Cloning and functional analysis of a Caspase gene BmCaspase-X in Bombyx mori

2015·4.5 MB·

by  Jin-Ye, Zhang

昆虫学报!"#$%&#’(’)’*+"$,+&+"$!!"#"$%&’()!)*"*#$;(;,;&) -./$(’0(12*’34056780&’()0’*0’(2
家蚕 T#&/#&,家族基因 4’@#*"#*+AB的
克隆与功能分析
张金叶(!&! 赵元(! 潘敏慧&!2! 刘9迪&! 鲁9成&!2!!
"(:重庆师范大学动物生物学重庆市重点实验室!重庆M’(22(%&:西南大学家蚕基因组国家重点实验室!重庆M’’+(1%
2:西南大学农业部蚕桑功能基因组和生物技术重点实验室!重庆M’’+(1#
摘要! &目的’本研究旨在克隆获得家蚕:’(;98(’.+L>$B>$D家族基因!并通过aF!/技术初步分析其在家蚕细胞
水平细胞凋亡中的功能( &方法’ 用6ZF!末端快速扩增方法"C>B/- >AB@/_/6>%/.? ._6ZF!D?-$! a!LS#克隆家蚕
L>$B>$D家族一个新基因!用aF!/和流式细胞术初步分析该基因在家蚕细胞凋亡中的功能( &结果’将克隆获得的
家蚕L>$B>$D家族基因命名为:(?$0-$01WP!其全长为& (’) 8B!开放阅读框长为( M;M 8B!编码M;+ >>!分子量为
)+:* 5Z>!等电点为):&;( GAL>$B>$DEc含有L>$B>$D特有的结构位点( 系统进化分析表明!GAL>$B>$DEc与家蚕
<LS同其他昆虫L>$B>$DEM同源物先聚在一起!再与具有长前体结构域的昆虫其他因子聚为一类( aF!/初步结果
显示该基因干扰后没有出现明显的细胞凋亡( &结论’GAL>$B>$DEc具有典型L>$B>$D特征!属于L>$B>$D家族成员(
目前aF!/实验结果表明:(?$0-$01WP未能引起家蚕细胞凋亡的改变( 本文为进一步研究该基因的功能奠定基础(
关键词! 家蚕% :(?$0-$01WP% 基因克隆% aF!/% 细胞凋亡
中图分类号! T;1199文献标识码! !99文章编号!’M)ME1&;1"&’()#’*E’;(;E’+
T$("’"L #"2 )C".*’("#$#"#$%&’&()# T#&/#&,L,",4’@#*"#*+AB ’"
4&’356 ’&%(
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[email protected]\%.AD%C\:&aD$"@%$’ J[D6@.?D- L>$B>$D_>A/@\#D?DN>$-D?.A/?>%D- :(?$0-$01WP/? :2(’.+!
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L>$B>$D_>A/@\:O[\@.#D?D%/6>?>@\$/$$[.ND- %[>%GAL>$B>$DEc>?- <LS._%[D$/@5N.CA6@"$%DCN/%[
L>$B>$DEM [.A.@.#$_C.A.%[DC/?$D6%$_/C$%@\! >?- %[D? 6@"$%DCN/%[ L>$B>$DADA8DC$N/%[ @.?#BCD6"C$.C
$%C"6%"CD-.A>/? _C.A.%[DC/?$D6%$:aF!/._:(?$0-$01WP/? GASEIW]( 6D@@$-/- ?.%6>"$D$/#?/_/6>?%
>B.B%.$/$D__D6%:&L.?6@"$/.?’ J[D?DNGAL>$B>$DEc! N/%[ %[D%\B/6>@6[>C>6%DC/$%/6$._L>$B>$D_>A/@\!
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基金项目$国家自然科学基金项目" 2((+&&1;!2(&+&)’)#
作者简介$张金叶!女!(;+;年;月生!河北保定人!博士!讲师!研究方向为凋亡调控机制!SEA>/@$\4g’;(1b(12:6.A
!通讯作者L.CCD$B.?-/?#>"%[.C!SEA>/@$@"6[D?#b$N":D-":6?
收稿日期aD6D/=D-$&’()E’(E()%接受日期!66DB%D-$&’()E’)E(;
99;&’ 昆虫学报!"#$ %&#’(’)’*+"$ ,+&+"$ )*卷
99细胞凋亡是一种高度保守的机体稳态调控机 6897主要试剂
制!从秀丽隐杆线虫?$1&’.5$;>+#+01)1*$&0到哺乳动 F>L@)RL@)VD>$%S7%C>6%及氨苄青霉素钠盐购自
物‘>AA>@细胞凋亡程序的启动最终均会导致一类 上海生物工程技术有限公司( 所有引物均由上海生
半胱氨酸天冬氨酸特异蛋白酶"6\$%D/?DBC.%D/?>$D$
物工程技术有限公司合成( PC>6D昆虫细胞培养基购
N/%[ $BD6/_/6/%\_.C>$B>C%/6>6/- CD$/-"D$! L>$B>$D$#的
自P<GLQ%胎牛血清购自德国O!!公司%JC/g.@试剂)
活化( 从水螅Y\-C>到哺乳动物L>$B>$D普遍存在!
a!LS试剂盒购自<?=/%C.#D?公司%‘#L@)H!J>^ 酶)
但其数目在不同物种间差异很大!其中线虫中已经 &
cEP>@)<OJP)ZF!片段纯化试剂盒)B‘Z(*EJ载体)
发现M 个"I[>[>A! (;;*#!海葵 !6%/?/>C/>中) 个!
ZF!连接试剂盒及 aF!酶抑制剂购自大连宝生物
黑腹果蝇3.’0’-5+)$ (1)$&’*$0#1.中+ 个"R"A>C>?-
公司%‘E‘Hl反转录试剂盒)-FJO$及J+ a/8.‘!cJ‘
Z."A>?/$! &’’’#!冈比亚按蚊 !&’-51)10*$(;+$1和
埃及伊蚊 !1>10$1*9-#+中分别是 (’ 个和 (( 个 S7BCD$$aF!/I\$%DA购自OC.AD#>公司%JC>?$&RO@"$
"GC\>?%1#$)2! &’’*#!人类 K’(’0$-+1&0中有(& 个 ZF!‘>C5DC)质粒抽提试剂盒购自北京全式金生物技
"L[.N-["C\1#$)2!&’’*% S65[>C%1#$):!&’’*#!紫色 术有限公司%胶回收试剂盒购自Q‘SP!(
球海胆 ,#.’&*9)’"1&#.’#/0-/.-/.$#/0中已达到 2( 个 68:7家蚕 X0<RD_K6 细胞系总 ;<!的提取及
"a.8DC%$.? 1#$)2! &’’1#( 目前家蚕中已报道的有) .><!合成
个"X[>?#1#$):! &’(’#( 这类酶分为两类111炎症
用OGI 清洗密度为 *’K i;’K状态良好的
反应组和细胞凋亡组!其中凋亡组又分为起始因子
GASEIW]( 家蚕细胞( i& 次后加入( AHJC/g.@!弃
和效应因子两个亚家族!前者前体结构域由约*’ 或
液( 参照JC/g.@aD>#D?%试剂说明书方法提取细胞
更多个氨基酸构成!而后者仅含有约 2’ 个氨基酸
总aF!( 按照反转录试剂盒操作说明合成 6ZF!
"h"D?%D$EOC/.C>?- I>@=D$D?! &’’M#( 至今!专一性
第一条链(
L>$B>$D炎症因子似乎仅存在于哺乳动物中( 凋亡
68=7引物设计与;!TH扩增
L>$B>$D因子以无活性酶原单体形式在细胞中合成!
且拥有一个共同结构域!即前体结构域和一个名为 从FLG<"[%%B$33NNN:?68/:?@A:?/[:#.=#下载
-肽酶L(M.的催化结构域( 其中!催化结构域由两 其他物种L>$B>$D同源基因!设定SE=>@"D为’"由于
个亚单位组成!大亚基约&’ 5Z>"B&’#!小亚基约(’ 物种间存在较大差异#!分别与家蚕;c基因组数据
5Z>"B(’#( 一旦酶原的蛋白水解加工开始!这两个 库)蛋白预测数据库)SIJ数据库进行 G@>$%O或
亚单位形成异源二聚体!而活性 L>$B>$D酶是由两 G@>$%?比对分析%将初步得到的家蚕基因序列再次
个这样的异源二聚体组成( L>$B>$D针对以天冬氨
放到FLG<数据库"[%%B$338@>$%:?68/:?@A:?/[:#.=3
酸结尾的四肽氨基酸序列具有强烈特异的裂解活性
G@>$%:6#/#中进行在线比对!如果预测家蚕基因和其
"J>@>?/>? 1#$):! (;;+% P>C6/>EL>@=.1#$):!(;;;!
他相应同源 L>$B>$D基因具有相同的结构域!则该
F/6[.@$.?! (;;;#( L>$B>$D特 有 的 结 合 位 点
家蚕预测基因则被认为是家蚕 L>$B>$D同源基因(
"H3J3YP#和活性位点"T!3La3P#在除了黑腹果
I I a T
在此过程中获得家蚕的( 条 L>$B>$D同源基因!由
蝇外的物种中高度保守"Z.C$%\? 1#$):! (;;;#( 与
于该基因与其他物种 L>$B>$D家族同源基因存在差
保守的催化结构域相反!前体结构域在 L>$B>$D成
员间存在显著变化( 异!未找到完全一致同源物!故命名为 :(?$0-$01W
本研究利 用 6ZF! 末 端 快 速 扩 增 "C>B/- P( 根 据 预 测 的 :(?$0-$01WP 基 因 序 列 设 计
>AB@/_/6>%/.? ._6ZF!D?-$! a!LS#方法从家蚕细胞 :(?$0-$01WP基因片段引物"表(#!以反转录好的家
系中扩增获得一个家蚕 L>$B>$D新成员!并对其进 蚕 细 胞 GASEIW](6ZF! 为 模 板 克 隆 获 得
行aF!/初步检测其参与细胞凋亡的情况!为进一 :(?$0-$01WP基因片段( 在此基础上!以:(?$0-$01W
步研究该蛋白在家蚕凋亡中的作用奠定基础( P片段为依据分别设计其 )p和 2pa!LS引物"表
(#( :(?$0-$01WP片段的 OLa扩增采用 &) #H体
67材料与方法 系!反应条件为先;Me预变性2 A/?%然后;Me变性
2’ $!)’:*e退火( A/?!+&e延伸;’ $!2’ 个循环%
6867供试材料 最后+&e终延伸(’ A/?( 其)p和2p序列的克隆严
家蚕胚胎组织细胞系 GASEIW]("O>? 1#$):! 格按照<?=/%C.#D? PD?Da>6DC试剂盒操作程序进行(
&’’)#由本细胞研究室建立)保种( ZY)’菌株购自 反应结束后!取( #H反应液用(K的琼脂糖凝胶电
上海生物工程技术有限公司( 泳检测( 然后按照胶回收试剂盒说明进行胶回收(
*期 张金叶等$ 家蚕L>$B>$D家族基因:(?$0-$01WP的克隆与功能分析 99;&(
表67本研究所使用的引物
E#3$,67O-’0,-&C&,2’"*+,&*C2%
引物名称 引物序列")p$2p# 用途 产物长度"8B#
OC/AD?>AD OC/ADC$D^"D?6D OC/ADC"$>#D OC.-"6%$/gD
GAL>$B>$DEc(cid:130)h !JPP!L!PJP!LP!!!!JL!!JJ!LE2p :(?$0-$01WP片段扩增
(&’&
GAL>$B>$DEc(cid:130)a JJ!P!JP!LJLPLJJ!JLPLLP !AB@/_/6>%/.?._:(?$0-$01WP_C>#AD?%
PD?Da>6DC)p(cid:130)a LPJLPLJLP!JLLPJPLPJ!!PJ :(?$0-$01WP)p端扩增 ,
PD?Da>6DC)?p(cid:130)a P!JJL!!LPJLLJJLJLLPJ!LLJJ !AB@/_/6>%/.?._:(?$0-$01WP)pD?- (’M(
PD?Da>6DC2p(cid:130)h !PPL!JPL!PPPPL!!!P!PP!P!J :(?$0-$01WP2p端扩增 ,
PD?Da>6DC2?p(cid:130)h JJ!LJLLPPP!!!LL!JL!L!L!P !AB@/_/6>%/.?._:(?$0-$01WP2pD?- 11)
GAL>$B>$DEc/(cid:130)h P!!P!!LPLJJJPJJ!!J!J :(?$0-$01WP干扰片段扩增
+&M
GAL>$B>$DEc/(cid:130)a JJJLLJL!P!J!L!!LJJJL !AB@/_/6>%/.?._:(?$0-$01WP/?%DC_DCD?6D-_C>#AD?%
将回收产物与B‘Z(*EJ载体(1e连接过夜!转化到 #H结合缓冲液!经流式细胞仪检测细胞凋亡情况(
大肠杆菌 ZY)’感受态细胞!经蓝白斑筛选后挑阳
性菌落提取质粒!通过OLa和双酶切检测后送上海 97结果
英峻基因有限公司测序(
68?7生物信息学分析 98674’@#*"#*+AB的克隆及序列分析
通过PD?G>?5数据库下载其他物种 L>$B>$D家 以 :(%W,\H( 6ZF! 为 模 板! 扩 增 获 得
族成员蛋白序列)利用本地G@>$%程序同家蚕基因组 :(?$0-$01WP全长为& (’) 8B"图(#!包含了完整的
;c数据库)家蚕 SIJ数据库和 LZI 数据库进行比 开放阅读框"图&#( 利用本实验室建立的家蚕;c
对分析%蛋白质多序列比对分析使用 L@"$%>@c 基因组数据库网站"[%%B$33$/@5N.CA:$N":D-":6?33
"(:*2#)基因Qah)酶切位点分析使用G/.S-/%)系统 $/@5-83#上的基因组数据信息!对 :(?$0-$01WP进行
进化树的构建使用 ‘SP!M:’ 软件%蛋白质结构域) 染色体定位分析!结果显示该基因定位在家蚕第&’
等电点)跨膜区的预测分别使用如下在线工具 号染色体上( 其Qah长( M;M 8B!编码M;+ 个氨基
[%%B$33NNN:D7B>$\:.C#3BC.$/%D![%%B$33NNN:D7B>$\: 酸!分子量为)+:* 5Z>!等电点为):&;( 在线结构
.C#3%..@$3B/(cid:130)%..@:[%A@和 [%%B$33NNN:68$:-%":-53 域分析表明!在 GAL>$B>$DEc的第(2* 个氨基酸到
$DC=/6D$3J‘Y‘‘3( 第2+; 个氨基酸之间!有一个称为 L!I6的保守结
68@72&;<!的合成 构域!其中第(2* ,&1’ 位氨基酸之间为大亚基位置
以获得的 :(?$0-$01WP为依据!设计 -$aF!引 所在!第 &*( ,2+; 位氨基酸之间为小亚基位置所
物"表(#( 以验证测序后的菌株菌液为模板!扩增 在!特异的五肽结构域位于第&M+ ,&)* 位氨基酸间
含有功能结构域催化中心区段!并采用切胶回收的 "图&#(
方法纯化 OLa产物( 然后依此为模板!用 J+ 利用 ‘SP!M:’ 软 件 邻 接 点 法 构 建 的
a/8.‘!cJ‘ S7BCD$$aF!/I\$%DA合成试剂盒合成 GAL>$B>$DEc与其他物种 L>$B>$D凋亡因子系统发
-$aF!( 育树显示! GAL>$B>$DEc首先与家蚕的执行因子
68A72&;<!细胞转染及其细胞周期检测 <LS聚在一起!随后与具有自我激活能力的起始因
分别设GASEIW]( 正常细胞对照组)-$aF!转 子L>$B>$DE* 同源物具为一大类(
染组)-$aD- 转染组和转染试剂组!每组2 个复孔( 98974’@#*"#*+AB干扰后 X0HRD_K6 细胞凋亡
选用1 孔细胞培养板!每孔置& o(’M 个细胞!(& [ 检测
后采用H/B._D6%>A/?DJ‘&’’’ 试剂"<?=/%C.#D?#进行转 :(?$0-$01WP-$aF!转染 GASEIW]( M* [ 后凋
染!具体操作严格按着试剂说明书执行( 亡细胞的流式检测显示"图M#$各处理组 P( 期细胞
-$aF!转染细胞M* [后!收集细胞%经OGI"BY 百分率分别为 *’:(MK!+1:)+K!+1:M2K和+;:++K%
+:M#漂洗& 次!用+’K冷乙醇吹打均匀!Me下固定 P&期细胞百分率分别为1:1*K!*:1)K!+:)(K和
M* [%随后用OGI洗涤& 次!将(’1 细胞悬于&’’ #H 1:)MK%I 期细胞百分率分别为 (2:(*K!(M:+*K!
结合缓冲液中!加入(’ #H!??D7/? lEh<JL和) #H (1:’)K和 (2:1*K%细胞凋亡率分别是 2*:+2K!
O<!轻轻混匀后室温避光反应() A/?%最后加入2’’ 2):+(K!2;:+&K和M(:2(K( %& 检验结果显示$与对
99;&& 昆虫学报!"#$ %&#’(’)’*+"$ ,+&+"$ )*卷
图(9:(?$0-$01WP全长克隆OLa电泳结果
h/#:(9S@D6%C.B[.CD$/$._OLaBC.-"6%.__"@@E@D?#%[ 6ZF!._:(?$0-$01WP
!$:(?$0-$01WP片段OLa产物OLaBC.-"6%._:(?$0-$01WP:‘$JC>?$&RO@"$ZF!‘>C5DC%(,&$:(?$0-$01WP片段:(?$0-$01WP_C>#AD?%:
G$2p端OLa产物OLaBC.-"6%._%[D2pD?-:(,&$2p端片段2pD?-_C>#AD?%:L$)p端OLa产物OLaBC.-"6%._%[D)pD?-:(,&$)p端片段)p
D?-_C>#AD?%:
图&9:(?$0-$01WP的核酸和氨基酸序列
h/#:&9F"6@D.%/-D>?- -D-"6D- >A/?.>6/- $D^"D?6D$._:(?$0-$01WP
紫色矩形框内分别表示该基因Qah的起始密码子和终止密码子%红色矩形框内为五肽特征序列% 红色划线处为O.@\"!#尾巴% 括号内为
催化结构!其中双向箭头处表示大小亚基的分界( O"CB@DCD6%>?#@DCDBCD$D?%$%[D/?/%/>%/.?6.-.?>?-$%.B6.-.?._%[D#D?D%CD-CD6%>?#"@>C8.7
CDBCD$D?%$%[D_/=DBDB%/-D$D^"D?6D$%CD-@/?DCDBCD$D?%$%[DO.@\"!# %>/@%%[D8C>65D%$CDBCD$D?%%[D6>%>@\$%$%C"6%"CD!>?-%[D8/-/CD6%/.?>@>CC.N$
/?-/6>%D%[D-DA>C6>%/.?B./?%._%[D8/#.C$A>@@$"8"?/%:
照处理相比!2个处理组细胞凋亡率B值均大于’:’)! 亡网络之间起到关键调控作用的细胞内蛋白酶家
细胞凋亡变化均不显著( 这一结果表明!:(?$0-$01WP 族( 依据它们的功能可分为凋亡因子"如哺乳动物
表达变化并没有引起家蚕细胞凋亡的改变( 中的L>$B>$DE2!E1!E+!E* 及E;#和炎症因子"如人类
中的L>$B>$DE(!EM!E) 及E(& 和小鼠中的 L>$B>$DE(!E
:7讨论 (( 及E(&#!而 L>$B>$DE&!E(’ 和E(M的功能几乎不能
定位( 其中!参与凋亡的 L>$B>$D因子可以依据其
L>$B>$D家族是一个能够在炎症反应和细胞死 作用机制分为起始因子"L>$B>$DE* 和E;#和执行因子
*期 张金叶等$ 家蚕L>$B>$D家族基因:(?$0-$01WP的克隆与功能分析 99;&2
图29基于氨基酸序列构建的L>$B>$D凋亡因子系统发育树"邻接法#
h/#:29O[\@.#D?D%/6%CDD._>B.B%.%/6L>$B>$D8>$D- .? %[D>A/?.>6/- $D^"D?6D$"?D/#[8.CE4./?/?#AD%[.-#
GA$ 家蚕:’(;98(’.+%LD/?LD6>$B>$DM$纹黄豆粉蝶?’)+$019.9#51(1%LD/?LDLSZE2$秀丽隐杆线虫?$1&’.5$;>+#+01)1*$&0%ZA$黑腹果蝇
3.’0’-5+)$(1)$&’*$0#1.%ZB$拟暗果蝇3.’0’-5+)$-01/>’’;0"/.$%P#$家鸡D$))/0*$))/0%PA$大蜡螟D$))1.+$(1))’&1))$%Y$$人K’(’0$-+1&0%
a?$大鼠U$##/0&’.41*+"/0:进化树分支点数值代表(’’’次循环检验置信度%标尺表示遗传距离( J[D=>@"D$.?%[DB[\@.#D?D%/6%CDD8C>?6[
/?-/6>%D%[D6.?_/-D?6D8\(’’’ 6\6@D$%D$%:J[D$6>@DCDBCD$D?%$%[D#D?D%/6-/$%>?6D:
"L>$B>$DE2!E1 和E+#( 目前已报道"L[.N-["C\! 域往往含有明显的功能域!如 ZSZ!L!aZ或 Z<Z
J[>C>5>? >?- G[>%!&’’*#的 L>$B>$D均有) 个保守 等( 然而本论文基因GAL>$B>$DEc虽然其前导区长
的半胱氨酸位点!即 T!LaP!本研究克隆获得的家 度大于(’’ 个氨基酸!但不包含ZSZ和L!aZ等结
蚕:(?$0-$01WP"由于其功能暂不确定!故暂时命名 构域!因此根据前导结构域长短来划分 L>$B>$D类
:(?$0-$01WP#的编码蛋白具有保守的半胱氨酸位 别的方法不太适合该基因( 此外!该基因功能结构
点!符合 L>$B>$D的典型特征!因此我们认为本研究 域后仍有(’’ 个氨基酸左右!与其他物种进行序列
获得的 :(?$0-$01WP确实属于 L>$B>$D家族基因( 比对后也发现同源性不是太高( 这些结果表明!虽
此外!与炎症相关的 L>$B>$D分子的前体结构域长 然L>$B>$D分子具有明显的保守性!但仍有多样性
度大于(’’ 个氨基酸相比!凋亡相关 L>$B>$D分子 的存在(
的前体结构域长度则小于2’ 个氨基酸!长前体结构 为了更进一步研究 :(?$0-$01WP的功能!本研
99;&M 昆虫学报!"#$ %&#’(’)’*+"$ ,+&+"$ )*卷
图M9流式细胞仪检测:(?$0-$01WP干涉后GASEIW](细胞周期及凋亡率的变化
h/#:M9L[>?#D$/? 6D@@6\6@D>?- >B.B%.%/6C>%D$._GASEIW]( 6D@@$>_%DCaF!/._:(?$0-$01WP-D%D6%D- 8\[email protected]\%.AD%C\
!$正常细胞组F.CA>@6D@@#C."B%G$:(?$0-$01WP-$aF!处理组:(?$0-$01WP-$aF!%CD>%AD?%#C."B%L$-$U1>组-$U1>%CD>%AD?%#C."B%Z$
转染试剂组JC>?$_D6%/.? CD>#D?%%CD>%AD?%#C."B% P($ ZF!合成前期 J[DD>C@\$%>#D._ZF!$\?%[D$/$% I$ ZF!合成期 J[D$%>#D._ZF!
$\?%[D$/$%P&$ZF!合成后期J[D@>%D$%>#D._ZF!$\?%[D$/$:
究采用aF!/技术!选取该基因与家蚕其他基因同 A.$^"/%.!!1>10$1*9-#+:F&01"#:+’"51(2G’)2:+’):!2*"2#$22(,
源性较低的功能序列片段作为基因沉默靶点( 目前 2M):
L[.N-["C\<!J[>C>5>?G!G[>%PR!&’’*:L>$B>$D$E>?"B->%D:?’(-2
结果表明该基因沉默未能引起家蚕细胞凋亡的改
:+’"51(2B590+’)2::+’"51(2G’)2:+’):!()("(#$(’,&+:
变( L>$B>$D家族基因除了凋亡功能外还具有其他
L..BDCZ‘! PC>?=/@@DZU!H.ND?8DC#DCL!&’’;:J[D/?$D6%6>$B>$D$:
功能!如参与炎症反应等!据此不能排除该基因具有 !-’-#’0+0!(M"2#$&M+,&)1:
其他功能( 而且!系统发育进化分析结果也印证了 Z.C$%\? H! L.@"$$/O!! T"/?? H‘! a/6[>C-$.? Y!R"A>CI! (;;;:
这一点$GAL>$B>$DEc除了同昆虫的 L>$B>$DEM 聚为 ZaQFL! >? D6-\$.?DE/?-"6/8@D3.’0’-5+)$ 6>$B>$D:B.’"2<$#)2
!"$>2,"+2H,!!;1"*#$M2’+,M2(&:
一小类外!还同具有长前体结构域的起始因子
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L>$B>$DE* 的昆虫同源物-CD--)以及I%C/6>3ZCD>A和
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后很可能有其他具有近似功能的基因起到补充作
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研究该基因的具体功能( BC.BDC%/D$._["A>? 6>$B>$D_>A/@\ADA8DC$:?1))31$#5 3+@@1.:!1
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