Synergistic effects of Pseudaletia unipuncta granulosis virus (PuGV-Ps) on Bacillus thuringiensis (Bt) and the involved degradation of Bt toxins

2008·0.28 MB·

昆 虫 学 报 !"#$%&#’(’)’*+"$,+&+"$，!"#$"%&’(()，*（+ +）：’,-.’ /001(2*23,’4,
"""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""
粘虫颗粒体病毒对苏云金杆菌的增效特性及
对 毒蛋白的降解活化作用
!"
徐 健+，’，刘 琴’，谭永安+，祝树德+，!
（+J 扬州大学园艺与植物保护学院，江苏扬州 ’’*((4；’J 江苏里下河地区农科所，江苏扬州 ’’*((<）
摘要：以小菜蛾 -).#/))$ 01)’2#/))$为试虫，采用生物测定方法测定了粘虫颗粒体病毒（-2/.3$)/#+$ .&+4.&"#$ U%"#$DF979
T7%$9，:$VW3:9）对苏云金杆菌（5$"+)).2#6.7+&*+/&2+2，=L）的增效作用。结果表明：不同配伍:$VW3:9和=L间的共毒系
数在+(*J.至+4*J(之间，:$VW3:9对=L毒力具有增强作用，其中以=LX:$VW3:9为2X+增效作用最明显，<’6Y5 为
*(
(J(.4CUZCY。不同温度和N[值都影响:$VW3:9对=L的增效作用，+,\]’(\增效程度明显高于’2\].’\，而碱
性条件下（N[)]4）增效作用更显著。:$VW3:9对=L的增效作用因小菜蛾龄期不同而变化，’、.龄幼虫死亡率较单
独使用=L分别提高了*(^和.(J.+^，而作用于低龄（+龄）和高龄（2龄）幼虫时对=L的增效作用不显著。:$VW3:9
饲喂’ 6后再接毒=L，小菜蛾死亡率明显提高，2) 6死亡率达,,J,<^，较直接饲喂=L_:$VW3:9处理死亡率提高了
*.J)<^，差异极显著。0?03:>VA表明:$VW3:9具有碱性蛋白酶的活性，离体条件下能促进!3内毒素酶解为2< ‘?，
,( ‘?和,+ ‘?的毒性肽。
关键词：粘虫颗粒体病毒；苏云金杆菌；增效特性；=L毒蛋白；小菜蛾
中图分类号：a4,* 文献标识码：> 文章编号：(2*23,’4（, ’(()）(+3((’,3(<
#$%&’()*")+ &,,&+"* -, !"#$%&’#()& $*)+$*,(& (’.%/0-*)* 1)’/*（2/3452*）-%
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基金项目：国家重点实验室开放课题（567#898/:;(<(.）；国家科技支撑计划（’((,=>?(’>(.）；江苏省自然科学基金项目（=@’((,(,<）；江苏省
科技攻关项目（=A’((*,+’）；江苏省研究生培养创新工程项目（5B(<=3+4(’）
作者简介：徐健，男，+4,)年生，扬州人，博士研究生，研究方向为微生物农药的研究和应用，A3C"7D：E7F3GHI+,.JKFC
!通讯作者 >$L6F%MF%KF%%89NF#O8#K8，P8DQ：(*+23<4<)++(；A3C"7D：R9O7#98KLI&"6FFQKFCQK#
收稿日期 S8K87T8O：’((<3(<3++；接受日期 >KK8NL8O：’((<3(43’2
@期 徐 健等：粘虫颗粒体病毒对苏云金杆菌的增效特性及对1+毒蛋白的降解活化作用 LE
!"#$%&’( )*+, +,’ +&’%+#’-+ ". "&%/ *-"!0/%+*"- )*+, 1+ %-( 2034526 6*#0/+%-’"06/78 9:952;3< %-%/76*6
6,")’( +,%+ !" #!$%& +,’!5’-("+"=*- )*+, #"/’!0/%& )’*>,+ %?"0+@AB C: !"0/( ?’ (’>&%(%+’( ?7 2034526 *-+"
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!"# $%&’(：’()*+,-)$!, *"!.*"/$, >&%-0/"6*6 G*&06；0,/!--*( $1*%!"2!)"(!(；67-’&>*6+*! ’..’!+；1+ +"=*-；
’-*$)--, 34-&($)--,
苏云金芽孢杆菌（0,/!--*( $1*%!"2!)"(!(，1+）是一 发生范围广、危害严重，不仅对大量的化学杀虫剂产
种分布广泛的革兰氏阳性土壤细菌，在形成芽孢的 生了严重的抗药性，而且也是第一个被发现对 1+产
同时会在菌体的一端或两端形成伴孢晶体，称为杀 生抗性的害虫（M%?%6,-*C )$ ,-8，@JJD），但利用 1+对
虫晶体蛋白（*-6’!+*!*(%/ !&76+%/ $&"+’*-6，HI26）或!5内 其进行生物防治是综合治理的重要手段。本实验以
毒素（(’/+%5’-("+"=*-）。伴孢晶体被敏感昆虫幼虫吞 小菜蛾为试虫，研究2034526对 1+的增效特性和机
食后，在肠道碱性环境和蛋白酶作用下释放出的毒 理，从理论上探讨颗粒体病毒的增效机理，从实际应
性肽与昆虫中肠上皮细胞的特异受体结合形成离子 用上寻找提高1+防治效果的途径，为开发高效实用
通道，破坏细胞渗透平衡，使细胞肿胀破裂，最终导 的1+生防制剂奠定基础。
致昆虫死亡（9!,’-$. )$ ,-8，@JJK）。由于 HI26 对鳞
翅目、鞘翅目、双翅目和膜翅目等多种重要的农林业 ) 材料与方法
害虫具毒杀作用，1+已作为有效的微生物农药广泛
应用于害虫的生物防治（喻子牛，@JJB）。然而受本 )*) 材料
身生物学特性的限制，在实际使用中存在毒力不强、 苏云金杆菌（1+）：江苏里下河地区农科所保存
杀虫谱窄、杀虫速度慢等影响大面积推广应用的问 的菌种（血清型PA%A?）。先在蛋白冻牛肉膏培养基
题。人们试图从菌株筛选、遗传改良、剂型加工、增 斜面活化LD ,，移入 T1液体培养基中，在 LLB &U#*-
效因子研究等途径来提高 1+ 的活性（曹琼，LBBD）。 摇床上ABV培养形成芽孢和晶体。用蒸馏水洗涤
M%-%(（% @JNJ）发现美洲粘虫颗粒体病毒（’()*+,-)$!, 离心（@ABBB &U#*-），收集沉淀，冷冻干燥制得苏云金
*"!.*"/$, >&%-0/"6*6 G*&06，2034）与其核型多角体病毒 杆菌芽孢晶体制剂。参照王瑛等（@JKB）方法，将芽
（-0!/’%& $"/7,’(&"6*6 G*&06，20O24）共同感染虫体时， 孢和晶体混合物用蒸馏水重新悬浮，用搅拌器反复
2034能显著提高核型多角体病毒对粘虫的感染率 搅拌打泡，去除絮状凝集的泡沫，直至不产生泡沫为
和致死率，后来证明在其中起增效作用的因子是 止。将去除泡沫的悬浮液经无水硫酸钠5四氯化碳
2034包涵体中的一种分子量为 @BB C: 左右的蛋 双相分离，取上清液离心（@ALBB &U#*-），沉淀用蒸馏
白。丁翠等（@JJN）将此病毒以东方粘虫 ’8 ().,%,$, 水离心洗涤 A 次后，冷冻干燥，制得纯化的!5内毒
为宿主感染增殖，获得转宿主粘虫颗粒体病毒（简称 素，镜检纯度达JJRAFS，置WLBV备用。
2034526），可以提高棉铃虫核型多角体病毒 粘虫颗粒体病毒（2034526）：粘虫颗粒体病毒
（5)-!/&#)%., ,%6!2)%, O24，P%O24）、东方粘虫核型多 由中国科学院动物研究所提供。参照刘强等（@JJK）
角体病毒（26O24）等对宿主的感染力。徐健等 方法，用原始病毒以FRFX@B@BY1U#T的浓度口服感
（LBBA）的实验证明，2034526 对苏云金杆菌的毒力 染人工饲料饲养的 L 龄东方粘虫幼虫，收集感病的
也具有增强作用。其他颗粒体病毒对 1+ 的增效作 虫尸，相差显微镜镜检确认为颗粒体病毒感染后，研
用也有文献报道，如将纯化的粉纹夜蛾颗粒体病毒 磨匀浆，A层纱布过滤，滤液经差速离心（N BBB &U#*-
（7%!/1&.-*(!, "! 34，M-34）增效蛋白加入 1+中，可以 @B #*-，@N BBB &U#*- DB #*-），弃去组织残渣，用无菌
提高 1+对F种鳞翅目幼虫的致死效果，害虫的死亡 的生理盐水多次洗涤沉淀，再反复差速离心，得纯化
率提高了 LQ@B 倍（3&%-%("6 )$ ,-8，LBB@）；1+ 与菜 的转寄主粘虫颗粒体病毒 2034526，用真空冷冻干
青虫颗粒体病毒（’!)%!( %,.,) 34，2&34）混剂对菜青 燥机冷冻干燥。另用蒸馏水悬浮纯化的 2034526，
虫的共毒系数达 @F@RJ@（邬开朗等，LBBB）；体外表 置于 KBV水浴 LB #*-后，离心并冷冻干燥，制得灭
达的棉铃虫颗粒体病毒（P%34）重组增效蛋白可对 活变性的2034526。
1+增效LBRES QANRDS（刘相国等，LBB@）。 供试昆虫：小菜蛾为采自扬州郊外、实验室连
小菜蛾 ’-*$)--, 34-&($)--, 是世界性蔬菜害虫，其 续繁殖AB代的种群。将青菜汁处理的滤纸置于产
!’ 昆虫学报 !"#$%&#’(’)’*+"$,+&+"$ "4卷
卵箱中供羽化小菜蛾产卵，每天更换滤纸获得同日 EF:@、12 "% EF:@ 和 +,-./+0 4!&" EF:@ G 12 "%
! ! !
龄卵粒。用蛭石盘中发芽的油菜籽子叶饲喂孵化的 EF:@的稀释液中浸渍4 :;<后取出风干，接种预饥
!
小菜蛾幼虫，在 !"# $%&"#、相对湿度 ’%(、光照 ! > 的!龄小菜蛾幼虫。取食 +,-./+0 叶片的小菜
! %%% )*的恒温昆虫饲养室内饲养，选取不同龄期的 蛾待取食4 >，! >，7 >后，换以12"% EF:@处理的叶
!
幼虫待测。 片饲喂，另设蒸馏水处理作对照。每处理接虫 !%
!"# 方法 头，重复7次，!"# $%&"#光照培养箱中培养，于小
!"#"! +,-./+0对 12的增效作用：用蒸馏水将 12、 菜蛾取食 12 !5 >，5’ >，?! >后检查并计算校正死亡
+,-./+0配制成一定浓度悬浮液，并按照 123+,-./ 率。
+0为 434，!34，534 的比例混配成不同配比的悬浮 !"#"& 离体条件下 +,-./+0对 12内毒素的酶解活
液。按照生物杀虫剂药效测定的浸液饲喂法（陈涛 化作用：用蒸馏水将"/内毒素、+,-./+0 和灭活
等，4667），根据预备实验的结果，在死亡率 4%( 8 +,-./+0配制成相同浓度悬浮液，并按照"/内毒素3
6%(的范围内，以等比法将上述悬浮液用蒸馏水稀 +,-./+0或灭活 +,-./+0 434的比例混合，另以等量
释成"89个浓度梯度。将预选的同叶龄的等面积 的"/内毒素、+,-./+0 和灭活 +,-./+0 悬浮液为对
青菜叶在各浓度药液中浸渍4 :;<，风干后置于直径 照。将上述处理以 47 %%% IF:;<离心，去上清，加入
6 =:培养皿中，接种预饥! >的!龄小菜蛾幼虫，每 %&4 :H) JK AL（CD 4%&?）碱解液使其完全溶解。
! 7
处理接虫!%头，重复7次，另设蒸馏水处理作对照。 !"#孵育4 > 后加入等量 4M 上样缓冲液，4%%#水
将各处理置 !"# $ %&"#光照培养箱中饲养，分别 浴" :;<，4! %%% IF:;< 离心，取上清液用 NON/+P-Q
于5’ >，?! > 后检查死亡率。计算致死中浓度 检测蛋白。
（@A ）和共毒系数（ABA）。
"%
!"#"# 不同温度、CD下 +,-./+0对 12的增效作用： # 结果与分析
温度影响实验设 12 "% EF:@ 和 12 "% EF:@ G
! !
+,-./+0 4!&" EF:@ 两个药剂，49#，!%#，!5#， #"! ’()*+’,对-.的增效作用
!
!’#，7!# "个温度共4%个处理，药剂用蒸馏水稀 以小菜蛾 ! 龄幼虫测定 +,-./+0 对 12 的增效
释，另设不同温度蒸馏水处理作对照。CD影响实验 作用，结果列于表4。结果显示，12对小菜蛾具有较
同样设 12 "% EF:@和 12 "% EF:@ G +,-./+0 4!&" 高的毒力，5’ > 和 ?! > 的 @A 分别为 %&%7’ :EF:@
! ! "%
EF:@两个药剂，CD为"&%，9&%，?&%，’&%，6&%"个 和%&%47 :EF:@。+,-./+0处理 5’ >和 ?! >的 @A
! "%
酸碱度共 4% 个处理，药液用上述 CD 值的 %&4 :H) 分别为"!9&%4 :EF:@和 7%%&56 :EF:@，对小菜蛾基
BI;0/DA)缓冲液配制，置 !"#的光照培养箱内，同时 本没有毒杀作用，因此在本实验中作为增效剂进行
用不含药剂的不同 CD的%&4 :H) BI;0/DA)缓冲液处 药效评价。12与 +,-./+0的不同配比中，除 434 配
理作对照。上述处理按照4&!&4节的方法接入预饥 比5’ >共毒系数为 4%"&7 外，其余组合共毒系数均
! >的!龄小菜蛾幼虫饲养，5’ >后检查并计算校正 显著大于4!%，按照N,<和RH><0H（< 469%）杀虫剂联合
死亡率。 作用评价标准衡量，其表现为增效作用。不同组合
!"#"$ 不同龄期试虫 +,-./+0 对 12 的增效作用： 以123+,-./+（0 534）增效作用最显著，5’ >共毒系数
用蒸馏水分别配制 12 !"!EF:@、"%!EF:@、4%%!EF 为4"5&9，?! >共毒系数高达46"&%。
:@、!%%!EF:@ 5 个浓度及 12 !"!EF:@ G +,-./+0 #"# 不同温度、/0下 ’()*+’,对-.的增效作用
9&!"!EF:@、12 "%!EF:@ G +,-./+0 4!&"!EF:@、12 不同温度影响实验结果显示，49#和 !%#条件
4%% !EF:@ G +,-./+0 !" !EF:@、12 !%% !EF:@ G 下，+,-./+0G12的毒力显著高于12的毒力，5’ >小
+,-./+0 "%!EF:@ 5个浓度药液，按照4&!&4节方法 菜蛾校正死亡率分别为 !7&77(和 79&9?(，较单用
处理叶片，根据 12和 12G+,-./+0药液浓度由低到 12分别提高了 4%!&6(和 "?&4’(，差异达显著水
高，依次接入预饥! >的4龄、!龄、7龄、5龄的小菜 平。随温度升高，12对小菜蛾的作用效果也逐步提
蛾幼虫，同时设蒸馏水处理作对照，!"# $%&"#光 高，而 +,-./+0 对 12 的增效幅度相对减小，7!#时
照培养箱中培养，5’ >后检查并计算校正死亡率。 +,-./+0G 12 处理的小菜蛾校正死亡率为 6%(，较
!"#"% 试虫提前不同时间取食 +,-./+0对 12毒力 单用 12 ’9&9?(的死亡率差异不显著（图4：P）。不
的影响：将同叶龄的青菜叶片分别在 +,-./+0 4!&" 同CD对 12 的毒力影响不大，但显著影响 +,-./+0
C期 徐 健等：粘虫颗粒体病毒对苏云金杆菌的增效特性及对;%毒蛋白的降解活化作用 A0
表! 粘虫颗粒体病毒与苏云金杆菌对小菜蛾的增效作用
"#$%&! ’((&)*+(,-./0,1+2*3&456-%&2)&+( !"#$%%&’()&*$+,$-+’$’ *+ .%&(-%%"/0%1’(-%%"
处理 时间 毒力回归方程 致死中浓度（012置信区间） 共毒系数
!"#$%&#’% !(&#（)） *#+"#,,#-.$%(/’ 341（5 &+6&3）（012 7"#8(9:#:(&(%） 4!4
;% <= !>?@A?BC@D5" 5@5E（= 5@5A<F5@5DD） F
?A !>?@0ABC@11" 5@5C（E 5@55?F5@5AA） F
G.HIJG, <= !>A@C=B5@=D" 1AD@5（C C0C@A1F<?ED0@<0） F
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;%KG.HIJG, <= !>D@C1BC@E1" 5@C（< 5@C5F5@A5） C1<@D
（<KC） ?A !>?@<0BC@??" 5@5E（0 5@5A0F5@5<0） C01@5
图C 不同温度（L）和MN（;）下G.HIJG,对;%作用小菜蛾A龄幼虫毒力的影响
O(+P C QRR#7%/RG.HIJG,/’S(".:#’7#/R;%.’8#"8(RR#"#’%%#&M#"$%."#,（L）$’8MN（;）
%/%)#A’8(’,%$":$"S$#/R #$%&’$$()*$+,&’$$(
对 ;%的增效作用。酸性条件下（MN 1@5 和 MN D@5）
增效作用不明显，较 ;%处理差异不显著。碱性条件
下（MN=@5和 MN0@5），G.HIJG,显著提高了 ;%对小
菜蛾的毒力，MN 0@5 时 G.HIJG,B ;% 处理小菜蛾校
正死亡率达1E@EE2，而同样MN下的;%处理小菜蛾
死亡率仅为E52（图C：;）。
789 小菜蛾不同龄期 ,-./0,1对:*的增效作用
G.HIJG,对;%的毒力影响随小菜蛾龄期的不同
而有所变化（图 A）。在实验的 < 个龄期幼虫中，
G.HIJG,B;%对A龄和E龄的毒力较高，校正死亡率
分别为<12和?C@D?2，较同浓度单用 ;%处理的校
正死亡率提高了 152和 E5@EC2，差异显著。低龄 图A 小菜蛾不同龄期G.HIJG,对;%毒力的影响
（C龄）和高龄（< 龄）的小菜蛾对 G.HIJG,B ;% 的增 O(+P A QRR#7%/RG.HIJG,/’S(".:#’7#/R;%(’8(RR#"#’%
(’,%$",/R #$%&’$$()*$+,&’$$(
效作用反应不敏感，与单用 ;%的毒力无显著差异。
78; 小菜蛾取食 ,-./0,1时间对:*毒力的影响 菜蛾死亡率（图 E）。与直接饲喂 ;%B G.HIJG,处理
C龄小菜蛾先以 G.HIJG,处理的叶片饲喂C )， 相比，在饲喂 G.HIJG, A )，E )后再接毒 ;%，能显著
A )，E )后，再饲喂 ;%处理的叶片，同样可以提高小 提高小菜蛾的死亡率，其中以饲喂G.HIJG,A )后接
5, 昆虫学报 23$&4,$)5)")6+3&/+,+3& 46卷
毒!"的增效作用最为明显，#$ %和 &’ %校正死亡率
分别达 (()(&*和 +,*，较直接用 !" - ./012.3 处
理，校正死亡率分别提高了 45)$&*和 5#)++*，差
异显著。饲喂./012.36 %后接毒!"，小菜蛾死亡率
较!"-./012.3处理没有明显提高，差异不显著（图
5）。
图# 离体条件下./012.3对!2内毒素的酶解活化作用
789: # ;<<=>"?@"%=E=9BDED"8?@?<!2=@E?"?L8@MN
./012.3 +,-+$.)
6：!2内毒素!2=@E?"?L8@；’：!2内毒素-./012.3!2=@E?"?L8@-
./012.3；5：!2内毒素-加热变性./012.3!2=@E?"?L8@-%=D"2
E=@D"/B=E ./012.3；#：./012.3；4：加热变性 ./012.3 H=D"2
E=@D"/B=E./012.3；O：标准蛋白P"D@EDBEGB?"=8@FDBI=B:
等，’,,4）。关于增效蛋白的增效机理，目前有两种
观点：一种认为增效蛋白是一种金属蛋白酶，进入
虫体后可以降解昆虫中肠的围食膜（G=B8"B?G%8>
FD"B8L，.O），破坏中肠粘膜的物理屏障，使病毒粒子
图5 6龄小菜蛾提前不同时间取食./012.3 （或!"）更容易同中肠柱状细胞接触，相对增加了病
对!"毒力的影响
毒（或 !"）的有效感染量（QD@9 %$ &":，6++#；QD@9
789: 5 ;<<=>"?@A8B/C=@>=?<!"?<8@?>/CD"8@9./012.3
D"E8<<=B=@""8F=GB8?B"?!"DGGC8>D"8?@8@ D@E 0BD@DE?3，6++&）；另一种是直接作用于质膜和病
"%=63"8@3"DBCDBAD=?< !"#$%""&’(")*$%""& 毒包涵体膜上的增效蛋白受体位点，促进病毒粒子
!"# 离体条件下 $%&’($)对!(内毒素的酶解活化 与质膜的融合，增加病毒的感染力（RD@DED %$ &":，
作用 6+$5；S>%8FD %$ &":，6+$+）。目前颗粒体病毒对 !"
的增效机制的研究尚不够深入，一般认为颗粒体病
在GH6,)&的碱性条件下，!2内毒素溶解为 65,
IJ为主的蛋白带，少量!2内毒素降解成分子量在(, 毒对!"的增效作用机理可能更多地表现在破坏中
K65, IJ范围内的毒性肽。./012.3包涵体在碱性 肠围食膜结构，增加 !" 毒蛋白的通透能力上
条件下解离出分子量为6,$ IJ的增效蛋白和5# IJ （0BD@DE?3 %$ &":，’,,6）。
围食膜是昆虫中肠的特有非细胞结构，具有保
颗粒体蛋白为主的蛋白带。灭活变性的 ./012.3中
护中肠上皮细胞，阻止病原物的侵染等多种功能（陆
也解离出6,$ IJ的增效蛋白，5# IJ的病毒粒子蛋
秀君等，’,,5）。T/@?A8"U 等（6+$(）从海灰翅夜蛾
白明显高于 ./012.3中的含量。晶体蛋白和 ./012
/0)1)0$%.& "+$$).&"+* 中分离了中肠围食膜，离体实验
.3共同孵育6 %后，65, IJ的!2内毒素几乎被完全
酶解为(6 IJ，(, IJ和 #& IJ的毒性肽。灭活变性 证明可以限制已降解的!2内毒素的通透性。本实验
测试了在饲毒!"前’K5 %饲喂 ./012.3，小菜蛾死
的./012.3对!2内毒素没有明显酶解活化作用（图
亡率较直接饲喂 !"- ./012.3 明显提高，该结果支
#）。
持了增效蛋白是金属蛋白酶破坏围食膜的假说，即
先行进入中肠的 ./012.3作用并破坏围食膜结构，
* 讨论
增加了对外源物质的通透性，后续进入的 !"将更容
易突破围食膜屏障，作用于中肠柱状细胞 !" 受体，
粘虫颗粒体病毒（./01）是发现最早的具有增
相对于没有先行饲喂 ./012.3的处理，进入虫体 !"
效作用的颗粒体病毒，其起增效作用的主要成分是
的有效量相对增加，对小菜蛾的毒杀作用也得到加
颗粒体病毒包涵体中的一种分子量为 6,, IJ左右
强。QD3%M/B@ 等（6++4）报道粉纹夜蛾在蜕皮时并不
的蛋白。目前已在 + 种颗粒体病毒、# 种痘病毒、6
形成围食膜，而是在蜕皮后 64 % 形成的。QD@9 和
种核型多角体病毒中发现了增效蛋白的存在（徐健
(期 徐 健等：粘虫颗粒体病毒对苏云金杆菌的增效特性及对01毒蛋白的降解活化作用 =(
!"#$#%&（’ ())*）则认为粉纹夜蛾在蜕皮前、蜕皮时及 #$E，C443），因而，对低温发生的害虫，01的效果就很
蜕皮后中肠都形成围食膜。本实验用不同龄期的小 不理想。比如我国北方早春普遍发生的重要林木害
菜蛾测定 +,!-.+’/ 01 的效果，发现 +,!-.+’对 01 虫春尺蠖 %&’()!*+# (*,!-#-*./，发生期的气温多数在
的增效作用因小菜蛾的大小不同而有所差异，暗示 C4L以下，虽然春尺蠖本身对 01 比较敏感，但由于
了不同龄期小菜蛾幼虫围食膜的形成可能存在差 低温的原因，其实际应用效果并不理想（个人通讯）。
异，这种差异表现出+,!-.+’/01对低龄（(龄）和高 本实验结果表明，在低温下（(3L和 C4L），+,!-.+’
龄（2龄）幼虫的毒力增强作用不显著。 对 01的增强作用更为明显，提示其可以作为提高低
大多数!.内毒素本身没有杀虫活性，只有被昆 温下01药效的增强因子，用于低温发生害虫的生物
虫取食后，在中肠内溶解为原毒素，并经中肠蛋白酶 防治。
水解作用，降解为 34 56 左右的抗酶多肽活力片段
参 考 文 献（!"#"$"%&"’）
即毒素，才具有杀虫活性（7&8& #$% 9:;#<#，()*=；
>$?@:’A #$% B@#1:$，())C；D?:<#"# !" #$E，())C）。因此， M#&N，C442O >PPJK1’&P’&QJJ$A#$K:$?P#K1&"’&$1AJ:$’JK1:K:%#@#K1:R:1S&P
溶解和酶解活化是!.内毒素产生杀虫作用的首要条 0#(*$$./ ").-*,1*!,/*/E 2’.-,#$ ’3 4.)#, 5,*6!-/*"7 ’3 8(*!,(! #,9
:,1*,!!-*,1，(（T C）：22U2*O［曹琼，C442O 苏云金杆菌杀虫增效
件。中肠是苏云金杆菌!.内毒素的作用部位，晶体
作用研究进展E 武汉科技学院学报，(（T C）：22U2*］
蛋白在昆虫中肠的迅速溶解需要碱性及还原性的环
MAJ$7，VA#$? WN，B,$ M0，X:# YX，Z,& M，!#$ X，())=O [J#’,":$?
境，而毒素的活化需昆虫中肠蛋白酶的作用。本实
[J1A&%’ &P 0:&.+J’1:K:%J’ #$% 7AJ:" +":$K:F@J’E 0J:8:$?：MA:$#
验中，+,!-.+’ 可以使 01 晶体蛋白得到降解，病毒 9?":K,@1,"J+"J’’E C4*UC(4O［陈涛，张友清，孙传柏，夏克祥，
=2 56 的包涵体蛋白也被进一步降解为小分子的多 罗成，干信，())=O 生物农药检测及其原理E 北京：农业出版
肽，而对热处理变性的 +,!-.+’则失去对 01晶体蛋 社E C4*UC(4］
6:$?M，6J$?7，M#: XW，())HO >$A#$KJQJ$1 &P \#K,@&R:",’ :$PJK1:&$ \S
白及病毒包涵体蛋白的降解能力，说明活体的
1AJ ’S$J"?:’1:K P#K1&" &P # ?"#$,@&’:’ R:",’ &P 1AJ #"QS<&"QE %("#
+,!-.+’ 包涵体中含有碱性蛋白酶，这种碱性蛋白
:,"’+’$E 8*,E，=（* 2）：24TU2(=O［丁翠，邓塔，蔡秀玉，())HO
酶在碱性条件下不仅能降解包涵体蛋白，促进病毒 粘虫颗粒体病毒的增效因子提高杆状病毒的感染E 昆虫学报，
粒子的释放，而且可以酶解活化 01 晶体蛋白，使!. =（* 2）：24TU2(=］
内毒素降解成对昆虫具有毒性作用的毒素。同时在 >#"@JB]，!J"#@% ]B，[:?,J@ 9]，())3O >K&@&?:K#@ P#K1&" #PPJK1:$? 1AJ
F#1A&?J$:K:1S&P 0#(*$$./ R#"E ").-*,1*!,/*/ 1&1AJ>,"&FJ#$K&"$\&"J"
晶体蛋白的底物存在下，这种碱性蛋白酶更多地作
#$%P#@@#"QS<&"QE 2E ;,6!-"!<-E =#")’$E，（* =）：=3HU=THO
用于!.内毒素的降解。许多杆状病毒和苏云金杆菌
>$?@:’AZ，B@#1:$BZ，())CO [&%J&P#K1:&$&P%J@1#.J$%&1&^:$P"&Q 0#(*$$./
混用表现出增效作用，这种增效作用一定程度上可
").-*,1*!,/*/：#K&QF#":’&$<:1A&1AJ"\#K1J":#@1&^:$’E ;,/!("0*’()!+E
能与杆状病毒中的内源性碱性蛋白酶提高对 01 酶 >’$E 0*’$E，C（C (）：(UTO
解活化作用有关。 !"#$#%&’ ]]，_, W，M&"’#"& 0，G,?AJ’ +]，C44(O >$A#$KJQJ$1 &P
普遍认为苏云金杆菌在施用时不能和碱性药剂 0#(*$$./").-*,1*!,/*/ 1&^:K:1S1&@JF:%&F1J"&,’’FJK:J’<:1A1AJJ$A#$K:$
P"&Q ?-*()’&$./*#,* ?"#$,@&R:",’E 0*’$’1*(#$@’,"-’$，C4：(H=U(H)O
同时使用。本实验则证明在一定的FG范围内（FGH
Z:,N，6:$?M，M#:XW，())*O +,":P:K#1:&$#$%\:&KAJQ:K#@KA#"#K1J":;#1:&$
I)），酸碱度对 01 毒力影响不大，而碱性条件则更
&P’S$J"?J1:KP#K1&":$1AJK#F’,@J&P#?"#$,@&’:’R:",’&P1AJ#"QS<&"Q，
能促进 +,!-.+’对 01 毒力的提高。这一点可以从 =/!.9#$!"*#.,*&.,("#E @)*,!/! 2’.-,#$ ’3 A*-’$’17，(2（2）：=HCU
颗粒体病毒和增效蛋白的物化性质上得到证实。对 =HTO［刘强，丁翠，蔡秀玉，())*O 粘虫颗粒体病毒增效因子的
01有增效作用的主要物质是 +,!-.+’ 中的增效蛋 分离纯化及其生化性质E 病毒学报，(（2 2）：=HCU=HT］
Z:,X!，W#$? !，N:, 0B，VA#$? YN，7:#$ 0，C44(O >^F"J’’:&$ &P 1<&
白，在碱性条件下，包裹 +,!-.+’粒子的包涵体蛋白
1",$K#1J%J$A#$K:$??J$JP"&Q B!$*(’6!-&##-+*1!-# ?"#$,@&’:’R:",’:$
溶解，不仅释放出病毒粒子，同时也释放出增效蛋白
:E (’$* #$% :1’ F"J@:Q:$#"S \:&#’’#SE %("# >*(-’<*’$’1*(# 8*,*(#，2(
（刘强和丁翠，()))），这样可以更直接地作用于小菜 （C）：(3TU(T(O［刘相国，杨恭，邱并生，张克勤，田波，C44(O
蛾的中肠围食膜，也就提高了01的杀虫效果。 棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白基因H’端截短片段的表达及增效
本实验中，低温更有利于 +,!-.+’发挥增强 01 活性测定E 微生物学报，2（( C）：(3TU(T(］
杀虫效果的结果，具有重要的实际意义。很多情况 Z:,N，6:$?M，()))O >$A#$KJQJ$1&P+’‘+-:$PJK1:&$\S#?"#$,@&’:’R:",’
#$%1AJ’S$J"?:’1:K P#K1&"E @)*,E 2E %&&$E :,6*-’,E 0*’$E，3（=）：
下，温度是制约 01使用范围的重要因素，01的杀虫
=44U=42O［刘强，丁翠，()))O 粘虫颗粒体病毒及其增效因子
效果一般呈正温度效应，即随着环境温度的升高，其
对粘虫核型多角体病毒的增效作用E 应用与环境生物学报，3
杀虫活性也随之上升（>#"@J !" #$E，())3；-:KJ$1 !" （=）：=44U=42］
., 昆虫学报 ),-&>%-"?"’"*+,&B+%+,& @H卷
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8N’47(*8;*36&3;5756&(7&’"P58*82*7"8LN*;848;47&84&3;*2*;N*’;94P&72&P (7&’"P52*7"84’9&’3*’> >%-"?"’"*+,&’ !"#$%&’ "( >&1- G6+%&，H_（_）：
<*1(";56;94&7<ND57<，910#;&’0-+&#%+C#%,-&> :+,$"4+"1，.B：\BA ._.A._B/［徐健，刘琴，祝树德，,--@/ 颗粒体病毒增效蛋白研
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]5O5 0，0*‘&D& E，HI\./ M*885P";*5’ &’1 14(7&1&;*5’ 56 5&,+’’#1 #"X，$*’ #M，[9" X!，)* XG，,--./ J74P*<*’&7N 8;"1N 5’ ;94 46643; 56
-6#$+%*+0%1+1!K4’15;5=*’LN("; O"*34:75;4&8456 ;948*PTD57< 5"?42@ J"+V;5 5&,+’’#1-6#$+%*+0%1+1> !+&%*1#)*$+,#’-#$&’B,+0%,01，（H）：.-
?"$+> )CC’> >%/+$"%> :+,$"4+"’>，_（@ ,）：@B?A@\-/ A.H/［徐健，殷向东，朱锦磊，祁建杭，,--./ 粘虫颗粒体病毒
a39*<&E，R(47;47MR，]&’&1&$，HI\I/ QN’47(*8;*36&3;57 56 &(7&’"P58*8 对苏云金杆菌增效作用初探> 江苏农业科学，（H）：.-A.H］
2*7"8 56 ;94 &7<ND57<， 910#;&’0-+& #%+C#%,-&：F;8 ":;&T4 &’1 $"[U，HII-/ 5&,+’’#1-6#$+%*+0%1+1> Y4*O*’(：Q3*4’34J7488> HA?@/［喻
4’9&’34<4’;56 2*7"8 *’643;*5’ *’ 2*;75> !> 8%/0$-04$> 9&-6"’>，@_： 子牛，HII-/ 苏云金杆菌> 北京：科学出版社> HA?@］
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&L&3"P52*7"84’9&’3*’> 9$",> A&-’> ),&;> B,+> .B)，I_：?IBBA
?I\,/ （责任编辑：黄玲巧）