昆虫学报 !"#$%&#’(’)’*+"$,+&+"$，!"#$%%&，’（% ’）：(&()(*% +,,-%(’(./$0/ """"""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""" 小菜蛾对阿维菌素抗性基因的连锁图谱的构建 !"#$ 罗倩2，$，冯夏2，吕利华2，!，万树青$，陈焕瑜2 （2< 广东省农业科学院植物保护研究所，广州 ’2%/(%；$< 华南农业大学资源环境学院，广州 ’2%/($）摘要：世界性害虫小菜蛾 -).#/))$01)’2#/))$（KH）田间种群已对阿维菌素药剂产生了高抗药性。本研究以小菜蛾对阿维菌素的抗性品系、敏感品系和回交群体组建作图家系，再利用>LKM技术构建小菜蛾对阿维菌素抗性基因的连锁图谱。用2%组>LKM引物组合对未经药剂处理的小菜蛾成虫N->选择性扩增，共获得2%((条可区分的N->条带，$&2条带具有多态性，!$ 检验表明只有2$1个位点符合2O2（-P%<%’），其中的22$个构成$*个连锁群，其总长度为2$$$<&=!；用2%组>LKM引物对经药剂处理后存活的小菜蛾成虫N->扩增，所得的N->条带中有’(个条带符合分离比2O2，经!"E4"QCA1<%对多态性位点分析，只有32!(.2’、32!2.(和32!(.$标记位点位于同一连锁群，1 个>LKM标记与抗性基因的遗传距离分别为%=!，*<1=!和21<2=!。比较分析得出，抗性基因所在的连锁群是第’ 连锁群。结果显示>LKM连锁图谱对小菜蛾对阿维菌素的抗性监测具有很好的应用潜力。关键词：小菜蛾；阿维菌素；抗性基因；>LKM标记中图分类号：R0/’ 文献标识码：> 文章编号：%(’(./$0（/ $%%&）%’.%(&(.%& #%&’()* +(,,%&) -. /*0%01(&2* 1- (3(+*21%& %& 14* 5%(+-&53(2’ +-14 60%&) !"#$ +(/’*/ KST R5":2，$，L3-U V5"2，KS K5.W7"2，!，X>- ,@7.R5:G$，YW3- W7":.Z7（2 2< M6":? MA8?C=?58: ICDC"A=@ +:D?5?7?C，U7":GF8:G >="FC4# 8B >GA5=76?7A"6 ,=5C:=CD，U7":G[@87 ’2%/(%，Y@5:"；$< Y866CGC 8B -"?7A"6 ICD87A=CD ":F 3:J5A8:4C:?D，,87?@ Y@5:" >GA5=76?7A"6 S:5JCAD5?#，U7":G[@87 ’2%/($，Y@5:"） !301/(21：\@CF5"48:F]"=Q48?@，-).#/))$01)’2#/))$（KH）（KCE5F8E?CA"：M67?C665F"C），5D": 54E8A?":? 5:DC=? ECD? 5:=A7=5BCA87DJCGC?"]6CD":F@"DFCJC68ECF@5G@ ACD5D?":=C ?8"JCA4C=?5:"668JCA?@C^8A6FH +: ?@5DD?7F#， >LKM ^"D 7DCF ?8 =8:D?A7=? " 65:Q"GC 4"E 8B ACD5D?":=C ?8 "JCA4C=?5: 5: F5"48:F]"=Q 48?@H \@C 4"EE5:G B"4565CD =8:D5D?CF 8B ?@C D7D=CE?5]6C D?A"5:，?@C "]"4C=?5:.ACD5D?":? D?A"5: ":F ?@C5A ]"=Q=A8DD EA8GC:#H > ?8?"6 8B2 %(( N-> ]":FD ":F $&2 E86#48AE@5= 68=5 ^CAC "4E65B5CF 7D5:G 2% =84]5:"?58:D 8B >LKM EA54CADH Y@5. D97"AC（ $）":"6#D5D 5:F5="?CF ?@"? 8:6# 2$1 ]":FD B5? ?@C DCGACG"?58: A"?58 8B 2O2（- P %<%’）5: ?@CDC ! 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DBE0.E；R：敏感品系 !XBD./SOV3’W’/.CSOX1. ! ’SEBOV；+：阿维菌素抗性品系!BXBD./SOV3E.’O’SBVS ’SEBOV；"：敏后符合分离比(J(的位点被用于连锁图的构建和分感品系与阿维菌素抗性品系杂交所得第(代 "O1OB1P.V.EBSO&V；析。 (K,8：未经药剂处理的,8个回交后代个体YVZOTOZWB1’&U S>. WVSE.BS.ZXB/0/E&’’CE&P.V[Q $ 结果与分析用5BCDB0.E 7F; 对 (,7 个有效位点连锁分析（表,），结果表明在所有获得有效位点中的((,个可 $"! 小菜蛾对阿维菌素抗性的连锁图谱构建与分构成,<个连锁群（图,），还有((个位点没有连锁关析系，不能被组进连锁图谱。这些构建连锁群的位点用(;组!"#$ 引物组合对未经药剂处理的 ,8 占有效位点的)(F;M，占总多态性位点的8(F7,M。头小菜蛾成虫?@!扩增，电泳检测的选择性扩增产由,<个连锁群构成的小菜蛾对阿维菌素抗性连锁物结果见图 (。经过 !"#$ 带型的分析和统计（表图谱覆盖基因组的总长度为 ( ,,,F* /5，每个连锁 (），共获得( ;88条可区分的?@!条带，每个引物组群的标记数,K((个，每个连锁群长度范围为7F,K 合扩增的?@!带数为 *;K(8,条，平均每组引物产 ,;,FL /5，平均长度为 87FL* /5，!"#$ 标记的遗传生(;8条带；在所有 ?@!条带中，有 ,*( 条带具有距离范围为(F;:K,:F,; /5。多态性，每个引物组合扩增的多态性?@!带数为,; E期罗倩等：小菜蛾对阿维菌素抗性基因的,J6!连锁图谱的构建 B?? 表! "#$%不同引物组合产生的多态性分布 &’()*! +,-./,(0.,121341)561/47,-68*2*/’.*9(59,33*/*2."#$%4/,6*/:16(,2’.,12- 符合454的位点引物组合扩增带（条）多态性（条） 6’&#/#++#)7/’"8%)0%.#*).*9 占总带数的比例（<） !"#$%"&’$(#)*+#’) ,$-.#/#%0(*)01（(*)01） !’.2$’"-3#1$（(*)01）带数（条）占多态性的比例（<） =*+#’’/*$-.#/#%0(*)01 :;$(%"’/(*)01 =*+#’’/-’.2$’"-3#1$ >484 ?? @? 4A BCD4E 4FDCC >48@ GH @H ? AEDHH ?D?C >48A 44@ AE 4? BCDE? 4ED4C >48B 4@H @H G BEDHH ?DEH >48E 4HE @E G AFDHH CDE? >@84 44C AH 4G FADAA 4FD4H >@8@ 4B@ @F 4B EADCE GDCF >@8A C? @E 44 BBDHH 4@DFB >@8B 4@A @A G AGD4A ?DA@ >@8E ?H BH 4E A?DEH @4DBA 合计I’+*. 4HBB @?4 4@A BEDAG 44D?C 图@ 部分连锁图谱 J#7K @ 6#)L*7%7"’;- :?C 昆虫学报 !"#$%&#’(’)’*+"$,+&+"$ A;卷表! 连锁群特征表 "#$%&! "’#()*+,%(-.#/&/’+01* ! 连锁群编号标记数目连锁群长度标记的平均 !连锁群编号连锁群长度标记的平均遗传图距 ! 标记数目遗传图距 !"#$%&’ -*./’()0 !"#$%&’&()*+ ! !"#$%&’ !"#$%&’&()*+ &()*+#), .%($’(1 2’#&34（56） 78’(%&’.%($’( ! &()*+#), -*./’()0.%($’(1 2’#&34（56） 78’(%&’.%($’( "#3’(8%2（56） !! "#3’(8%2（56） 9 : 9;<= >;> > @ >= 9<;A !! 9? @ AB<@ 9C<: 9:<9@ !! 9C @ @9<; 9;<@@ A B 9@<; ><9? !! 9= : =<:A B : A;<> 9>; A :9<: C<>C ? > >=9 > @<> 99<:@ !! >> : 9?<= :<:C = @ :=@ > >@ @<> 9: : @:<= CB !! >A @ >;<> B > >C<> 9:<9; !! >B @ 99<: @? @ ?AA<>; 9: = 9B;C A BCB头小菜性位点分析，只有@个标记位点进入同一连锁群（图蛾成虫 G-7进行扩增（图@），所得的 G-7条带中有 :），其余的未有进入。这个连锁群含有与抗性连锁的标记D96:H9A、D969H:和 D96:H>，该连锁群被称为抗性基因连锁群，这些7E!N标记与抗性基因间的遗传距离分别为; 56、C<@ 56和9@<9 56。因此推断标记 D96:H9A是与抗性基因紧密连锁的7E!N标记。比较分析抗性连锁群和连锁图谱，在连锁图谱中 D96:H 9A、D969H:和 D96:H> 三个 7E!N标记均位于同一连锁群，即第A连锁群中，因此推断小菜蛾的阿维菌素抗性基因位于第A连锁群。图: 与小菜蛾阿维菌素抗药性连锁的7E!N标记图谱 E"&, : !"#$%&’.%+)07E!N.%($’(1%11)5"%3’LM"34 图@ 引物D96:的选择性扩增产物检测 %/%.’53"#(’1"13%#5’)034’L"%.)#L/%5$.)34 E"&, @ F’2’53"8’%.+2"0"5%3")#*1"#& +(".’(5)./"#%3")#D96: 6：G-7标准 G-7 .%($’(；F：敏感品系 7/%.’53"#H1*15’+3"/2’ 3 讨论 13(%"#；I：阿维菌素抗性品系7/%.’53"#H(’1"13%#313(%"#；@;JAA：处理存活的 >B 个回交后代个体 F*(8"8)(1 )0 34’ /%5$5()11 +()&’#K3(’%3’LM"34%/%.’53"#, 目前阿维菌素类药剂已被大量地用于小菜蛾防 @期罗倩等：小菜蛾对阿维菌素抗性基因的$%&’连锁图谱的构建 80/ 治，国内部分地区小菜蛾田间种群已经对其产生了 23+5R&S，&I %&，*45 TE，&I TU，23+5 T*，!""#F B45NKJ 4JV.ILI+N 较高的抗药性（冯夏等，!""#）。本研究在选育出小 VK.AJK;V3I,CW$KL;+GIG=45,+=KNIJ+3AVK45N,4;=4VI5NI4JK5NH4,- JK=3，$%&"’%%()*%+,"’%%(O 56"(2/"+3+%O 78/O，8（8 #）：#@P!"F［程菜蛾的阿维菌素高抗品系基础上，利用双相遗传特罗根，李凤良，韩招久，李忠英，陈之浩，!""#F 小菜蛾对杀虫性建立小菜蛾的阿维菌素抗性连锁图谱的作图家双和杀螟丹抗药性遗传的CW$随机扩增多态性研究O 昆虫学系，再利用 $%&’(银染技术对该家系进行抗性连锁报，8（8 #）：#@P!"］作图，用获得的##!个$%&’多态性有效位点构建了 23+5T*，&I<2X，&I%&，*45TE，#//"F Y5I=I4. ;+VK;= K5 =3+J+=3KN LK; !)个连锁群，即小菜蛾连锁图谱。*+,-+. 等（#///） G<,,+GGIK5 ;+V;KN<,=IK5 45N ;4IGI5R ,4HH4R+ JK=3 I5 .4;R+ G,4.+O 9&8:;+&54.86&%"&.(%768’/6’，（8）：@!P@1F［陈之浩，刘传秀，李凤曾对小菜蛾抗苏云金杆菌基因家系进行的 $%&’扩良、韩招久，#//"F小菜蛾继代繁殖大量饲养方法研究初报O 贵增分析，用获得的 !"0个 $%&’标记组建成 1# 个连州农业科学，（8）：@!P@1］锁群，而且#个连锁群对应#条染色体，分析其实验 %+5RX，23+5*U，&<&*，?KU，&’.,8"*，!（! !）：1@P 分析显示该虫的染色体数有变化，而且其变化范围 1)F［冯夏，陈焕瑜，吕利华，莫严，卢悦昌，谢齐贺，张小雄， !""#F 广东小菜蛾对阿维菌素的抗性研究O 华南农业大学学报，较大，为!89#)" 条。本研究中获得 !) 个连锁群， !（! !）：1@P1)］与其他研究者的结论相近，但本研究尚不能建立 *+,-+.CS，S4345&E，:4H4G35I-[>，#//@F B45NKJ4JV.ILI+NVK.AJK;V3I, $%&’标记连锁群与染色体的对应关系。:;4<= 和 CW$ NILL+;+5,+G H+=\++5 G=;4I5G KL NI4JK5NH4,- JK=3（&+VINKV=+;4： 2.4;-+（#//0）报道鳞翅目昆虫的染色体数差异较 ’.<=+..IN4+）G#?8(#@、>#?#(8和 >#?8(!）均位于第 @ 连锁 UVK5KJ+<=IN4+）L;KJ?4.4AGI4O $’,"86O 768O，1（1 8）：1@QP10"O Y^H4.?，];IR3= CE，#//0F >M4.<4=IK5 KL ;+GIG=45,+，,;KGG(;+GIG=45,+ 45N 群，而且确定了它们与抗性基因的遗传距离，其中 GA5+;RIGJ KL 4H4J+,=I5 45N =+L.#?8(#@是与抗性基因连锁最紧密的 $%&’ 标记。 VKV<.4=IK5KL $%&"’%%()*%+,"’%%(（&+VINKV=+;4：’.<=+..IN4+）O !&%%’"8/+1 *+,-+.等（#///）在标记小菜蛾抗苏云金杆菌基因 2/"+3+%+486(%#’,’(.6;，)0：8)#P8)1O 时，将该抗性基因定位在第0连锁群，即第0染色体 &I:]，S4KX]，T3+5R[T，#///F S+5+=I,454.AGIG45N,;KGG(;+GIG=45,+KL 上，而且标记定位出与 2;A#$, 对应的抗性基因 $%&"’%%()*%+,"’%%( =K 4M+;J+,=I5O $%(/" $.+"’6"8+/，!@（Q）：#!P#8F ［李腾武，高希武，郑炳宗，#///F 小菜蛾对阿维菌素的抗性遗传（!"#(#）。本实验结果将为小菜蛾对阿维菌素的抗分析及交互抗性研究O 植物保护，!（@ Q）：#!P#8］性基因的精确定位提供理论基础。但是由于利用回 &ITU，23+5 T*，23+5R &S，&I %&，*45 TE，!""!F S+5+=I, 454.AGIG KL 交群体获得的连锁图谱完整性差，而且 B$’C、$%&’ NIJ+3AVK;+GIG=45,+ 45N N+.=4J+=3;I5 ;+GIG=45,+ I5 NI4JK5NH4,- JK=3 等分子标记技术无法区分基因型 $$和 $4，因此要（$%&"’%%( )*%+,"’%%(）HA;+V;+G+5=4=IK54.NILL+;+5,+ 454.AGIGO 7+&";A’," 想获取与连锁群直接相关的标记，还需对与抗性有 <;8/(0+&./(%+154.86&%"&.(%768’/6’，#（@ 8）：@/PQ#F［李忠英，陈之浩，程罗根，李凤良，韩招久，!""!F 小菜蛾对杀虫双和溴氰关的标记进行克隆和测序，并制成探针进行原位杂菊酯抗性遗传的B$’C分析O 西南农业学报，#（@ 8）：@/PQ#］交研究。 &I6,+.中绘和水稻所罗文永博士在实验操作和数据分析方面提制遗传连锁图的宏O 遗传，!（@ 1）：1#0P1!#］ D4JH;KK-E，%;I=G,3>%，?45I4=IG:，#/)/F ?K.+,<.4;2.K5+：$&4HK;4=K;A 供的帮助。 ?45<4.O 2K.NDV;I5R*4;HK;WU：2K.NDV;I5R*4;HK;&4HK;4=K;AO 8Q1 参考文献（!"#"$"%&"’） P8QQO :45RT*，!"""F :3+ GI=<4=IK5 45N +6V+,=4=IK5 KL I5G+,= ;+GIG=45,+ I5 K<; 234DE，*45 DD，#///F >G=4H.IG3J+5= KL 4 5KM+. ,+.. .I5+ L;KJ $%&"’%%( ,K<5=;AO 2/"+3+%+486(% -/+A%’@4’，10（!）：/0 P #"1F［唐振华， )*%+,"’%%(L4= HKNI+GO -+.’(/ 0+&./(% +1 2/"+3+%+4*，!/（!）：#!#P !"""F 我国昆虫抗药性研究的现状及展望O 昆虫知识，10（!）： #!QO /0P#"1］ EDV 昆虫学报 0.*&89*454/4#%.&:%9%.& PV卷 !"#$%&，’(#")*’+，,--./ 0#"12%13**42($%5267189"2:2;2:*<$;52656%9* 法> 遗传，A（E U）：UUPCUUB］ :2%9=*6$; !"#$%&> ’("()%*&+（?$6@），,A（B (）：..CDE> O9$YM，!#6YS， ’?，?$ ’，H*YY，O92$OY，W5#6=OH，AVV,/ F2;G，H2=*";I，J(**)*"K，I*5L#6;K，4#6@*?**!，H2"6*;K，M"5%*"; ’26;%"$8%5262< +M?G (56)#=* :#3 2< %9* ;5() Q2":（3456$7 54"%）> +，G2% N，G#(*:#6 N，0$53*" K，O#7*#$ K，,--P/ +M?G：# 6*Q 0.*&89*454/> :%9>，E（E E）：EDUCE-A/［朱玉芳，谭远德，万春玲， %*8965R$*<2" ST+ <56=*"3"56%56=> ,-./(%. 0.%)+ 1(+(&".2，AU（A,）：鲁成，贺一原，周泽扬，向仲怀，AVV,/ 家蚕+M?G连锁框架图谱 EEV.CEE,E/ 的构建> 昆虫学报，E（E E）：EDUCE-A］ W$XJ，!#2YM，Y#6=OZ，AVVA/ +;5:3(*#6@"#35@:*%92@;$;*@<2";5(4*" ;%#5656=#6@=*( 3"*;*"4#%526> ’("()%*&+，AE（U）：UUPCUUB/［许绍斌，陶玉芬，杨昭庆，AVVA/ 简单快速的ST+银染和胶保存方（责任编辑：黄玲巧）

Linkage mapping of resistance to abamectin in the diamondback moth using AFLP marker

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