette thèse mais également pour l’élaboration de mon projet professionnel. Sincères remerciements A Madame le Docteur Frédérique PONCE Du campus vétérinaire de Lyon de VETAGRO SUP, Pour avoir accepté de juger ce travail. Pour m’avoir ouvert les yeux sur le monde passionnant de la cancérologie vétérinaire. Pour votre gentillesse, votre enthousiasme et vos conseils dont j’espère pouvoir profiter encore quelques années. Avec toute ma gratitude et ma reconnaissance. 5 6 Sommaire Remerciements ............................................................................................................... 5 Sommaire ........................................................................................................................ 7 Table des illustrations ................................................................................................... 10 Table des tableaux ........................................................................................................ 12 Table des abréviations .................................................................................................. 13 Introduction – Les cancers du chien et du chat ............................................................ 17 Partie 1 : Etude Bibliographique .................................................................................. 23 I. Relations entre cancer et système immunitaire .................................................. 23 a. Immunité anti-tumorale et immunosurveillance ............................................. 24 b. Immunité et réaction inflammatoire pro-carcinogène ................................. 27 II. Immunothérapies anticancéreuses .................................................................. 32 a. Principe général des immunothérapies anticancéreuses. ................................ 32 i. Les immunomodulateurs ............................................................................ 32 ii. Les immunothérapies spécifiques de cible ................................................ 34 b. Les immunothérapies chez les carnivores domestiques .............................. 39 i. Les immunomodulateurs utilisés chez les carnivores domestiques ............ 39 ii. Les immunothérapies spécifiques de cible chez les carnivores domestiques. ............................................................................................................... 42 III. La Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) ............................................. 45 a. Structure et fonction de la télomérase ............................................................ 46 b. La télomérase est impliqué dans la genèse et l’entretien de plusieurs tumeurs chez l’homme et l’animal .................................................................................... 49 c. Thérapies anti-télomérase ............................................................................... 52 i. Inhibiteurs de télomérase ............................................................................ 52 ii. Virothérapies spécifique de la TERT ........................................................ 53 7 iii. Immunothérapies anti-TERT .................................................................... 54 IV. Les vaccins ADN ............................................................................................ 59 a. Fonctionnement et propriétés immunologiques des vaccins ADN ................ 59 b. Amélioration du potentiel des vaccins ADN .............................................. 64 c. Avantages et inconvénients des vaccins ADN ............................................... 67 i. Caractéristiques biologiques ....................................................................... 67 ii. Caractéristiques technologiques ................................................................ 69 d. Plasmides ADN disponibles en santé animale ............................................ 72 V. Conclusion partielle ........................................................................................ 75 Partie 2: Etude Expérimentale ...................................................................................... 79 I. Matériel, méthodes et animaux .......................................................................... 79 a. Souris .............................................................................................................. 79 b. Plasmides .................................................................................................... 79 c. Peptides utilisés pour les études en modèle murin ......................................... 81 d. Peptides de la TERT canine ........................................................................ 82 e. Produits sanguins canins ................................................................................. 84 f. Cultures cellulaires ......................................................................................... 84 g. Transfection cellulaire................................................................................. 84 h. Western blots .............................................................................................. 85 i. Immunofluorescence et microscopie .............................................................. 85 j. Trap-assay ....................................................................................................... 86 k. Immunisation et électroporation in-vivo de souris Balb/c ou C57-BL/6 .... 89 l. Tests ELISPOT ............................................................................................... 89 m. Tests de cytotoxicité in-vivo ....................................................................... 90 n. Immunisation in-vitro de PBMCs canins .................................................... 91 o. Analyses statistiques des données ............................................................... 92 8 II. Résultats .......................................................................................................... 93 a. Les trois plasmides sont fonctionnels in-vitro ................................................ 93 b. Les trois constructions ADN encodant les TERT animales sont à l’origine d’enzymes non fonctionnelles et absentes des nucléoles .................................................. 95 c. Les plasmides pDUV5, pCDT et pUF2 induisent une forte réponse immune cellulaire cytotoxique après immunisation et électroporation chez la souris.................... 98 d. Un répertoire de lymphocytes T spécifiques de la TERT canine existe chez le chien sain ............................................................................................................ 105 III. Discussion ..................................................................................................... 111 Conclusion .................................................................................................................. 115 Bibliographie .............................................................................................................. 117 9
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