universidade de lisboa faculdade de farmácia abordagem genética da doença de alzheimer familiar

291 Pages·2017·5.29 MB·Portuguese

UNIVERSIDADE DE LISBOA
FACULDADE DE FARMÁCIA

ABORDAGEM GENÉTICA DA DOENÇA DE ALZHEIMER
FAMILIAR: DO DIAGNÓSTICO AO TRATAMENTO
Leticia de Bastos

Relatório de estágio orientado pela Professora Doutora Isabel Antolin Rivera e pelo Dr.
Carlos José Faria Diogo Cortes, e coorientado pela Dra. Joana Selada Domingues.

MESTRADO EM ANÁLISES CLÍNICAS

2018
UNIVERSIDADE DE LISBOA
FACULDADE DE FARMÁCIA

ABORDAGEM GENÉTICA DA DOENÇA DE ALZHEIMER
FAMILIAR: DO DIAGNÓSTICO AO TRATAMENTO
Leticia de Bastos

Relatório de estágio orientado pela Professora Doutora Isabel Antolin Rivera e pelo Dr.
Carlos José Faria Diogo Cortes, e coorientado pela Dra. Joana Selada Domingues.

MESTRADO EM ANÁLISES CLÍNICAS

2018
IX Mestrado em Análises Clínicas
Relatório de Estágio

Prefácio

O presente trabalho é parte integrante do plano de estudos do Curso de Mestrado em
Análises Clínicas pela Faculdade de Farmácia da Universidade de Lisboa. Este documento é
composto por duas partes fundamentais, que visam alcançar objetivos distintos, mas
interligados.
A primeira é composta pelo relatório de estágio, onde é apresentado todo o trabalho
desenvolvido e os conhecimentos adquiridos, de uma forma sintetizada, nas áreas da
Bioquímica, Hematologia e Microbiologia. O estágio de Bioquímica decorreu no Serviço de
Patologia Clínca do Hospital de Cascais e o estágio das valências de Hematologia e
Microbiologia foram realizadas no Serviço de Patologia Clínca do Hospital Nossa Senhora da
Graça, em Tomar, tendo tido deste modo o privilégio de conhecer a dinâmica de dois Serviços
distintos.
A segunda parte é composta pela dissertação, que foi desenvolvida na área da genética,
com o tema: “Abordagem genética da doença de alzheimer familiar: do diagnóstico ao
tratamento.” A escolha do tema deveu-se ao interesse em aprofundar os conhecimentos
relativamente à doença de Alzheimer, aliada à importância da genética no possível diagnóstico
e tratamento precoce.

Leticia de Bastos
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IX Mestrado em Análises Clínicas
Relatório de Estágio

Resumo

O presente trabalho é parte integrante do plano de estudos do Mestrado em Análises
Clínicas da Faculdade de Farmácia da Universidade de Lisboa e constitui um dos principais
elementos da avaliação final. Este documento encontra-se dividido em duas partes
fundamentais. A primeira parte consiste no relatório de estágio e a segunda é constituída pela
dissertação.
No relatório de estágio é apresentado o local onde decorreram os estágios e as atividades
desenvolvidas em cada valência, focando os aspetos mais relevantes no que diz respeito à
experiência desenvolvida e ao enquadramento dos conhecimentos adquiridos no contexto real
de trabalho num Laboratório e da sua aplicação à Clínica.
O estágio foi realizado em Laborotórios de Serviços de Patologia Clínica de dois
hospitais. No Hospital Dr. José de Almeida, em Cascais, decorreu o estágio de Bioquímica, no
período compreendido entre os dias 9 de janeiro e 10 de março de 2017. No Hospital da Nossa
Senhora da Graça, em Tomar, foram realizadas as valências de Hematologia e Microbiologia,
entre os dias 3 de abril e 4 de agosto de 2017.
Na dissertação, é apresentada uma revisão da literatura na qual é desenvolvido o tema:
"Abordagem genética da doença de Alzheimer Familiar: do diagnóstico ao tratamento".
A doença de Alzheimer (DA) de início precoce é a forma rara da doença (5-10% dos
casos diagnosticados), apresentando um padrão de hereditariedade autossómico dominante e
tendo essencialmente origem em mutações nos genes que codificam as presenilinas (PSEN1 e
PSEN2) e a proteína precursora amilóide (APP), que levam ao aumento do péptido Aβ42 e,
consequentemente, à perda de função e morte neuronal.
Atualmente, o diagnóstico definitivo desta patologia é obtido a partir da autópsia dos
tecidos cerebrais, pois os procedimentos de diagnóstico tradicionais da DA assentam
essencialmente na exclusão de outras causas de demência. Contudo, diversas pesquisas estão
centradas na possibilidade do diagnóstico precoce recorrendo a biomarcadores específicos, que
capturam tanto a extensão da patologia quanto os seus efeitos sobre a função cerebral, passando
de uma abordagem de diagnóstico de exclusão para um diagnóstico positivo. Os biomarcadores
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Leticia de Bastos
IX Mestrado em Análises Clínicas
Relatório de Estágio

encontram-se divididos em duas grandes categorias permitindo uma observação sequencial de
eventos relacionados com os processos fisiopatológicos da doença, sendo fundamentais para
uma possível caracterização da situação clínica do doente.
Relativamente ao tratamento, este é baseado essencialmente na sintomatologia, sendo
usados inibidores da acetilcolinesterase e antagonistas do recetor do N-Metil-D-Aspartato. No
entanto, diversos tratamentos baseados na etiologia encontram-se já em estudo e englobam, não
só a imunoterapia Aβ, mas também inibidores das secretases, da agregação do péptido Aβ, e da
fosforilação e agregação da proteína tau.
No futuro, os micro-RNAs (miRNAs), elementos reguladores da expressão de genes,
constituem biomarcadores promissores para o diagnóstico precoce e as tecnologias baseadas
em RNA de interferência poderão abrir novos caminhos para o tratamento da DA.

Palavras-chave: DA, APP, presenilinas, péptido Aβ, biomarcadores.

Leticia de Bastos
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IX Mestrado em Análises Clínicas
Relatório de Estágio

Abstract

The present work is an integral part of the study plan of the Masters in Laboratorial
Medicine of the Faculty of Pharmacy of the University of Lisbon and is one of the main
elements of the final evaluation. This document is divided into two fundamental parts. The first
part consists of the internship report and the second part consists of the monograph.
The internship report presents the place where the internships and activities developed
in each valency took place, introducing the most relevant aspects regarding the experience
developed and the framework of the knowledge acquired in the real context of work in a
Laboratory and its application to the Clinic.
The internship was carried out in Clinical Pathology Laboratories of two hospitals. At
the Dr. José de Almeida Hospital in Cascais, the biochemistry course was held from January 9
to March 10, 2017. At the Nossa Senhora da Graça Hospital in Tomar, the Hematology and
Microbiology, areas took place between April 3 and August 4, 2017.
In the monograph, a review of the literature in which the theme "Genetic Approach of
Familial Alzheimer's Disease: from Diagnosis to Treatment" is presented.
Early-onset Alzheimer's disease (AD) is the rare form of the disease (5-10% of
diagnosed cases), presenting an autosomal dominant inheritance pattern and essentially
originating from mutations in genes encoding presenilins (PSEN1 and PSEN2) and amyloid
precursor protein (APP), which lead to the increase of the Aβ42 peptide and, consequently, loss
of neuronal function and death.
Currently, the definitive diagnosis of this pathology is obtained from the autopsy of
brain tissues, since the traditional diagnostic procedures of AD are essentially based on the
exclusion of other causes of dementia. However, several studies are focused on the possibility
of early diagnosis using specific biomarkers, which capture both the extent of the disease and
its effects on brain function, moving from an exclusion diagnosis approach to a positive
diagnosis. Biomarkers are divided into two broad categories allowing a sequential observation
of events related to the pathophysiological process of the disease and are fundamental for a
possible characterization of the clinical situation of the patient.
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Leticia de Bastos
IX Mestrado em Análises Clínicas
Relatório de Estágio

Regarding treatment, this is based essentially on symptomatology, using
acetylcholinesterase inhibitors and N-methyl-D-Aspartate receptor antagonists. However,
several treatments based on the etiology are already under study and encompass not only Aβ
immunotherapy, but also inhibitors of secretases, aggregation of Aβ peptide, and
phosphorylation and aggregation of tau protein.
In the future, micro-RNAs (miRNAs), regulators of gene expression, are promising
biomarkers for early diagnosis and interference-based RNA technologies may open new
avenues for AD treatment.

Key words: DA, APP, presenilins, Aβ peptide, biomarkers.

Leticia de Bastos
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IX Mestrado em Análises Clínicas
Relatório de Estágio

Agradecimentos

É com satisfação que expresso o meu agradecimento a todos os que contribuíram para
que chegasse até aqui.
Aos meus pais, Glória e Fernando, pois sem eles nada disto seria possível. Obrigada por
tudo, pelos valores transmitidos, pelo amor e apoio incondicional que me têm dado ao longo da
vida.
À minha irmã por acreditar em mim e ter estado sempre presente quando lhe pedi ajuda.
Ao Patrick por todo o amor e paciência que tem demonstrado ao longo desta caminhada.
Aos colegas de mestrado, pelos momentos que passamos juntos, pela amizade, troca de
experiências e sabedoria.
Aos Professores do Mestrado em Análises clínicas, pela aprendizagem que
proporcionaram, em especial à Doutora Isabel Bettencourt, pela força que me deu quando a
minha vontade era desistir, à Doutora Isabel Rivera, pela orientação na dissertação e à Doutora
Cristina Marques, por todo o apoio no processo transição de local de trabalho/estágio.
Às minhas colegas de trabalho que fizeram com que a conciliação entre a minha vida
profissional e académica se tornasse mais fácil.
A todos, os meus sinceros agradecimentos.

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Leticia de Bastos
IX Mestrado em Análises Clínicas
Relatório de Estágio

Índice Geral

Relatório
Índice………………………………………………………………………………………….14
Índice de Figuras ……………………………………………………………………………...19
Índice de Tabelas...………………………………………………………………...…………21
Siglas e Abreviaturas …………………………………………………………………………23
1. Introdução ……………………………………………………………………………….27
1.1. Objetivo ……………………………………………………………………………..27
2. Caracterização dos Serviços de Patologia Clínica ……………………………………….28
2.1. Serviço de Patologia Clínica do Hospital Dr. José de Almeida …………………….28
2.2. Serviço de Patologia Clínica do Hospital Nossa Senhora da Graça ………………..30
3. Higiene e Segurança no Laboratório …………………………………………………….33
4. Fluxograma Geral ………………………………………………………………………..37
5. Amostras Inadequadas para Análise …………………………………………………….39
6. Controlo de Qualidade …………………………………………………………………..40
6.1. Controlo de Qualidade Interno ……………………………………………………..40
6.2. Avaliação Externa da Qualidade ……………………………………………………42
7. Valência de Bioquímica ………………………………………………………………….43
7.1. Bioquímica Clínica …………………………………………………………………43
7.2. Interferência da Hemólise, Icterícia e Lipémia nos Métodos Analíticos …………...90
7.3. Análise da Urina Tipo II ……………………………………………………………91
7.4. Avaliação da Urina a Tempo Determinado ……………………………………….103
8. Valência de Hematologia ………………………………………………………………105
8.1. Hemogramas……………………………………………………………………….105
8.2. Hemoglobina Glicada ……………………………………………………………..124
8.3. Eletroforese das Hemoglobinas ……………………………………………………126
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IX Mestrado em Análises Clínicas
Relatório de Estágio

8.4. Hemostase …………………………………………………………………………128
9. Valência de Microbiologia ……………………………………………………………..139
9.1. Marcha Laboratorial em Microbiologia …………………………………………...139
9.2. Exame Microscópico ………………………………………………………………141
9.3. Exame Cultural ……………………………………………………………………146
9.4. Testes de Identificação Presuntiva ………………………………………………...154
9.5. Teste de Identificação da Escherichia coli O157:H7 ……………………………..157
9.6. Teste para identificação de Streptococcus pneumoniae …………………………...158
9.7. Identificação de Microrganismos e Teste de Suscetibilidade aos Antimicrobianos 159
9.8. Teste Screening para Streptococcus do Grupo A ………………………………….162
9.9. Teste Screening para Streptococcus pneumoniae …………………………………162
9.10. Teste Screening para Legionella pneumophila ………………………………….163
9.11. Teste Screening para Clostridium difficile ……………………………………...164
9.12. Teste Screening para Campylobacter spp.…..…………………………………..166
9.13. Pesquisa de Vírus………………………………………………………………..167
9.14. Pesquisa de Micobactérias ………………………………………………………170
9.15. PCR em Tempo Real ……………………………………………………………175
9.16. Colheita de Produtos Biológicos e Processamento de Amostras ……………….176
9.17. Fluxograma para Identificação de Bactérias Gram Negativos ………………….202
9.18. Fluxograma para Identificação de Bactérias Gram Positivos …………………..204
9.19. Fluxograma para Identificação de Leveduras …………………………………..205
9.20. Fluxograma para Identificação de Fungos Filamentosos ……………………….206
9.21. Pesquisa de Sangue Oculto nas Fezes …………………………………………..206
10. Fase Pós-Analítica……………………………………………………………………208
11. Conclusão …………………………………………………………………………….209
12. Referências Bibliográficas …………………………………………………………...210

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