Untersuchungen über die Brauchbarkeit der Komplementbindungsmethode für die Serumdiagnose der Tuberkulose des Rindes mit dem Antigen von Prof. Dr. Besredka, Institut Pasteur zu Paris: Inaugural-Dissertation zur Erlangung der Veterinär-Medizinischen Doktor

11 Pages·1922·0.648 MB·German

by  Dr. Kurt Meyer, Erich George (auth.)

AUS DER BAKTERIOLOGISCHEN
ABTEfLUXG DES RUDOLP·VTRCHOW-KRANKENHAUSES ZU BERLIX
ABTEfLUNGSVOUSTEHER: DR. KUR'r' MEYER
UNrrERSUOHUNGEN TIBER DIE BRAUOH
BARKEI1' DER KOlIPLElIENrrBINDUNGS
lIETHODE FUR DIE SERU1IDIAGNOSE DER
TUBERKULOSE DES RINDES MIT DEM
ANTIGEN VON PRO:F. DR. BESREDKA,
INSrrrrUT PASTEUR ZU PARIS
INAUGURAL-DISSERTATION
ZUR ERLANGUNG DER
VETERINAR-MEDIZINISCHEN DOKTORWURDE
DER TIERARZTLICHEN HOCHSCHULE
ZU BERLIN
VORGELEGT vox
ERICH GEORGE
PRAKT.TIERARZT AUS REPPEX I. D. XEUMARK
BERLIN 1921
Springer-Verlag Berlin Heidelberg GmbH
1!J22
Berlin, den 30. Januar1922
Gedruckt mit Genehmigung der Tieriirztlichen Hochschule zu Berlin
R.eferent: Geh. Med.-R.at Prof. Dr. Frosch
ISBN 978-3-662-22856-2 ISBN 978-3-662-24790-7 (eBook)
DOI 10.1007/978-3-662-24790-7
Die Tuberkulose istwohl die am meisten Opfer fordernde Krankheit
des Rindes. Durch die wenig eiweifs- und fettreiche Ernahrung und
die schlechte Korperpflege wahrend des Krieges ist die Widerstands
fahigkeit del' einzelnen Tiere erheblich herabgesetzt worden, so daB es
heute nichts Seltenes ist, wenn sogar in kleinen Viehbestanden tuber
kulosekranke Rinder vorgefunden werden. Die wahllose Aufzucht auch
von Jungtieren, die von tuberkulosen Elterri abstammen, nul' um zu
naohst einmal den stark verkleinerten Bestand aufzufiilIen, half del'
Verbreitung del' Tuberkulose die Wege offnen. Die Behandlung und
Heilungdel'Rindertuberkuloseistein soschwieriges, ja soaussichtsloses
Unternehmen, daBdel'Tierarztgezwungenist,immerund immerwieder
dem Besitzer die Abschlachtung anzuraten.
Es bleibt nul' ubrig, so fruhzeitig wie moglich die Krankheit zu er
kennen und die Ausmerzung del' tuberkulosen Tiere zu veranlassen.
Die Schwierigkeiten abel', die Krankheit selbst in vorgeschrittenen
Fallen zu erkennen, sind so groB, daB die verschiedensten Methoden
ausgearbeitet und naehgepruft wurden, um zu einer Fruhdiagnose zu
gelangenund mitihrer Hilfe durch rechtzeitige Beseitigungdel'erkrank
ten Tiere die Ansteekungsgefahr zu verringern.
So wurden die klinischen und bakteriologischen Untersuchungs
methoden hauptsaohlich auf die Erkennung del' ojjenen Tuberkulose
angewandt. Auf die Feststellung diesel' Formen kommt es besonders
an, denn sie sind die Hauptansteckungsquellen ffir gesunde Tiere.
Die mikroskopische Untersuchung des Lungenachleimes, des Darminhaltes,
des Gebarmutterauaflusses und del' Milch wurdenftir die Diagnose herangezogen.
Diesubkutane, kutane, intrakutaneundkonjunktivaleTuberkulinreaktionensind
besonderswertvoll fiil'die Erkenmmg del"gosohloasenen Formen der Tuberkulose,
E. George: Komplementbindungsmethode fUr die Serumdiagnose usw. 439
jedoch nicht so einwandfrei, daB sie allein zur sioheren Feststellung ausreichen,
Sieleistenaberin VerbindungmitanderenMethodenausgezeichnetediagnostisohe
Hille.
Von serologischenMethoden wurden zunschst die AgglutinationundPrszipi
tationauf ihre Brauchbarkeit gepriift, ohne jedoch praktisch verwertbare Ergeb
nisse zu liefern.
Ferneristdie vonBO'TdetundGengou1) eingefiihrte undvon Wassermannund
seinen Schulern-) fiir die klinische Diagnostik nutzbar gemachte Komplement
bindungsmethodeinAnwendung gebrachtworden. Sie beruht auf dem Nachweis
vonReaktionsstoffen- Antikorpem- im Blutserum, die sichunterderWirkung
einesim Korper anwesendenoder vorhandengewesenenAntigens gebildethaben.
Die gebildetenAntikorpersind spezifisch,d. h. siegeben nur mit dem homologen
Antigen, in dem uns interessierendenFall mitTuberkelbazillen oder deren Stoff
wechselprodukten- dem Tuberkulin- die Bindung des Komplements, wahrend
mit Seren, die durch andere Bakterien erzeugte Antikorper enthalten, keine Bin
dung hervorgerufen wird. Eine Ausnahme von der Spezifitat der tuberkulosen
Antikorper bilden allerdings die durch andere saurefeste Bakterien oder deren
Stoffwechselprodukte erzeugten Antikorper. So geben Seren, die Antikorper
enthalten, die durch die Wirkung des Bacillus tuberculosis entstanden sind,
ebenfalls spezifische Bindung mit Tuberkulin, wie Bang undAndersen3) nach
wiesen,
InderVeterinarmedizinwurde dieKomplementbindungsmethodezurDiagnose
der Rindertuberkulose zuerst durch Henneper;und BackS) angewandt, Wahrend
erstererfeststellte, daB bisweilengegen das als"Impfstoff"benutzteAntigenAnti·
korper nachgewiesen werden konnten, fand letzterer, daB Sera tuberkulosefreier,
geringgradig oder hochgradig tuberkuloser Rinder bei der Komplementablenkung
das gleiche Verhalten zeigten.
Ruppel und Rickmann6) halten auf Grund ihrer eingehenden Versuche die
Feststellungvon Antituberkulinbesonderain denFallenfiirwertvollundniitzlich,
wennRinderzum ZweckederTauschungbei Einfuhrin Quarantaneanstaltenoder
in gerichtlichen Fallen durch wiederholte subkutane Injektionen von Tuberkulin
unempfindlichgemacht sind, sodaBdas Tuberkulinin Form der Thermoreaktion
als Diagnostikum versagt. Durch die mehrmalige Tuberkulineinspritzung wiirde
die Bildung von Antikorpern vermehrt und dann die Komplementbindung um so
aussichtsreicher als Hilfsmittel zur Tuberkulosefeststellung zu verwerten sein,
Wenn bei hochgradig tuberkulosenTieren dieKomplementbindung bisweilen des
wegen versage, weil keine Antikorper im Serum enthalten waren, sei dies ohne
groBeBedeutung,dadieseFalleleichtklinischermittelt,werden.
Weber und-DieteTlen7) fanden in einer allerdings nur kleinen Versuchsreihe
sowohl bei spontantuberkulosen wie bei kiinstlichinfizierten Rindem spezifische
Antistoffe, wahrend sie bei normalen Individuen keine Antikorper nachweisen
konnten.
Ganz vorziigliche Resultate will Hammer8) mit alkoholischen und Aceton
extrakten aus tuberkulosenOrganengemischtmit.PerlsuchtalttuberkulinalsAnti.
gen erhalten haben. Er untersuchte das Blut von 96 tuberkulosen Rindem und
erhielt nurbei 2TiereneinnegativesResultat. DiesebeidennegativenErgebnisse
glaubteer auoh noch daduroherklarenzu konnen, daBbei derAufnahmedes ana
tomischen Befundes ein kleiner Herd iibersehen sein konnte, Es wiirden also
100% positiv reagiert haben.
Durch dieseErgebnissewurdenBierbaum undBerdel9) angeregt, dieMethode
Hammers nachzupriifen. Sie verwandten ebenfalls alkoholische und Aceton·
extrakte gemischt mit Perlsuchtalttuberkulin, erhielten aber unter 120 unter-
440 E. George: Komplementbindungsmethode fur die Serumdiagnose
suchtenRindernnurbei35%positiveResultate.EinepraktischeBedeutungkonnen
sie der Hammerschen Methode nicht zuerkennen.
Rothe und Bierbaum10) fanden bei Versuchen, bei denen sie experimentell
30-50cernPerlsuchtvollbakterien, die jahrelangim Exsiccatorgetrocknet waren,
intravenoseinspritzten,sowohlbeituberkulosenalsbei nichttuberkulosenRindern
einen hohen Antikorpergehalt,
Bei 16 spontan tuberkulosen Rindern konnten sie niemals einen hoheren
Antikorpergehaltfeststellen, wahrendsie andererseits auch im Serum nicht tuber
kuloser Tiere eine geringe Menge Antikorper nachweisen konnten.
Brickertll) machte Komplementbindungsversuche mit Alttuberkulin. Die
Resultate,dieer in einerVersuchsreihe von 29leicht bisstarktuberkulosen Fallen
hatte, spricht er als geringwertig an.
Wyschelessky12) untersuchte 31Seren tuberkulosefreier und 83tuberkuloser
RinderaufKomplementbindung. Erhalt dieseserologischeUntersuchungsmethode
zurErkennungeiner aktivenTuberkuloseform des Rindesfur praktischunbrauch
bar. AlBAntigen benlitzte er in der Hauptsache Phymatin, 2. Tuberkelbazillen
emulsion und 3. eine Losung von Tuberkelbazillen in 2proz. Milcbsaurelosung.
Im Gegensatz zu diesen wenig befriedigenden Ergebnissen haben
nun neuerdings Hruska und Pfenninger13) tiber sehr gunstige Resultate
berichtet,diesie mitder KomplementbindungsmethodebeiVerwendung
des Antigensvon Besredka14) erzielten. Diesegiinstigen Resultate lieBen
vermuten, daBdasBesredkascheAntigenbesondereVorteileffirdenKom
plementbindungsversuchbiete.BeidergroBenWichtigkeiteinerm5glichst
genauen Tuberkulosefeststellung schien es wiinschenswert, die Ergeb
nisse Hruskas und Pfenningers nachzupriifen. Das Antigen Besredka,
das fiir die Versuche notig war, wurdevon Herm Professor Besredkader
bakteriologischen Abteilung des Rudolf Virchow-Krankenhauses Berlin
zur Verfugung gestellt. - Das Rinderblut wurde auf den SchlachthOfen
zu Frankfurt a. O. und Berlin stets von frisch geschlachteten Rindem
entnommen. Es konnte in jedem Fall die Autopsie sorgfaltig vor
genommen und jeder Irrtum in der Diagnose vermieden werden.
Bei den Versuchen wurde sowohl mit wechselnden Mengen Antigen
als auch mit wechselnden Mengen Komplement gearbeitet und bei
beiden Modifikationen keine nennenswerten Unterschiede in den Reak
tionen ermittelt. - In dieser Arbeit wird nur die Versuchsanordnung
von Hruska und Pfenninger mit absteigenden Dosen Komplement be
schrieben, da lediglich deren vorziigliche Ergebnisse mich bestimmten,
eine Nachpriifung der Arbeit vorzunehmen. .Die Sera wurden meist
am Tage der Blutentnahme, selten am folgenden Tage untersucht.
DieSerumgewinnung stief aufSchwierigkeiten, daauch beiden 24Stun
den abgestandenen Blutproben das abzentrifugierte Serum mancher
Tiere emeut Gerinnung zeigte, die sich auch nach nochmaligem Zentri
fugieren haufig wiederholte. Bei dem lnaktivieren, das durch halbstiin
diges Erwarmen im Wasserbad auf 56° vorgenommen wurde, trat in
der Halite der Falle noch eine Flockenbildung, offenbar Ausscheidung
von Fibrinogenresten ein.
der Tuberkulose desRindes mit dem Antigen von Prof. Dr. Besredka. 441
Durch nochmaliges Zentrifugieren wurden dann die Sera klar oder
wenigstens flockenfrei erhalten.
Als Antigen verwandte ich, wie bereits erwahnt, das von Besredka,
welches auf folgende Weise hergestellt wird:
Es werden 30tagige humane und bovine Kulturen, die auf der von
Besredka14) angegebenen peptonfreien, mit EiweiB und Eigelb in be
stimmter Menge vermischten Bouillon gewachsen sind, zusammenge
mischtundbei115*sterilisiert..Die FHissigkeit, die.~ichtopalescierend,
bacillenlos ist und kein Pepton und Glycerin enthalt, halt Besredka
fiir eine Mischung, die allen Forderungen entspricht, die man an ein
tuberkulOses Antigen stellen kann.
DasAntigen war in zugeschmolzenen Glasphiolen ubersandt worden.
Vor Gebrauch wurden die Glaser stark geschiittelt, um eine gleich
miiBige Verteilung zu verburgen, zumal sich in einigen Olasern ein ge
ringer Bodensatz bemerkbar machte.
Als Komplement wurde Meerschweinchenserum, frisch und voll
kommen klar zentrifugiert in der Verdiinnung 1 :15 mit isotonischer
Kochsalzlosung angewandt. Das hamolytisehe System bestand aus
5proz. Hammelblutkorperchenaufschwemmung, die mit der fur jeden
Versuch besonders bestimmten vierfach losenden Dosis eines hamoly
tischen Kaninchenserums sensibilisiert war.
Die Versuchsanordnung ergibt sich aus folgendem Schema:
I I
Antigen Besredka Inaktiviertes Rinderserum KompJement
0,15 eern 0,1 cern 0,25
0,15 cern 0,1 eern 0,2
0,15 eern 0,1 cern 0,15
0,1 eern 0,25
0,1 eern 0,2
0,1 ecrn 0,15
0,15 cern 0,25
0,15 ccrn 0,2
0,15 com 0,15
0,15
Alle Rohrchen wurden eine Stunde bei Zimmertemperatur und eine
Stunde im Brutschrank bei 370 gehalten. Dann wurde allen Glasern
0,5 ccm Blutkorperchenauischwemrmmg, die eine Viertelstunde zuvor
mit der vierfach losenden Do~is sensibilisiert war, zugefiigt und die
Reihe wiederum in den Brutschrankgestellt. Da manche Sera die Blut
kdrperchon stark agglutinierten, war haufiges Schiitteln erforderlich.
NachLosungderKontrollen wurdedas Resultatdes Versuchsabgelesen.
Ich habe im ganzen 28 Normalsera und 64 Sera von tuberkulosen
Rindern untersucht. Zur Berechnung der Starke der Reaktion habe
ich folgende Zeichen gewahlt:
442 E. George: Komplementbindungsmethode fUr die Serumdiagnose
1.VollstandigeHemmungder HamolyseinallendreiGlasern = ++.
2. Hemmung bei 0,15 em Komplement = +.
±.
3. Unvollstandige Hemmung bei 0,15cern =
4. Hamolyse = - .
Die tuberkulosen Sera habe ieh wie Hruska und Pfenninger naeh
dem Grad der Erkrankung in funf Gruppen eingeteilt.
I. Drusentuberkulose,
II. Lungen- und Drusentuberkulose.
III. Lungen-, Drusen- und Pleuratuberkulose.
IV. Lungen-, Drusen-, Pleura-, Peritoneal- und Eingeweidetuber
kulose.
V. Generalisierte Tuberkulose.
Von den28Normalseren waren 18= -, 7 = ±, 1= +,2 = ++.
Von diesen zwei voletandig hemmenden wirkte eines sehr stark agglu
tinierend auf die Blutkorperchen, so daB hierdureh vielleieht das Aus
±
bleiben der Hamolyse bedingt war. Auch eines, das Reaktion zeigte,
hatte etwas agglutinierende Wirkung.
Von den Fallen der GruppeI habeieh 26 untersucht. Das Ergebnis
war:
13= -, 9= ±, 3= + , 1='= + +.
Von den 24 Seren der Gruppe II waren:
7=-, ll= ±, 4=+, 2=++.
++
Ein Serum, das cine Reaktion zeigte, agglutinierte sehr stark.
Von 5 Seren der Gruppe II reagierten:
2=-, 3= +.
Von Gruppe IV wurden ebenfalls 5 Sera gepriift.
3= + , 2=++.
Von Gruppe V standen mir vier Sera zur VerfUgung.
1=-, 2=+, 1=++.
Sera von Fallen von Miliartuberkulose,die dieGruppeVIvon Hruska
und Pfenninger bilden, konnte ich nicht beschaffen.
Der Ubersicht wegen seien alle Ergebnisse noch in einer Tabelle
zusammengestellt:
± + ++
Gruppe T 13 9 3 1 26
~
II 7 11 4 2 24
"
III 2 0 3 0 5
IV 0 0 3 2 5
V 1 0 2 1 4
Sa. 23 20 15 6 64
der Tuberkulose des Rindes mit dem Antigen von Prof.Dr. Besredka. 443
In Prozenten ausgedruckt ergibt sieh also:
Hemmnngen uberhaupt Absolute Hemmungen
Normalsera 36,7% 10,8%
Gruppe I 50% 15,5%
II 70% 25%
., III 60% 60%
" IV 100% 100%
V 75% 75%
Zum Vergleieh seien die Ergebnisse von Hruska und Pfenninger
angefUhrt:
Hemmungen
Normalsera 2,2%
Gruppe I 59,4%
.. II 84,1%
III 94,7%
IV 94,4%
V 100,0%
VI 94,1%
Wenn man einen Vergleieh zieht und zunachst die Normalsera
ins Auge faBt, so ergibt sieh, daB wir eine grollere Zahl unspezifiseher
Reaktionen (10,8%) als jene Autoren (2,2%) haben, wobei wir nur die
absoluten Hemmungen berucksichtigen.
Andererseits haben bei den tuberkulosen Seren die franzosischen
Autoren eine weit grolsere Zahl von positiven Resultaten (84,5%) als
ieh (33%). Allerdings habe ich hierbei unvollstandige Hemmungen
nicht eingereehnet.
Es erscheint auffallig, daB Hruska und Pfenninger unvollstandige
Hemmungen, die bei meinem Material sehr haufig vorkamen, gar nicht
erwahnen, Es ist moglich, daB sie solehe Reaktionen als positiv ge
reehnethaben. Wurde ieh mieh diesem Vorgehen anschliefsen,so wtirde
sich allerdings die Zahl der positiven ebenfalls wesentlieh erhohen,
aber ieh hatte dann andererseits eine noeh grolsere Zahl unspezifiseher
Resultate zu verzeiehnen. Ieh glaube daher, wie dies ja auch sonst bei
der Bewertung der Komplementbindungsreaktionen ublich ist, diese
unvolletandigen Reaktionen nicht ohne weiteres als positive, sondern
nur als zweifelhafte ansehen zu durfen,
Urn unsere Differenzen zu erklaren, konnte man vielleieht daran
denken, daB das verwendetc Antigen Besredka auf dem Transport ge
litten hat. In samtlichen Glasern mit Antigen war jedoch cine gleich
maflige, leieht opaleseierende Bcschaffenheit festzustellen.
444 E. George: KomplementbindungsmethodefUrdie Serumdiagnose
Hruska und Pfenninger betonen, daB bei nur klinischer Festetellung
der Tuberkulose von 257 positiv reagierenden Tieren 145 = 56,4% der
tuberkulosen Rilider nicht erkannt worden waren und daB die Kemple
mentbindungsmethode somit imstande ist, die Tuberkulinprobe bei
Feststellung der Rindertuberkulose zu ersetzen.
Wenn ich die Resultate der subcutanen Tuberkulinprobe nach
08tertag16), der nur 13% Fehldiagnosen, und zwar zu gleichen Teilen
bei gesunden und tuberkulosen Tieren hatte, mit meinen Ergebnissen
bei der Komplementbindung, die bei normalen 10,8%, bei tuberkulosen
Rindern 67% betragen, vergleiche, muB ich unbedingt der Tuberkulin
probe den Vorrang lassen, weil die Zahl der Fehldiagnosen bei tuber
kulosen Rindem eine viel zu hohe ist und die Komplementbindungs
methode in der Praxisnicht so bequem ausgefuhrt werden kann wie die
Tuberkulinprobe. Vielleicht sind Rinderseren fur die Komplement
bindungsmethode uberhaupt wenig geeignet, da sie nicht selten in der
Serumkontrolle so stark agglutinieren oder konglutinieren, daB keine
Hamolyse auftritt, sondern beim Durchschutteln der Glaser Hemmung
vorgetauscht wird.
Schluf3folgerungen.
1. Von den 92 untersuchten Rinderseren zeigten 24 starkere Hem
mung, 27 sehwaohere Hemmung und 41 Hamolyse.
2. Von den 92 Seren wurde durch exakte Untersuchung bei der
Fleischbeschau bei 28 Tieren keine Tuberkulose festgestellt, von den
Seren dieser 28 Tiere hemmten 3 stark, 7 unvollstandig, 18 gar nicht.
3. Von den 92 Rinderseren entstammten50Tieren mit Drusen- und
Lungentuberkulose. Von diesen zeigten 10 starkere Hemmung, 20 un
vollstandige Hemmung und 20 Hamolyse.
Vondiesen 20negativen stammten 2 von Tieren mitoffener Lungen
tuberkulose.
4.Von92untersuchten Rinderseren waren 14von starktuberkuloaen
Tieren der Gruppe III, IV, V. Unterihnen zeigten II Hemmung, wah
rend 3 negativ ausfielen.
Unvollstandige Hemmungen wurden bei diesen Kategorien nicht
beobachtet.
5.Ausden Ergebnissen,dieichmitderKomplementbindungsmethode
nach Besredka hatte, ist festzustellen, daB
a) die recht oft zu beobachtenden unvollstandigen Hemmungen
nicht ohne weiteres auf cine tuberkul6se Infektion schlieBen lassen
und daher diagnostisch weder in positivem noch negativem Sinne ver
wertbar sind;
b) die Seren tuberkulosefreier, gering und hochgradig tuberkuldser
Rinder bei der Komplementbindung sowohl Hemmungen wie Hamo-