AROMI ADDITIVI SEMILAVORATI INGREDIENTI A L I M E N T A R I Luglio/Agosto 2017 anno 16 - numero 93 3 4 5 0 4- 9 5 1 N S S P - I 7 - I 1 0 2 4/ n. T - S E V O D R O N A P B M 1 a m m o c 1 art. 6) 4 ° n 4 0 0 2 2/ 0 7/ 2 L. n v. i n o 3 (C ABSolutely 0 0 2 3/ 5 L. 3 Genuine Food D. P. - A. n d. i e p S a - p s e n a ali e It www.absfood.com st o P 10064 PINEROLO - ITALIA - Tel. 0121393127 - Fax 0121794480 59 C CHHIIRRIIOOTTTTII EEDDIITTOORRII [email protected] COP INGAL 2017.indd 4 30/06/17 10:24 PRIMI IN ITALIA, PRIMI NELLA QUALITÀ. Dalla coltivazione nei campi veronesi all’esclusiva lavorazione nel primo impianto di produzione italiano, nasce la soia testurizzata Top Agri Group, un prodotto di altissima qualità, dal gusto genuino e con una consistenza unica. TOPAGRIGROUP.COM Pag. Soia TopAgri 22x29_Ingredienti_Lug-Ago_V1.indd 1 22/06/17 11:33 RUBRICHE LUGLIO/AGOSTO 2017 anno 16 n. 93 14 Legislazione commentata Origine del latte: ordre, contrordre, desordre (A. Ambanelli) 18 Tecniche culinarie Nuovi format nella ristorazione moderna (M. Di Lorenzi) ARTICOLI 22 Food design 3. UNPLUGGED Dal Buontalenti al gelato in pastiglia (P. Barichella) 26 Marketing e tendenze 4. Confronto del contenuto Nuovi prodotti nel mondo in polifenoli di lattuga e spinaci biologici e convenzionali 30 Fiere Vitafoods Europe, a Ginervra record di visitatori ed espositori - Ingredienti per inte- F. Fratianni - D. Gallotta gratori e prodotti nutrizionali - Business Unit per una proposta nutraceutical globale - M.A. Belisario - A. Leone Peptidi di collagene per invecchiare meglio - Calendula sostenibile per l’estratto Lute- A. Sada - F. Nazzaro max - Estratti vegetali - Curcumina altamente biodisponibile - Salvia per migliorare le prestazioni cerebrali - Sostituto per proteine animali e vegetali - Soluzioni nutrizionali avanzate - Riso rosso fermentato granulare contro il colesterolo - Estratti tracciabili e standardizzati - Nuovi studi per il probiotico BC30 - Consulenza per l’industria ali- mentare - Probiotici - Tecnologia capsula-in-capsula per doppio rilascio - Astaxantina premium priva di contaminanti - Per la salute del sistema cardio-vascolare - Omega-3 da alghe - Glicomacropeptide (GMP) - Complesso di polifenoli di propoli ed estratto di CONTENTS opunzia 3. UNPLUGGED 42 Prodotti servizi Testurizzati vegetali innovativi - Pistacchio, in Sicilia si dice Marullo - Bere con gli occhi 4. Comparison of polyphenol - Tutto ruota intorno ai funghi - Semilavorati di qualità per i prodotti da forno - Soia content, pro- and antioxidant testurizzata 100% biologica, 100% italiana activity and mutagenicity of 48 Produzione laboratorio lettuce and spinaches between Tre sistemi per il dosaggio delle vitamine - Dosaggio degli zuccheri totali - Metodo per organic and conventional crops rilevare il trattamento dei frutti in post-raccolta F. Fratianni - D. Gallotta 50 Reportage visite M.A. Belisario - A. Leone Ingredienti innovativi per formulazioni del futuro (S. Musso) A. Sada - F. Nazzaro 54 Ricerca applicata Come la stevia controlla i livelli di zucchero nel sangue - Farina di riso nero e qualità del pane - Polpa di frutta: integrazione in fibre e antiossidanti - Estratto di pomodoro contro il tumore allo stomaco - Metodo innovativo per ferro biodisponibile - Snack a base di alghe marine e carapaci d’aragosta per l’integrazione di calcio DEPARTMENTS 58 Mercati e consumi 14 EDITED LAw 18 CULINOLOGy Il mercato degli ingredienti per dolci - La stevia nel mondo - Il mercato globale dei 22 FOOD DESIGN funghi - Previsioni di crescita per i sostituti delle uova - In crescita la domanda di 26 MARkETING & TRENDS antiossidanti - Aglio dalla Cina 30 ExhIBITION REPORT 64 Notizie dal mondo (VITAFOODS EUROPE) 42 PRODUCTS & SERVICES Sicuri i livelli di nitriti e nitrati aggiunti agli alimenti - Consulenza per l’autorizzazione 48 LABORATORy PRODUCTION di novel food e additivi per mangimi - Import dei cereali di qualità necessario per 50 REPORTAGE soddisfare il fabbisogno - Innovazione per la riduzione dello zucchero nei prodotti 54 APPLIED RESEARCh finiti - Continua la crescita del salone per il biologico italiano - Risultati positivi nel 58 MARkETING 2017 per Tate & Lyle - Fi Europe e Ni ritornato a Francoforte - Grano duro importato: sicuro per i consumatori - Appuntamenti 64 NEwS 72 ADVERTISERS’ LIST - 72 Elenco inserzionisti e indirizzi aziende COMPANIES’ ADDRESS BIMESTRALE - ISSN 1594-0543 CHIRIOTTI EdITORI sRL Viale Rimembranza 60 - 10064 Pinerolo - TO - Italia July/August Tel. 0121 393127 - Fax 0121 794480 year 16 nr. 93 E-mail: [email protected] dIRETTORE REspOnsABILE CApO REdATTORE Alberto Chiriotti Simonetta Musso [email protected] [email protected] A.N.E.S. COORdInATORE sCIEnTIfICO REdAzIOnE associazione nazionale editoria periodica specializzata Sebastiano Porretta Laura Sbarato, Rossella Contato, Chiara Mancusi, Matteo Barboni aderente a COnFIndUStrIa sEgRETERIA dI REdAzIOnE dIRETTORE mARkETIng Copyright Elena Folco Monica Pagliardi Clearance Center [email protected] [email protected] dIRETTORE COmmERCIALE REsp. sTRATEgIE pUBBLICITARIE Ottavio Chiriotti Francesco Coppola [email protected] [email protected] GUIDA PER GLI AUTORI AmmInIsTRAzIOnE REsp. TRATTAmEnTO dATI - I lavori originali devono avere il tito- Giuseppe Chiriotti Ottavio Chiriotti lo in italiano e inglese, possibilmente breve, ed essere corredati dai rispettivi ABBOnAmEnTI UffICIO TRAffICO riassunti in italiano ed inglese, ognu- no composto da un massimo di 1.000 Marilù Cianflocca Monica Primo battute, oltre alle relative parole chia- [email protected] [email protected] ve, sempre in italiano e inglese. Il do- cumento dev’essere salvato in formato Msword senza incorporare eventuali grafici, diagrammi, disegni e figure, che vanno salvati a parte in jpg ad alta riso- luzione (300 dpi). pER ABBOnARsI È bene: distinguere le lettere O e I dai numeri 0 e 1; usare il tasto “Enter” o Telefonare allo 0121 378147 (servizio abbonamenti) o spedire una e-mail a: “Invio” unicamente per terminare un [email protected] paragrafo, i titoli, i sottotitoli, ecc., ma non per suddividere le righe; non effet- Prezzo una copia € 1,00 - numeri arretrati € 10,00 tuare la sillabazione manuale con i trat- La riproduzione, anche parziale, di articoli ed illustrazioni pubblicati sulla tini; non numerare le righe; evidenziare i simboli greci (a, b, D, ecc.); usare il tasto rivista è riservata e non può avvenire senza espressa autorizzazione scritta tabulatore nelle tabelle. dell’Editore. • I nomi degli Autori e quelli degli Istitu- I manoscritti, i dischetti e le illustrazioni inviati alla redazione non saranno ti o Enti, presso i quali essi svolgono la restituiti, anche se non pubblicati. L’Editore non assume alcuna responsabilità loro attività, vanno sempre indicati per esteso, con l’indirizzo preciso. per quanto riguarda eventuali errori contenuti negli articoli e per quanto • È fatto obbligo di riportare le unità di espresso dagli Autori. misura ed i simboli secondo le direttive 1 anno in Italia € 45,00 - Estero € 65,00 pubblicate sulla Gazzetta Ufficiale (ad (via aerea € 95,00, US$ 130) esempio g - kg - t - m2 - s - L), così come i numeri con quattro o più cifre devono Versione elettronica in PDF: € 29,99 essere scritti interponendo il punto fra le migliaia e la virgola per i decimali. • La bibliografia va posta sempre al ter- mine dell’articolo; per ogni riferimento bibliografico vanno indicati nell’ordine: nomi degli autori (iniziale del nome e co- STAMPA: Tipolitografia Giuseppini Soc. Coop. - Pinerolo gnome per esteso), titolo fra virgolette, PROPRIETÀ: © 2017 Chiriotti Editori srl nome della rivista, numero del volume, PERIODICITÀ: bimestrale - sped. in A.P. comma 20/B, art. 2, legge 662/96 - Torino numero della prima e dell’ultima pagina INTERNET: http://www.chiriottieditori.it dell’articolo, anno di pubblicazione. Suppl. a “Industrie Alimentari” - Aut. Tribunale di Pinerolo n. 262 (19-11-1962) • Le bozze di stampa sono inviate agli Autori una sola volta. This monthly journal is published by Chiriotti Editori srl • All’Autore verrà inviata via mail una Viale Rimembranza, 60 - 10064 Pinerolo - Italy copia in PDF dell’articolo impaginato, Tel. +39 0121 393127 - Fax +39 0121 794480 che potrà essere duplicato o usato per E-mail: [email protected] stampare estratti in quantità illimitata, yearly subscription abroad senza alcun onere. PDF version € 29,99 • I lavori devono essere inviati via mail Surface mail: € 65.00 - Air mail: € 95.00, US$ 130 a: [email protected] unplugged biologiche, i vegani, gli sportivi lo uno slogan, spogliando il che necessitano di alimenti, marchio della propria identità bevande e integratori energiz- per far spazio ai nomi dei clienti zanti, idratanti e proteici. (il vasetto di Andrea o Sara). Poi nella stessa etichetta ha ripor- Il segmento di mercato tato 135 espressioni dialettali, maggiormente significativo dalla Valle d’Aosta alla Sicilia. è però caratterizzato dalla Anche CocaCola ha capito che tendenza imitativa per la quale personalizzare un prodotto di vige “Se funziona per loro, largo consumo paga, perché lo funziona anche a me “. I primi si differenzia e, idealmente, lo sono stati senza dubbio gli si rende unico. emuli del consumo di alimenti attuale, anzi della sua frammen- e bevande per sportivi a cui È una versione evoluta della tazione: se nel dopoguerra i “Solo per te” hanno fatto seguito quelli del segmentazione di mercato per segmenti per il consumo erano i gluten/lactose-free, soggetti target, dove si diversifica il maschi, le femmine e i bambini, Più volte abbiamo sottoline- che, senza alcuna motivazione oggi, ad esempio, per i produt- ato come l’attuale mercato fisiologica che ne giustificasse tori americani di automobili un alimentare sia fortemente ca- la scelta, segmento molto significativo è ratterizzato da stili di consumo acquistano e offerto da chi consuma pasti e legati, da un lato, a specifiche consumano bevande in macchina e quindi esigenze dettate da condizioni prodotti per necessita di vani porta-alimenti di salute (intolleranti, allergici) regimi alimentari e zone riscaldanti/raffreddanti e, dall’altro a diversi ed estesi specifici. all’interno dell’abitacolo. segmenti di popolazione che seguono regimi alimentari fun- Ai regimi alimen- contenitore, anziché Siamo al prodotto su misura, zionali alla ricerca di uno stato tari e alle necessità il contenuto: d’altronde alle edizioni limitate che con- di benessere, compatibili con salutistiche si accompagnano i proporre 100 varianti di una sentono di sentirci unici, alle altre scelte dettate, ad esempio, prodotti emozionali, o meglio, confezione costa meno ed è vesti grafiche che rimangono in da motivazioni religiose/etiche. personalizzati al punto che il certamente meno complicato commercio per poco tempo per Tra quelli del secondo tipo si prodotto di massa diventa (qua- e rischioso che produrre 100 offrire l’idea che quel prodotto annoverano i seguaci di diete si) su misura. varianti di prodotto. Si lanciano sia acquistabile ora o mai più. campagne social e s’inventano All’inizio furono i baci Peru- premi unici (tazze, cucchiai henry Ford all’inizio del xx gina: un aforisma diverso in personalizzati, ma pur sempre secolo diceva: “ogni cliente può ogni cioccolatino, la sorpresa brandizzati). ottenere una Ford T di qualun- dell’esclusiva in un contesto que colore, purché sia nero”. industriale seriale. Da allora ci “Car food” sono voluti anni, mode e tecno- logia per arrivare agli esempi Più volte da queste pagine di oggi: la Nutella ha iniziato abbiamo trattato dell’eccessiva facendo diventare il baratto- segmentazione del mercato ingredienti alimentari - xvi (2017) - agosto 3 Confronto del Contenuto in polifenoli di lattuga e spinaCi F. Fratianni1* - D. Gallotta2 - M. A. Belisario2 - A. Leone1,2 - A. Sada1,2 - F. Nazzaro1 1Istituto di Scienze dell’Alimentazione, biologiCi e Convenzionali CNR - Via Roma, 64 - 83100 Avellino 2Dipartimento di Farmacia, Università di Comparison of polyphenol content, pro- and antioxidant activity and mutagenicity Salerno - Via Ponte don Melilli, Fisciano of lettuce and spinaches between organic and conventional crops - Salerno *email: [email protected] • PAROLE ChIAVE Introduzione polifenoli, antiossidanti, prodotti biologici • kEywORDS La qualità degli alimenti (frutta, polyphenols, antioxidants, organic products ortaggi, carne, latte e formag- gi) dipende da un insieme di fattori di natura chimica, nutrizio- nale, sensoriale e microbiologica che agiscono in modo sinergico tra di loro. È noto da tempo che, • SOMMARIO • SUMMARy lungo le filiere produttive degli È stata effettuata una valutazione comparativa di Organically and conventionally grown spinaches alcune caratteristiche biochimiche e biologiche and lettuce were compared in terms of some alimenti sia di origine animale che (polifenoli totali, attività pro ed antiossidante, biochemical and biological aspects. Total vegetale, il tipo di coltivazione e/o mutagenicità e antimutagenicità) degli estratti polyphenols were, similar, thus independent from ottenuti da lattuga e spinaci provenienti da type of agricultural practise. More differences produzione (ad esempio biologica coltivazioni biologiche e convenzionali. Per were observed for the antioxidant activity (DPPh o convenzionale) esercita un ruolo quanto riguarda il contenuto totale di polifenoli method), resulting higher in organic spinaches non si è notata una variazione significativa fra le than in the conventional ones. Ames test did not importante nel determinare la due tipologie di coltivazione. Differenze maggiori reveal mutagenicity in the conventional products; qualità dell’alimento finito. Mal- sono state determinate nell’attività antiossidante a more evident antimutagen activity was recorded (valutata con metodo DPPh), che è risultata in the organic ones (until 80% inhibitory activity). grado i prodotti biologici vengano maggiore per gli estratti da spinaci biologici The pro-oxidant and anti-oxidant activity, ancora considerati dal mercato rispetto ai corrispettivi convenzionali. Il test di performed using normal and tumoral human cell Ames non ha indicato capacità mutagena degli lines did not indicate evident differences among come produzione “di nicchia”, da estratti convenzionali, in ogni caso, comunque, organic and conventional products. diversi anni si osserva una no- si è notata una maggiore attività antimutagena (fino all’80% di inibizione) nei prodotti biologici. tevole diffusione delle pratiche Il test di attività pro-ossidante e anti-ossidante, colturali biologiche, il che deter- effettuato su linee cellulari umane normali e tumorali, non ha indicato evidenti differenze mina una serie di effetti positivi dipendenti dalla pratica colturale utilizzata. che si ripercuotono anche a livello ambientale su suolo, acqua e aria (www.genitronsviluppo.com. “alimentazione-biologica-biodi- 4 ingredienti alimentari - xvi (2017) - agosto ingredienti alimentari - xvi (2017) - agosto 5 funzionali & bio namica-convenzionale-confron- tare, dopo aver valutato i rischi 2004). L’apporto di frutta e verdu- to-mangiare-sano”). Molti studi derivanti dalla presenza di nitrati ra è essenziale in questo tipo di fatti negli ultimi anni sono stati negli ortaggi, ha concluso che gli dieta: infatti, è ormai consolidata finalizzati proprio al confronto effetti positivi dovuti al consumo la teoria secondo cui è opportuno tra i prodotti vegetali ottenuti da di frutta e verdura sono superiori consumare quotidianamente la pratiche colturali convenzionali e ai potenziali rischi per la salute quantità ideale di 5 porzioni di da coltivazioni biologiche. Alcuni (Monaco et al.,2004). frutta e verdura; indubbi sono i lavori hanno mostrato che nel vantaggi dovuti al ridotto potere periodo compreso tra il 1995 e il La dieta che maggiormente pre- calorico e all’ingente quantità 2003, i prodotti biologici conte- vede un elevato utilizzo di frutta d’acqua che questi alimenti con- nevano meno pesticidi e meno e verdura è quella mediterranea: tengono, ma l’aspetto più impor- nitrati; in Germania, ad esempio, questo modello nutrizionale, tante è legato all’azione protettiva hanno rinvenuto, in un vasetto di praticamente nato con le civiltà esercitata da tali alimenti contro paprica in polvere, fino a 22 pe- che si sono affacciate sul mar malattie cardiache e cancro: ciò è sticidi diversi, con la presenza di Mediterraneo, è ancora ispirato dovuto ad una serie di biomole- cole attive normalmente presenti nei vegetali, tra i quali i polifenoli, a cui è riconosciuto da tempo un elevato potere antiossidante (Fito et al., 2007). Gli antiossidanti sono molecole capaci d’inibire l’inizio o la propa- gazione delle reazioni di ossi- dazione a catena (Finley, 2005). Tra gli antiossidanti naturali si conoscono l’acido ascorbico, i polifenoli, il beta-carotene ecc. (www.isa.cnr.it/barba/antiossi- danti). L’importanza della frutta e della verdura come fonti natu- rali di composti quali i polifenoli e gli antiossidanti in genere è supportata da numerosi studi epidemiologici, che hanno or- mai definitivamente accertato la presenza di un forte legame tra il consumo di tali biomolecole ad una riduzione del rischio di alcune 59 veleni chimici (www.eltamiso. alle tradizioni alimentari dei paesi tipologie di cancro, patologie it/newsletters%202008/NEw- europei del bacino mediterraneo, cardiovascolari, asma e diabete. SLETTER%2045-2008). Alcuni in particolare Italia, Francia me- Sono state, inoltre, evidenziate dati ufficiali hanno dimostrato ridionale, Grecia e Spagna (Serra altre loro proprietà biologiche che sono troppo elevati quasi 700 Majem et al., 2004). Questa dieta, antivirali ed antimicrobiche (Boyer dei valori massimi di pesticidi che considerata in passato troppo po- et al., 2004). È ormai accertato possono essere contenuti nella vera e poco interessante, è stata che diverse malattie neurodege- frutta e nella verdura in tutti i riscoperta solo da alcuni decenni, nerative possono avere origine paesi dell’UE (ec.europa.eu/san- quando si è individuato un forte proprio da reazione di ossidazione co_pesticides/public/index.cfm). legame tra modello alimentare a catena: pertanto, la presenza dei Malgrado ciò, l’EFSA, l’autorità e salute dell’uomo (Dominguez polifenoli viene considerata come europea per la sicurezza alimen- et al., 2007; Serra-Majem et al., una buona azione preventiva, in ingredienti alimentari - xvi (2017) - agosto 5 quanto essi sono capaci di agire coltivata in vari periodi dell’anno Analisi come vasodilatatori, antiossidanti, e in diversi ambienti climatici, e antimutageni, antinfiammatori può essere consumata sia cruda biochimiche (Boyer et al., 2004) e, a livello che cotta. La scelta di analizzare intestinale, sono metabolizzati proprio questi due ortaggi, verifi- Le analisi biochimiche hanno dalla microflora intestinale be- cando se e come la diversa pratica riguardato la determinazione del nefica, liberando altre molecole colturale possa influenzarne al- contenuto totale in polifenoli e l’at- che a loro volta hanno effetto cune caratteristiche biochimiche tività antiossidante. benefico su probiotici presenti e biologiche, è stata dettata dal nel microbiota intestinale (Parkar fatto che essi sono molto diffusi et al., 2008; hollman et al.,1999). e rappresentano, da un punto di Polifenoli totali Scopo del presente lavoro è stato vista normativo, due categorie quello di studiare l’influenza del di prodotti soggette in maniera tipo di coltivazione, biologico e completamente opposta a vincoli Il contenuto totale in polifenoli è convenzionale, su alcune caratte- di controllo colturale: la lattuga, stato determinato per via spet- ristiche biochimiche (contenuto in infatti, viene sottoposta a mag- trofotometrica a 760 nm secondo polifenoli totali, attività antiossi- giori controlli per alcuni parametri la metodica descritta da Single- dante) e biologiche (capacità pro qualitativi, quali, ad esempio, il ton e Rossi (1965), utilizzando il e antiossidante su cellule, attività quantitativo di nitrati, al contrario reattivo di Folin-Ciocalteau. La mutagena ed antimutagena) di degli spinaci, che non rientrano concentrazione dei polifenoli è due tipi di ortaggi presenti nella generalmente tra gli alimenti stata calcolata sulla base di una dieta mediterranea, gli spinaci da monitorare in maniera molto retta di taratura costruita con- e la lattuga. Gli spinaci (Spinacia restrittiva. testualmente usando quercetina oleracea) di origine orientale, come standard. Il contenuto di sono al top della classifica in tutte polifenoli nei diversi campioni Materiali le diete ipocaloriche per le loro saggiati è stato espresso come proprietà nutritive e il basso con- mmoli equivalenti di quercetina e metodi tenuto calorico. In questo tipo di /ml di estratto. Ogni campione verdura, oltre alla presenza di sali è stato saggiato in triplicato e il minerali quali rame, fosforo, zinco, I campioni di spinaci e lattuga sia saggio è stato condotto almeno calcio, potassio, troviamo un alto di coltura biologica che con- due volte separatamente. contenuto di vitamina A e C, e venzionale sono stati ottenuti in misura minore di vitamine E, dalla stessa azienda agricola sita Attività antiossidante k, B1, B2, B6, PP. Ciò attribuisce a Capua (CE). Una volta giunti agli spinaci un potere rimineraliz- in laboratorio, essi sono stati zante, tonificante e cardiotonico. delicatamente puliti dal terriccio L’attività antiossidante è stata Negli ultimi anni gli spinaci hanno, presente e subito processati per valutata attraverso la determina- inoltre, suscitato interesse anche le indagini analitiche. I campio- zione dell’attività radical-scavenger per il loro quantitativo di sostanze ni sono stati omogeneizzati in dell’estratto (Brand-williams et antiossidanti, tra cui i flavonoidi, miscela etanolo:metanolo:acetone al.,1995), utilizzando il radicale noti come anti cancerogeni e anti (15:15:70) in rapporto 1:3 (peso/ stabile DPPh (2.2 difenil-1 picri- infiammatori. Il secondo alimento volume), e tenuti a 4°C per 1 h lidrazile) in soluzione metabolica. scelto, la lattuga, è una Composita sotto agitazione; l’omogenato così L’analisi è stata condotta in mi- annuale che presenta un “cespo” ottenuto è stato centrifugato a cropiastre addizionando 7,5 mL costituito da foglie a spatola o freddo (13.000 rpm x 15’) (Fra- di estratto a 300 mL di soluzione tondeggianti inserite in un breve tianni et al., 2007). Il sopranatante metanolica di DPPh (153 mM), fusto e serrate in modo da costi- è stato conservato a -25°C fino e misurandone per via spettrofo- tuire un “grumolo” o “cappuccio” al momento delle analisi; tutte le tometrica (Varian Cary 50 MPR, più o meno compatto. Dal sapo- operazioni sono state condotte USA) il decremento in assorbanza re fresco e delicato, la lattuga è proteggendo i campioni dall’espo- (I = 517 nm) nel tempo rispetto ad tra le insalate più diffuse; viene sizione diretta alla luce. un bianco (metanolo). 6 ingredienti alimentari - xvi (2017) - agosto ingredienti alimentari - xvi (2017) - agosto 7 funzionali & bio Analisi biologiche (1983). Il mutageno standard è Valutazione dell’attività anti- e stato aggiunto alla miscela formata pro-ossidante. Per la valutazione Il test di Ames è stato effettuato dagli estratti vegetali (50 mL), la dell’attività anti-/pro-ossidante seguendo il protocollo di Maron coltura microbica di S. typhimu- dei campioni biologici in esame su e Ames (1983), Mortelmans e rium TA 98 o TA 100, e tampone cellule, sono stati impiegati sia lin- Zeiger (2000), e Nazzaro et al. fosfato. Dopo incubazione a 37°C fociti da donatori sani (peripheral (2008). Il test di Ames utilizza per 30’, la miscela è stata versata blood mononuclear cells, PMBC) ceppi di Salmonella typhimurium sulle piastre di Minimal Medium sia una linea cellulare di origine his-, ognuno dei quali è in posses- Agar precedentemente appron- leucemica (cellule U937, pro-mo- so, nel proprio corredo genetico, tate, ed incubata a 37°C per 48h. nociti). di diverse e specifiche mutazioni nei geni che codificano per l’ope- rone istidina; per il test sono stati utilizzati, in particolare, il ceppo S. typhimurium TA 98 e S. typhimu- rium TA 100. 1) Test di mutagenicità Nel saggio sono stati utilizzati i seguenti componenti: 2 mL di top agar (agar 0.7 % supplementato con il 10% di Bio-his 0.5 mM), 100 mL dei ceppi microbici, 50 mL degli estratti e tampone fosfato di sodio 0.1M ph 7.4. Gli estratti, ottenuti con la metodica precedentemente descritta, sono stati portati a secco e normalizzati a 1 mL con DMSO. La miscela è stata accuratamente mescolata, versata su piastre di Minimal Medium Agar preceden- Come controllo negativo sono stati Isolamento dei PBMC. Il sangue temente approntate, ed incubata presi in considerazione i revertanti (buffy coats, gentilmente forniti a 37°C per 48h. Come mutageni spontanei; come controllo posi- dall’Ospedale di Battipaglia-Salerno) standard, nel controllo positivo, tivo è stata invece considerata la da donatori sani è stato diluito 1:1 sono stati utilizzati 2-nitrofluorene miscela formata dal ceppo micro- con tampone fosfato isotonico. La (2NF, 4 mg/piastra) per il ceppo TA bico e dal solo agente mutageno sospensione cellulare è stata quindi 98 e Sodio Azide (5 mg /piastra) per standard (2-NF per TA 98; sodio stratificata su Ficoll-Paque Plus e il ceppo TA 100. Il background di azide per TA 100). centrifugata a 1800 rpm La banda revertanti spontanei normalmente contenente le cellule è stata nuova- accettato in letteratura per questi L’attività antimutagena è stata mente diluita 1:1 con il tampone e due ceppi è di 20-50 UFC/piastra espressa come percentuale di centrifugata a 1700 rpm per 10 min. per il TA 98 e di 80-200 UFC/pia- inibizione: [1 - (T -S/M - S)] • 100, Il pellet cellulare è stato risospeso stra per il TA 100, dove UFC= Unità assumendo T come il numero di in tampone (hank’s balanced salt Formanti Colonie. I test sono stati revertanti spontanei/piastra in solution, hBSS). È stato valutato al effettuati in triplicato. presenza del mutageno standard e microscopio il numero e la vitalità dell’estratto vegetale, M il numero delle cellule mediante saggio di 2) Test di antimutagenicità di revertanti/piastra nel controllo esclusione con tripan blue. positivo, e S come il numero di Il test è stato condotto essenzial- revertanti spontanei/piastra (Ong Cellule in coltura. Le U937 sono mente secondo Maron e Ames et al. 1986). state mantenute in coltura in ingredienti alimentari - xvi (2017) - agosto 7 RPMI, contenente 10% Fetal Calf Serum, 2 mM L-glutammina e an- tibiotici (100 U/ml penicillina, 100 µg/ml streptomicina) a 37°C in atmosfera umidificata con 5% CO . 2 Trattamento delle cellule e saggio per la valutazione dei livelli intracel- lulari di specie reattive dell’ossigeno (ROS). Le cellule sono state risospese (1 x 106 cellule/ml) in tampone hBSS, suddivise in aliquote ed incubate per 1 h a 37°C (in agitazione) con: Fig. 1 - Attività antiossidante valutata attraverso la capacità degli estratti di inibire, in vitro, il il solo veicolo (controllo negativo) radicale DPPH. gli estratti dei campioni in esame (100 mL) (misura di attività pro-ossi- dante) viene valutata mediante citofluori- campioni ottenuti da coltivazione metria (canale FL-1) o spettrofluo- biologica e convenzionale. Questo 100 µM di tert-butilidroperossido rimetria. risultato è in accordo con heimler (t-BOOH, agente ossidante) et al. (2009) il quale non ha riscon- trato differenze significative tra Risultati 100 µM t-BOOh in combinazione le due pratiche colturali (valutate con i campioni in esame (100 mL) su cicoria) ma, al contrario, è in (misura di attività anti-ossidante) contrasto con quanto riportato da Analisi biochimiche altri studi, fatti sempre sul con- In seguito, le cellule sono state fronto tra coltivazioni biologiche lavate con hBSS e risospese nello Obiettivo principale del presente e convenzionali; i quali hanno stesso tampone addizionato con lavoro è stato quello di indivi- dimostrato come il contenuto in 10 mM di 2’,7’-diclorodiidrofluo- duare se la diversa pratica coltu- polifenoli totali aumenti in una resceina diacetato per 20 min a rale (convenzionale o biologica) pianta coltivata secondo pratica 37°C. Questo tracciante è per- determini eventuali differenze sul colturale biologica, come risposta meabile alle cellule. Una volta contenuto in polifenoli, sull’attività dell’organismo vegetale agli stress penetrato, esso viene deacetilato antiossidante e su alcune proprietà biotici ed abiotici (insetti, funghi, ed in presenza di ROS è ossidato a biologiche (mutagenicità, attività parassiti, virus, condizioni pedocli- diclorofluoresceina (DCF), compo- pro- ed antiossidante su cellule) matiche), che vengono percepiti di sto fluorescente (l ex: 488, l em: di spinaci e di lattuga. Come si meno, soprattutto per gli attacchi 530). La fluorescenza della DCF, può osservare in Tab. 1, il conte- biotici, rispetto alle piante coltivate proporzionale al contenuto di ROS, nuto dei polifenoli non varia tra i in maniera convenzionale, quindi con uso di fitofarmaci (Alexieva, et al., 2001). Per quanto riguarda l’at- tività antiossidante, valutata come Tabella 1 - Contenuto in polifenoli totali (mM di quercetina equivalente/mL di estratto). capacità degli estratti vegetali di inibire il radicale DPPh, nel nostro POLIFENOLI TOTALI mMoli di quercetina equivalente/mL di estratto (±DS) studio i risultati più significativi Lattuga biologica 0,764(0,02) sono stati osservati per gli spinaci Lattuga convenzionale 0,652(0,05) Spinaci biologici 3,421(0,15) (vegetali a foglia verde scura), per Spinaci convenzionali 3,345(0,33) i quali i campioni biologici hanno 8 ingredienti alimentari - xvi (2017) - agosto ingredienti alimentari - xvi (2017) - agosto 9
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