Spectrofluorometric valoration of Potamida littoralis (Cuvier) (Bivalvia, Unionidae) tioflavina S uptake

5 Pages·1991·2.2 MB·English

by  Manuel Nunez De Murga

IBERUS 9 (1-2): 427-431, 1990
VALORACIÓN ESPECTROFLUOROMETRICA DE LA INCORPORACIÓN
DEL FLUOROCROMO TIOFLAVINA S EN EJEMPLARES DE POTAMIDA
LITTORAUS (LAMARCK) (BIVALVIA, UNIONIDAE)
SPECTROFLUOROMETRIC VALORATION OF POTAMIDA LITTORAUS (CUVIER) (BI-
VALVIA, UNIONIDAE) TIOFLAVINA S UPTAKE
Manuel Núñez De Murga, Javier Núñez De Murga, Caries Soler Vázquez, Francisco
I
Martínez López y Antonio Núñez Cachaza*.
Palabras Clave: Espectrofluorometría,fluorocromos, tioflavinaS,Potamida littoralis, toxicología.
KeyWords: Spectrofluorometxy, fluorochromes, tioflavina S,Potamida littoralis, toxicology.
RESUMEN
Lapuestaapuntodemétodosdevaloración rápidayeficazdelosnivelesdeabsorción
de compuestos tóxicos presenta gran interés. Se han utilizado 24 ejemplares de
Potamida littoralis, divididos en dos series y sometidos durante 13 días a distintas
concentraciones del fluorocromo tioflavina S. La primera serie constó de 12 animales,
sometidosaconcentracionesde10,100y1000mg/lyunasegundaserie,compuestapor
12 animales, a concentraciones de 1, 7 y 49 mg/l. La cualificación de los resultados se
registrófotográficamente,cuantificándose, posteriormente, lascurvasdeabsorcióndel
fluorocromo, con la ayuda de un espectrofluorímetro. Los resultados muestran un
incrementode laabsorcióndelatioflavinaSsegúnse incrementabalaconcentración,si
bien la dosis de 1000 mg/l pareció resultartóxica, lo que se manifestó por una caída de
la absorción.
ABSTRACT
The starting of quick and effective valuation methods of uptake levéis of toxic
compoundspresentsagreatinterest.24specimensofPofám/Gía//ffora//sdividedintotwo
series and submitted during 13 days to different concentrations of the fluorocrome
tioflavina S have been used. The first series consists of 12 animáis, submitted to
concentrationsof 10, 100 and 1000 mg/l and a second seriescomposed of 12 animáis at
concentrations of 1, 7 and 49 mg/l. The qualification of the results was registeres
photographicaly, being the curves of absroption of the fluorochrome quantified after-
wardsbymeansofan spectrofluorometer.The resultsshowan increase intheuptakeof
tioflavinaS astheconcentrationwasbeing increased, eventhoughthedoseof 1000mg/
I seemed to turn out toxic, which became apparent by fall in the uptake.
* DepartamentdeBiologíaAnimal;FacultatdeCiénciesBiológiques;UniversitatdeValencia;C/.Dr.Moliner50;
46100Burjassot; L'Horta; PaísValencia.
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INTRODUCCIÓN técnica que podría ser fácilmente extrapolable a
otrasespeciesycondicionesexperimentales.
El género Potamida (Swainson, 1840) (Bival-
via,Unionidae)incluyenumerosasespecies,tanto
fósiles como actuales, de amplia distribución en MATERIAL YMÉTODOS
laszonasmediterráneasydelsur-esteasiático.De
todaslasespeciesdelgénerohemosseleccionado Losanimalesutilizados,24ejemplaresácPota-
la Potamida littoralis (Lamarck, 1801) por ser mida littoralis (Lamarck), procedían de las ace-
frecuente en losríos, acequias y "ullals" del País quiasdel entorno delaalbuferadeValencia(tér-
Valencia(Gasull, 1971). minomunicipaldeSueca).Unavezenellaborato-
Setratadeunaespecieibérico-galaquehabitaen rio, se mantuvieron en cubetas de dos litros de
aguascorrientesy/oestancadasnocontaminadas, capacidad,conaireaciónpordifusores.Sedejaron
sobre sustratos de limos y arenas finas, donde es pasardosdíasantesdecomenzarlasexperiencias,
fácilobservarsus surcosdedesplazamiento (Ga- conelfindeasegurarelaclimatamientodelosani-
sull, 1971).Comoconsecuenciade su sensibih- males.
dad aloscontaminantes supresenciaescadavez Después de considerar diversos fluorocromos
másescasa. Tambiénporellopuede ser utilizada (Corifosfina O (CO), Rodamina 6G0 (R6G0),
comounbuenindicadordelosnivelesdecontami- Fosñna3R(F3R),etc.),elelegidodefinitivamente
nación y delefecto tóxicodediversas sustancias. fuelaTioflavinaS (TS),yaqueresultafácilmente
Estaespecie secaracterizaporposeerunacon- soluble en agua, incluso a grandes concentracio-
charomboidal-elíptica,redondeadaycortaporde- nes,yresultafácilmentelocalizableporelequipo
lante y ancha y redondeada-truncada por detrás; deespectrofluorimetríadequedisponemos,unes-
moderadamentepesadayalgohinchada.Losumbos pectrofluorímetroPerkin-Elmer,modeloHPF-44B
sonaltos,másomenosencorvadoshaciaadelante, dotadode tabletagráfica.
con escultura constituida por numerosas crestas Los animales se dividieron en dos series de 12
onduladas y finas, asimismo, las estríasdecreci- individuos, en laprimerasepretendíalocalizarla
mientomuymarcadas.Lachamelaesmuysólida concentración que resultaba ser tóxica, utilizán-
y losdientescardinalessonrobustosy nocortan- dosedosiselevadas(10, 100y 1000mg/1),mien-
tes,mientrasquelosdienteslaminares son largos tras que en la segunda se trataba de observar el
yligeramentecurvados.Elnácaresblancobrillan- comportamientodeabsorciónadosisbajas(1,7y
teylaconquiolinacolorcastañooscuro(Gasull, 49 mg/1). En todos los casos, se dispusieron tres
1971) (Fig. 1). animalesporcubetaydosis,procediéndosealadi-
Cabeseñalarquehayunaamplialistasinoními- solución del fluorocromo de forma directa en el
cadeestaespecie(Germain,1931;MooRE,1964; agua de las propias cubetas. Además, cada serie
Haas, 1969),porloqueconsideramosinteresan- dispusodeungrupodetresanimalescontrol,que
te citar las sinonimias que conciemen al País fueronmantenidosduranteelmismoperiodode1
Valencia:Psüunio littoralis(Cuvier, 1798); Unió díasenelmismoagua,sinnigúnaditivoespecial.
littoralis (Lamarck, 1801); Unió umbonatus Transcurridos 13 díasseabrieron losanimales,,
(Rossmaessler, 1844); Unió gandiensis registrando fotográficamente su aspecto bajo un
(Droüet, 1888)y Uniócircinatus (Droüet, 1893). fluoroscopioAndermandedoblelongituddeonda
Elpresentetrabajosecirscuncribedentrodeuna (Fig. 2) Seguidamente, seprocedióa lamacera-
.
lineadeinvestigaciónmásampliasobrelaaplica- ción del cuerpo de los animales, con la ayudade
ción de fluorocromos in vivo para el estudio del una trituradora eléctrica, diluyendo la masa así
estadofuncionaldediversasestructuras(Núñezet obtenida en agua destilada en una relación 1:9
ai, 1988;NÚÑEZetal., 1990; Soleretal. 1990). (Fig. 3). Finalmente, se obtenían tres mi de cada
Másconcretamente,sepretendeponerapuntouna unadeestas suspensionespararealizarelanálisis
técnicadelocalizaciónprecisayfiabledelaabsor- quantitativodelaemisiónfluorescentedebidaala
cióndesustanciascontaminantes,detectablespor presenciadel fluorocromo.Paraello,seutilizóel
un espectrofluorímetro, porparte deP. littoralis. espectrofluorímetroantesreseñado,aunnivelde
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NUÑEZDEMURGA£TAL.: INCORPORACIÓN FLUOROCROMOP.UTÍORAUS
emisión (el correspondiente a la tioflavina S) de DISCUSIÓN
360nm yunbarrido desde400a560 nm.
Durante los últimos años, hemos venido desa-
rrollando diferentes técnicas de aplicación de
RESULTADOS
fluorocromos in vivo paraelestudio fisiológico,
en animales superiores, de diversos órganos, así
Losregistrosfotográficos,obtenidosalobservar comodesuestadofuncionalendiversascondicio-
losanimalesenterosbajoelfluoroscopio,ofrecen nesexperimentales(Núñezetal., 1988;Núñezet
unaprimeraaproximaciónqualitativadelnivelde ai, 1990; Soleretal. 1990).
absorción del fluorocromo (Figs. 2 y 3). En el Conelpresentetrabajohemospretendidoponer
primergrupolafluorescenciacorrespondienteala a punto una nueva posibilidad de este tipo de
dosissuperior,esdecir,lade1000mg/1,fuemenor estudios,esdecir,desarrollarunatécnicadefácil
quelaobservadaenlasdosismásbajas,indicando realizaciónparalalocalizaciónprecisayfiablede
queestaconcentraciónresultatóxicaparalaespe- laabsorción de sustanciaspotencialmente conta-
cieconsiderada.Porsuparte,lasegundaseriepuso minantes.Así,ademásdelposiblecarácterfluoro-
demanifiesto que, adosisbajas, lacaptación del cromático propio de determinadas sustancias,
fluorocromofueproporcionalaladosisanalizada. cabríalaposibilidaddeconjugarcompuestosfluo-
Los estudios espectrofluorimétricos confirma- rescentesapotencialescontaminantes,paradetec-
ron deformacuantitativalosresultadosqueaca- tarsupresenciaconel métodoaquípropuesto.
bamosdecomentar(Fig. 4), permitiendo asimis- Porotraparte,confiamosenpoderampliar,enel
mo comprobar la bondad del método por cuanto futuro,eltestaquípresentadoconotrosestudiosde
los resultados correspondientes a la tercera dosis caráctermorfométricoydensitométrico.Estetipo
del primer grupo (10 mg/1) y a la tercera del de estudios está poniendo de manifiesto su gran
segundo (7 mg/1) son completamente coherentes utilidad en diferentes estudios toxicológicos
entresí. (ROHRetal., 1976; HUGHESetal, 1979; BOLEN-
DER, 1981; White, 1984).
Fig. L Aspecto de Potamida littoralis (La-
mark).
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IBERUS9(l-2) 1990
Fig.2.FluorescenciaenPo/a-
midalittoralis,bajoluzul-
travioleta.
Fig.3. PlacasdePelriconteniendoelmaceradodePotamidalittoralis.
Lafluorescenciaobservadaesdebidaal fluorocromoTioflavinaS.
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NUÑEZDEMURGA£7AL.: INCORPORACIÓN FLUOROCROMOP. LÍTÍORAUS
400 i*Q 480 520 560 400 Á40 480 5;!0 56C
Longitudde ondaemitida(nm)
Fig.4.CurvasespectrofluorimétricasenPotamidalittoralis.
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