GUILHERME PUGLIESI SECREÇÃO DE PROSTAGLANDINAS ANTES, DURANTE E APÓS A LUTEÓLISE EM BOVINOS Tese apresentada à Universidade Federal de Viçosa, como parte das exigências do Programa de Pós- Graduação em Zootecnia, para obtenção do título de Doctor Scientiae. Viçosa Minas Gerais – Brasil 2012 Ficha catalográfica preparada pela Seção de Catalogação e Classificação da Biblioteca Central da UFV T Pugliesi, Guilherme, 1984- P978s Secreção de prostaglandinas antes, durante e após a 2012 luteólise em bovinos / Guilherme Pugliesi. – Viçosa, MG, 2012. xxii, 178f. : il. ; 29cm. Orientador: Giovanni Ribeiro de Carvalho. Tese (doutorado) - Universidade Federal de Viçosa. Inclui bibliografia. 1. Bovino - Reprodução. 2. Hormônios sexuais. 3. Prostaglandina. 4. Progesterona. 5. Corpo lúteo. I. Universidade Federal de Viçosa. II. Título. CDD 22. ed. 636.2082 GUILHERME PUGLIESI SECREÇÃO DE PROSTAGLANDINAS ANTES, DURANTE E APÓS A LUTEÓLISE EM BOVINOS Tese apresentada à Universidade Federal de Viçosa, como parte das exigências do programa de pós- graduação em Zootecnia, para obtenção do título de Doctor Scientiae. APROVADA: 16 de maio de 2012. ______________________________ ______________________________ Prof. Ciro Alexandre Alves Torres Prof. Álan Maia Borges (Coorientador) ______________________________ ______________________________ Prof. Eduardo Paulino da Costa Prof. José Domingos Guimarães _______________________________ Prof. Giovanni Ribeiro de Carvalho (Orientador) Aos meus pais, Dorival e Conceição, pelos exemplos de caráter, dedicação e humildade. Aos meus irmãos, Érica, Giovani e Lurdinha, pelo apoio incondicional. Dedico ii “O êxito começa no momento exato em que o homem decide o que quer e começa a trabalhar para o conseguir” (Roberto Shinyashiki) iii AGRADECIMENTOS À Universidade Federal de Viçosa (UFV) e ao Departamento de Zootecnia, pela oportunidade da realização do curso de doutorado. À Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES), pela concessão das bolsas de estudos no Brasil e no exterior. Ao professor Giovanni Ribeiro de Carvalho, pela orientação, amizade e confiança que propiciaram a realização deste estudo. Ao professor Oliver Joseph Ginther, pela despendiosa atenção, ensinamentos e perseverança durante a realização dos estudos, e pelo exemplo de dedicação de vida à Ciência dos Animais. Ao professor Ciro Alexandre Alves Torres, pela coorientação e por fazer parte da banca examinadora. Aos professores Eduardo Paulino da Costa e José Domingos Guimarães, pelas diversas oportunidades oferecidas durante a pós-graduação e por comporem a banca examinadora. Ao professor Álan Maia Borges, pela grande amizade e dedicação ao longo dos anos e por fazer parte da banca examinadora. Ao professor José Monteiro da Silva Filho, pelos eternos ensinamentos da fisiologia da reprodução e da construção de caráter humano. Aos demais professores que auxiliaram na minha formação acadêmica e conduta profissional. À Carol, pela compreensão, paciência e apoio, que foram fundamentais durante esses anos para superar as adversidades. iv Aos companheiros e amigos da University of Wisconsin e Eutheria Foundation que foram fundamentais na realização deste estudo: Mohd Amin Beg, Maria Belén Rodriguez, Maria José Fuenzalida, Hemantha Shrestha, Fábio Pinaffi, Firdous Khan, Juan Cuervo-Arango, Hannan e Maria Hoffman. Ao grande amigo Andrew Pritzil, pela amizade e ajuda com meu meio de locomoção (ferrugem). À todos os companheiros de Madison-WI, pelos bons momentos vividos. À todos os amigos e colegas da pós-graduação da UFV que deram suporte e pela ótima convivência durante estes anos em Viçosa: Pedro Ker, Wender, Nelcino, Daniel Rates, Renan Reis, Paulo Gustavo (PG), Bruno (Goiano), Charles, Joanna, Manuela, Carolina, Júlio, Fabrício e Claudilene. À Celeste e Fernanda, secretárias da pós-graduação em Zootecnia. v BIOGRAFIA GUILHERME PUGLIESI, filho de Dorival Pugliesi e Conceição Aparecida Pereira Pugliesi, nasceu na cidade de Franca, São Paulo, em 5 de agosto de 1984. Em outubro de 2002, ingressou no curso de graduação em Medicina Veterinária na Universidade Federal de Minas Gerais. Em agosto de 2007, iniciou o programa de pós-graduação do Departamento de Zootecnia da UFV, em nível de mestrado, concentrando seus estudos na área de Biotecnologia da Reprodução Animal. Em Fevereiro de 2009, iniciou o programa de pós-graduação do Departamento de Zootecnia da UFV, em nível de doutorado, concentrando seus estudos na área de Fisiologia da Reprodução Animal. Em Janeiro de 2010 até Julho de 2011, realizou estágio em doutoramento na University of Wisconsin, onde desenvolveu os estudos aqui descritos. Em Maio de 2012, submeteu-se à defesa desta tese. vi SUMÁRIO Página LISTA DE TABELAS...................................................................................... x LISTA DE FIGURAS...................................................................................... xii RESUMO....................................................................................................... xvi ABSTRACT.................................................................................................... xx INTRODUÇÃO GERAL.................................................................................. 23 CAPÍTULO 1 - REVISÃO DE LITERATURA................................................ 25 1.Ciclo estral em bovinos.......................................................................... 25 2.Importância e síntese das prostaglandinas durante o ciclo estral de fêmeas bovinas....................................................................................... 26 3.Corpo lúteo e esteroidogênese luteal..................................................... 29 4.Luteólise espontânea em bovinos.......................................................... 31 4.1.Luteólise funcional........................................................................... 32 4.2.Luteólise estrutural........................................................................... 33 4.3.Mecanismos anatômicos, endócrinos e moleculares envolvidos na luteolíse em bovinos.................................................................... 34 4.3.1.Ação da prostaglandina F2α................................................... 36 4.3.2.Papel dos hormônios esteroidais e da ocitocina..................... 39 4.3.3.Ação do hormônio luteinizante................................................ 42 4.3.4.Função da prolactina............................................................... 43 5.Inibição da secreção de prostaglandina F2α e da luteólise por drogas antiflamatórias não-esteroidais.............................................................. 44 6.Utilização da ultrassonografia para avaliação da funcionalidade luteal........................................................................................................ 46 7.Efeito das prostaglandinas no desenvolvimento folicular e ovulação.................................................................................................. 47 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS.......................................................... 50 vii CAPÍTULO 2 - STUDY 1: Effects of inhibition of prostaglandin F2α biosynthesis during preluteolysis and luteolysis in heifers………………… 60 Resumo..................................................................................................... 61 Abstract...................................................................................................... 62 1.Introduction............................................................................................. 63 2.Materials and methods............................................................................ 65 2.1.Animals............................................................................................ 65 2.2.Experiment 1.................................................................................... 65 2.3.Experiment 2.................................................................................... 66 2.4.Hormone assays.............................................................................. 68 2.5.Statistical analyses.......................................................................... 69 3.Results.................................................................................................... 70 3.1.Experiment 1.................................................................................... 70 3.2.Experiment 2.................................................................................... 71 4.Discussion............................................................................................... 79 References................................................................................................. 85 CAPÍTULO 3 - STUDY 2: Effect of dose of estradiol-17β on prominence of an induced 13,14-dihydro-15-keto-PGF2α (PGFM) pulse and relationship of prominence to progesterone, LH, and luteal blood flow in heifers…………………………………………………………………………… 89 Resumo..................................................................................................... 90 Abstract...................................................................................................... 91 1.Introduction............................................................................................. 92 2.Materials and methods............................................................................ 93 2.1.Animals............................................................................................ 93 2.2.Follicle ablations.............................................................................. 94 2.3.Experimental design and treatments............................................... 95 2.4.Identification of PGFM and LH pulses............................................. 96 2.5.End points....................................................................................... 96 2.6.Hormone assays.............................................................................. 97 2.7.Statistical analyses.......................................................................... 98 3.Results.................................................................................................... 99 4.Discussion............................................................................................... 106 References................................................................................................. 112 CAPÍTULO 4 - STUDY 3: Induction of PGFM pulses and luteolysis by sequential estradiol-17β treatments in heifers……………………………… 116 Resumo..................................................................................................... 117 Abstract...................................................................................................... 118 viii
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