romina andrea rojas ponce

152 Pages·2009·6.21 MB·Spanish

UNIVERSIDAD DE CHILE
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y FARMACÉUTICAS

ASOCIACIÓN ENTRE POLIMORFISMOS DE GENES IMPLICADOS EN
EL CONTROL DEL EJE HIPOTÁLAMO-HIPÓFISIS-ADRENAL,
LA DEPRESIÓN MAYOR Y LA RESPUESTA AL TRATAMIENTO
FARMACOLÓGICO ANTIDEPRESIVO

Tesis presentada a la Universidad de Chile para
optar al grado académico de Doctor en Farmacología por:

ROMINA ANDREA ROJAS PONCE

Directoras de Tesis

Dra. Jenny Fiedler Temer Dra. Rosmarie Fritsch Montero

Santiago, Chile
2009
UNIVERSIDAD DE CHILE
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y FARMACÉUTICAS

INFORME DE APROBACIÓN
TESIS DE DOCTORADO

Se informa a la Dirección de Posgrado de la Facultad de Ciencias Químicas y
Farmacéuticas que la Tesis de Doctorado presentada por la candidata:

ROMINA ANDREA ROJAS PONCE

Ha sido aprobada por la Comisión Informante de la Tesis para optar al grado de
Doctor en Farmacología, en el exámen de defensa rendido con fecha:

………………………………………………………………………………………

Directoras de Tesis:

Dra. Jenny Fiedler T. ……………………………….…………

Dra. Rosmarie Fritsch M. ……………………………….…………

Comisión Informante de Tesis:
Dr. Yedy Israel (Presidente) …………………………………………..

Dr. Sergio Lavandero …………………………………………..

Dra. Katia Gysling …………………………………………..

Dra. Pilar Carvallo …………………………………………..

Dr. Rodrigo Labarca …………………………………………..
Dedicada a Mis padres Lufemia y Misael y a la
memoria de Berta Elisa, mi querida abuela
…con amor.
AGRADECIMIENTOS

No es difícil pensar en quienes me han acompañado durante este período de
aprendizaje y espero dejar en estas líneas expresado lo importante que han sido, son y
seguirán siendo para mí.

En primer lugar quiero agradecer a mi Madre, por su incondicional amor, su constante
apoyo y su incansable aliento entregado en cada uno de los desafíos que me he propuesto, en
especial durante mis estudios de posgrado. La distancia fue muchas veces, insoportable, pero
su cariño y su palabra oportuna siempre fueron y serán el pilar que me sostiene y me da fuerza
para continuar. Gracias Mamá por esto y por todo lo que soy.

Quiero agradecer a mi directora de tesis, Dra Jenny Fiedler, por darme la oportunidad
de realizar esta tesis en su Laboratorio. Especialmente quiero agradecer, su paciencia, su
tiempo y el de su familia y reconocer su admirable dedicación y entrega con cada uno de sus
estudiantes, entre los que me incluyo. Dedicación que se ha plasmado en el desarrollo y el
escrito de esta tesis. Gracias por las críticas constructivas, por escucharme y enseñarme el
camino del pensamiento crítico y por brindarme su apoyo en momentos de debilidad, que me
han hecho crecer y descubrir fortalezas desconocidas. Al finalizar este periodo quiero agradecer
su honestidad para compartir su experiencia, su conocimiento y sobre todo su calidad humana.

Quiero extender mis agradecimientos a la Dra. Rosmarie Fritsch por su colaboración
en el estudio clínico y en los análisis de los datos de esta tesis y a la Dra. Luisa Herrera por su
ayuda y colaboración con las extracciones de DNA y las determinaciones de grupo sanguíneo
de los pacientes. Agradezco también, a los miembros de la comisión evaluadora por su valiosos
aportes y orientación entregados desde el inicio y durante el desarrollo de este trabajo.

A mis estimados compañeros del Laboratorio de Neuroplasticidad y Neurogenética:
Paulina Rojas, Karina Araneda, Patricia Castañeda, Sergio Andrés, David Neira y José Luis
Ulloa, quiero expresarles mis infinitos agradecimientos por la compañía y el apoyo. Cada uno de
ustedes me ha entregado lo mejor de sí, hemos compartido momentos alegres y otros no tanto,
pero los más importante me han entregado su amistad, que ha sido fundamental durante este
tiempo. Así también, quiero extender mis agradecimientos a todos los alumnos que colaboraron
directamente en el trabajo experimental de esta tesis: Clarita Menares, Constanza Ballesteros,
Nicolás Palou y Carolina Vera, muchas gracias a cada uno por su ayuda y dedicación.

Durante mi paso por el doctorado conocí a grandes personas, que con el tiempo se han
transformado en grandes amigos. Cada uno de ustedes compartió conmigo sueños, intereses,
dudas, temores, pero también alegrías: Viviana Noriega, Miguel Copaja, Rodrigo Valenzuela,
Leonel Rojo, David Gálviz, Mauricio Dorfman, Araceli Valle, Mario Rivera, Ramón Sotomayor y
Pablo Jara, gracias a todos ustedes por los momentos vividos y por la palabra de aliento
ofrecida cuando la necesité.

Al finalizar esta etapa, quiero agradecer especialmente la generosidad y hospitalidad de
Marco Leiva, mi familia aquí en Santiago y el amor y la comprensión de Álvaro Emparán que me
han acompañado durante estos últimos meses. Un reconocimiento especial quiero hacer a
Hector Bravo, por su inagotable voluntad para ayudar y su siempre generosa atención.

Finalmente, agradezco a CONICYT y a la Escuela de posgrado por el soporte
económico brindado a través del Programa de Becas de Doctorado y Beca de Arancel y al
Proyecto de la Dirección de Investigación de la Vicerrectoría de la Universidad de Chile (DI-
MULT 05/02) que financió la investigación de esta tesis.

A todos ustedes mi gratitud y mi recuerdo. Con afecto.
.
FINANCIAMIENTOS

La realización de esta tesis recibió los siguientes financiamientos:

• Vicerrectoria de Investigación y Desarrollo. Universidad de Chile

Proyecto Multidisciplinario de investigación en Temas de Interés Nacional. DI
(2005). DI-MULT 05/02
Titulo : “Analisis de asociación entre polimorfismos de genes relacionados al
control del eje hipotálamo-pituitaria-adrenal, depresión mayor y respuesta
farmacológica a antidepresivos”.
Investigador responsable: Dra. Jenny Fiedler Temer.

• Escuela de graduados. Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas.
Universidad de Chile.

Beca parcial de Arancel (2004)
Beca de Arancel (II Semestre, 2008)

• Comisión Nacional de Investigación Científica y Tecnológica (CONICYT)

Beca de Doctorado (2005-2008)
Beca de Término de Tesis (Marzo - Agosto 2008)

• Comisión Nacional de Investigación Científica y Tecnológica (CONICYT)
Beca programa de apoyo a la participación de estudiantes de doctorado en
reuniones de Sociedades Científicas Nacionales y en Congresos Internacionales a
realizarse en Chile.

XVIII Congreso de la Asociación Latinoamericana de Farmacología (ALF) y
XXX Reunión Anual de la Sociedad de Farmacología de Chile.
Coquimbo. Chile (2008)

XXIX Congreso de la Sociedad de Farmacología de Chile.
Iquique. Chile (2007)
PUBLICACIONES

Durante el desarrollo de esta tesis se generaron las siguientes publicaciones y
presentaciones a congresos.
Rojas R. A., Herrera L., Fritsch R., Rojas G., González M., Rojas P., Menares C.,

Fiedler JL. Polymorphism in the FKBP5 gene is associated with cortisol levels
depending on clinical outcome in patients suffering depressive disorder. (en
preparación)

Araya AV, Rojas P, Fritsch R, Rojas R, Herrera L, Rojas G, Gatica H, Silva H,

Fiedler JL. Early response to venlafaxine antidepressant correlates with lower ACTH
levels prior to pharmacological treatment. Endocrine. 30(3):289-98. (2006)

PRESENTACIONES A CONGRESOS

Rojas R., Araya C, Palou N, Rojas, P., Fritsch, R., Rojas, G., Herrera, L., Fiedler,

J.L. POLIMORFISMOS EN EL GEN DEL BDNF Y DEL RECEPTOR 5-HT1A EN
SUJETOS DEPRESIVOS: ASOCIACIÓN CON RESPUESTA A LA TERAPIA
FARMACOLÓGICA ANTIDEPRESIVA. Comunicación Oral Sesión
Farmacogenética. XVIII Congreso de la Asociación Latinoamericana de
Farmacología (ALF). XXX Reunión Anual de la Sociedad de Farmaoclogía de
Chile. Coquimbo, Chile. 2008.

Carrillo C., Menares C., Vera C., Rojas R., Rojas, P.,Fritsch, R., Rojas, G.,

González, M.,Herrera, L., Fiedler, J.L. POLIMORFISMOS EN EL GEN DEL
RECEPTOR DE GLUCOCORTICOIDES Y EN EL RECEPTOR DE CRH TIPO 1:
ASOCIACIÓN CON LA RESPUESTA A ANTIDEPRESIVOS. XVIII Congreso de la
Asociación Latinoamericana de Farmacología (ALF). XXX Reunión Anual de la
Sociedad de Farmaoclogía de Chile. Coquimbo, Chile. 2008 (Poster)

Rojas, R., Rojas, P., Fritsch, R., Rojas, G., Herrera, L., Fiedler, J.L RITMO DE

SECRECIÓN DE CORTISOL Y SU RELACION CON EL POLIMORFISMO DE LA
CO-CHAPERONA FKBP51 EN PACIENTES DEPRESIVOS. XXIX Congreso de la
Sociedad de Farmacología de Chile. Iquique, Chile. 2007. (Poster)

Rojas RA, Rojas PS, Fritsch R, Rojas G, Herrera L, Fiedler JL. ANÁLISIS DE

ASOCIACIÓN ENTRE POLIMORFISMOS DE GENES RELACIONADOS AL
CONTROL DEL EJE HIPOTÁLAMO-HIPÓFISIS-ADRENAL, DEPRESIÓN MAYOR
Y RESPUESTA A ANTIDEPRESIVOS. VIII jornada de Investigación en Ciencia y
Tecnología “Innovación: herramientas para convertir las ideas en propuestas
para el desarrollo de temas país”. Facultad de Ciencias Químicas y
Farmacéuticas. Universidad de Chile. Santiago, Chile. 2007. (Poster)

Rojas P.S., Rojas R., Araya V., Fritsch R., Silva H., Herrera L., Fiedler JL. LOS

NIVELES DEL FACTOR NEUROTRÓFICO DERIVADO DE CEREBRO BDNF, SON
PREDICTIVOS DE LA RESPUESTA AL TRATAMIENTO DE LA DEPRESIÓN CON
EL ANTIDEPRESIVO DUAL VENLAFAXINA. XXIX Congreso de la Sociedad de
Farmacología de Chile. Iquique, Chile. 2007. (Poster)

J.L. Fiedler, P. Rojas, V. Araya, R. Fritsch, R. Rojas, L Herrera, G Rojas, H Silva.

EARLY RESPONSE TO VENLAFAXINE ANTIDEPRESSANT AND REMISSION
ARE CORRELATED WITH LOWER ACTH LEVELS PREVIOUS TO THE
PHARMACOLOGICAL TREATMENT. 2nd International Congress of Biological
Psychiatry. Santiago, Chile. 2007 (Poster)

Rojas R., Rojas P., Sapag A., Fritsch R., Rojas G., Herrera L., Fiedler JL. ANÁLISIS

DE ASOCIACIÓN ENTRE POLIMORFISMOS DE GENES RELACIONADOS AL
CONTROL DEL EJE HIPOTALAMO-HIPOFISIS ADRENAL, DEPRESIÓN MAYOR Y
RESPUESTA A ANTIDEPRESIVOS. Trabajo de Incorporación a la Sociedad
Científica. Simposio: Variabilidad en la respuesta farmacológica: ¿Cuál es el rol
de los polimorfismos en la farmacoterapia? XXVIII Congreso de la Sociedad de
Farmacología de Chile. Olmué, Chile. 2006. (Comunicación oral)
ÍNDICE DE CONTENIDOS Pág

ÍNDICE GENERAL ……………………………………………………………………… I
ÍNDICE DE FIGURAS …………...…………………………………………………....... IV
ÍNDICE DE TABLAS ……………………………...................................................... V
ABREVIATURAS .…………………………...………………………………………….. VI
SUMMARY...…………………………………………………….................................... VIII
RESUMEN...…………………………………………………………………………….. XI

INTRODUCCIÓN ………………………………………………………………………... 1
1. Generalidades del trastorno depresivo mayor……………………………………. 1
2. Cambios en la funcionalidad neuronal en sujetos con depresión mayor……… 3
3. Marcadores genéticos y depresión………….…………………………………….. 5
4. Sistema monoaminérgico, depresión y respuesta a antidepresivos…………… 7
5. Sistema hormonal del estrés, depresión y respuesta a antidepresivos……….. 11
6. Factores neurotróficos y respuesta a antidepresivos…………………………… 16

HIPÓTESIS……………………………………………………………………………….. 19

OBJETIVOS ….……………………………………………..…………………………… 19
1. Objetivo general …………………………………………………..………………… 19
2. Objetivos específicos………………………..…………………………....………... 20

MATERIALES Y MÉTODOS…………...……………………..…………………..…… 21
1. Sujetos de estudio………………………………….……...…………….………….. 21
1.1. Muestra de pacientes.……………………….….……….….……………...….. 21
1.2. Muestra control……………………………….….………………………...…… 22
1.3. Muestra poblacional………………...……..………………….……...………... 22
2. Protocolo de estudio clínico……………………………………..………………….. 22
2.1. Evaluaciones psiquiátricas………………………………………….…………. 22
2.2. Toma de muestra……………………………………………………………….. 24
3. Tratamiento farmacológico y evaluación de la respuesta clínica………………. 24
4. Evaluaciones endocrinológicas………….……….…………………………........... 25
4.1. Evaluación de los niveles de hormonas TSH y T4………………………..... 25
4.2. Evaluaciones del ritmo de secreción de cortisol y test de supresión con
dexametasona………….…………………………………………….………… 25
5. Estudio de polimorfismos de nucleótido simple (SNP)……………..…………… 26
5.1. Extracción de DNA………………………………………………………...…... 26
I
5.2. Diseño de oligonucleótidos…………………………...…...……....…………. 27
5.3. Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)……………….……………... 27
6. Genotipificación…………….……..……………………………………..…………... 28
6.1. Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) con partidores específicos. 28
6.2. Polimorfismo en el largo de los fragmentos de restricción (RFLP)………. 29
7. Polimorfismos en genes regulados por glucocorticoides………………………... 30
7.1. BDNF…………………………………………………………..….………......… 31
Val66Met (rs6265)………………………………………………...........…….... 31
7.2. Receptor 5HT ……………..……………………………………….…………. 33
1A
C(-1019)G (rs6295)……………………………………………………...…..… 33
8. Polimorfismos en genes que participan en la regulación del eje HHA………… 35
8.1. Receptor de glucocorticoides……………...….…………………….………... 35
Codón 22…………………………….………………………..………….……... 35
Codón 23………………...……………….…….…………………………......... 35
Codón 363…………………...………………..……………..……………......... 37
8.2. Inmunofilina FKBP5………………………………...…………………………. 39
rs1360780………………………………………………………………….……. 39
8.3. Receptor a CRH tipo I (CRHR1)…………………………………………...… 41
rs242941….………………………………..……………………………………. 41
9. Metabolización de fármacos antidepresivos: Gen CY2D6 ……………………... 43
10. Análisis estadístico………..……………...………………………….…………….... 45

RESULTADOS……………………………………………………………….................. 46
1. Descripción de las muestras de estudio…………………………..……………… 46
2. Comparación de frecuencias genotípicas en sujetos entre muestra
poblacional y sujetos con depresión……………………………………………… 47
3. Marcadores genéticos de riesgo para la patología depresiva…….................... 51
4. Respuesta al tratamiento farmacológico antidepresivo..................................... 55
5. Frecuencias genotípicas para los genes de interés de acuerdo a la respuesta
farmacológica………………………………………………………………………... 56
6. Marcadores genéticos de respuesta a la terapia antidepresiva………...……… 58
7. Evaluación del eje HHA en sujetos con depresión….………………………....... 60
8. Niveles de cortisol libre y su relación con las variantes rs1360780 en sujetos
depresivos…………………………………………………………………….……... 62

DISCUSIÓN……………………………………………………..………….................... 66
1. Estado del arte de la patología depresiva y la respuesta al tratamiento………. 66
2. Alteraciones en la funcionalidad del eje hipotálamo-hipófisis-adrenal y su
relación con la depresión mayor…………………………………………………... 67
II
3. Genes regulados por glucocorticoides y su relación con la depresión………… 75
4. Diversidad genética en estudios de asociación………………………………... 80
5. Limitaciones del estudio…………………………………………………………….. 84

CONCLUSIONES………………………….…………………………………………….. 88

BIBLIOGRAFÍA………………………………………………………………………….. 89

ANEXOS………………………………………………………………………………….. 106
Anexo 1. Estudio del polimorfismo CYP2D6*4……………………………………….. 107
Anexo 2. Consentimiento Informado…………………………………………………… 109
Anexo 3. Anexo de consentimiento informado……………………………………….. 110
Anexo 4. Certificación de aprobación del comité de ética institucional……………. 112
Anexo 5. Instructivo para la toma de muestra………………………………………… 113
Anexo 6: Ficha de recolección de datos………………………………………………. 114

III