Genótipo Duffy e Gravidade das Manifestações Clínicas na Anemia Falciforme

100 Pages·2011·1.27 MB·Portuguese

GRAZIELLE MECABO

Genótipo Duffy e Gravidade das
Manifestações Clínicas na Anemia
Falciforme

Tese apresentada à Universidade Federal
de São Paulo, Escola Paulista de Medicina,
para a obtenção do título de Mestre em
Ciências.

São Paulo
2011
GRAZIELLE MECABO

Genótipo Duffy e Gravidade das
Manifestações Clínicas na Anemia
Falciforme

Orientadora:
Profa Dra Maria Stella Figueiredo
Coordenadora do curso de Pós Graduação:
Profa Dra Gisele Wally Braga Colleoni
Disciplina de Hematologia e Hemoterapia
UNIFESP/EPM

São Paulo
2011
Mecabo, Grazielle

xv,91p

Genótipo Duffy e Gravidade das Manifestações Clínicas na Anemia
Falciforme/ Grazielle Mecabo.-- São Paulo, 2011.

Dissertação (Mestrado) – Universidade Federal de São Paulo, Escola Paulista
de Medicina. Programa de Pós-graduação em Hematologia.
Título em Inglês: Duffy Genotype and Clinical Manifestations Severity in Sickle
Cell Anemia

Descritores: 1. Anemia Falciforme 2. Polimorfismos Gênicos 3. Sistema do
Grupo Sanguíneo Duffy 4. Antígenos de grupos Sanguíneos 5. Genótipo
Aos meus pais Pedro e Nilve
e ao meu irmão Pedro Junior,
por todo amor, incentivo e apoio.

Ao meu Tio Senno (sempre
presente), por todo o carinho.

i
Este projeto foi desenvolvido com o suporte financeiro da FAPESP
(Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo, São Paulo,
Brasil, Processo 05/55237-9) e do CNPq (Conselho Nacional de
Desenvolvimento Científico e Tecnológico, bolsa de Mestrado).
ii
Agradecimentos:

À Deus, pela vida e por todas as bênçãos.

À Profa Dra Maria Stella, minha orientadora, aquela que permitiu que este
caminho fosse trilhado, pelo apoio, paciência, confiança e pelo exemplo de
pesquisadora.

À Marily, pelos ensinamentos e apoio em todos os momentos desse trabalho.

À Débora, minha parceira desse trabalho, pela amizade e apoio.

À Martha Mariana, pela amizade, confiança, incentivo e ajuda.

Aos funcionários da Disciplina de Hematologia e Hemoterapia da
UNIFESP/EPM por toda colaboração.

Aos pacientes do Ambulatório de Hemoglobinopatias, pela inestimável
colaboração para o estudo.

À Bianca e aos funcionários do Banco de Sangue pela colaboração.

Aos amigos: Faustino, Norma, Claudia, Bruna, Arthur, Alessandra, Cris, Carol,
Roberta e Bruno por todo companheirismo, alegria e ajuda nos laboratórios de
pesquisa.

iii
A todos os meus amigos e amigas: Bela, Teca, Tule, Adri, Lívia, Daniel, Thaís,
Mindy, Fer, Dany, Silvia, Marion, Isa, Guto, Gabi, Naty, Laressa, Mariane,
Thyeme, e Renata por todo apoio, cumplicidade, carinho.

À minha Vó Olinda, e a todos os meus familiares por todo incentivo e apoio.

Ao meu irmão, meu melhor amigo e meu maior orgulho, por toda a
cumplicidade e confiança e, à Kamila, pela paciência e apoio.

Aos meus pais, por serem a minha base mais sólida, por todo amor, carinho e
incentivo.

iv
páginas
Sumário
Dedicatória i
Agradecimentos iii
Lista de Figuras e Gráficos vi
Lista de Tabelas e Quadros vii
Lista de Abreviaturas e Símbolos ix
Resumo xii
Abstract xiv
1 Introdução 1
1.1 Objetivos 4
2 Revisão de Literatura 5
3 Casuística 26
4 Métodos 27
5 Resultados 47
6 Discussão 61
7 Conclusões 68
8 Referências Bibliográficas 69
APÊNDICES 75
ANEXOS 90

v
Lista de Figuras e Gráficos
Figura 1: Representação em 3 dimensões de modelo GPD compacto 18
utilizando software Dino.
Figura 2: Eletroforese da amplificação do exon 2 do gene DUFFY em gel 33
de agarose 2%.
Figura 3: Foto da eletroforese em gel de agarose da digestão com a 35
enzima BanI do produto da PCR do exon 2.
Figura 4: Foto da eletroforese em gel de agarose da digestão com a 36
enzima MspA1I do produto da PCR do exon 2.
Figura 5: Foto da eletroforese em gel de agarose da digestão com a 38
enzima MwoI do produto da PCR do exon 2.
Figura 6: Eletroforese da amplificação da região promotora GATA em gel 39
de agarose 2%.
Figura 7: Foto da eletroforese em gel de Low Melting da digestão com a 41
enzima StyI do produto da PCR da região promotora GATA.
Figura 8: Eletroesferograma da região do polimorfismo rs12075 44
(125G>A) no exon 2.
Figura 9: Eletroesferograma das regiões das mutações rs34599082 44
(265C>T) e rs13962 (298G>A) no exon 2.
Figura 10: Eletroesferograma da região da mutação rs281477 (-33T>C) 45
na região promotora GATA..
Gráfico 1: Análise da manifestação de PAP segundo fenótipo Duffy 55
Negativo ou Positivo.
Gráfico 2: Análise da manifestação de AVE segundo fenótipo Duffy 59
Negativo ou Positivo.

vi
Lista de Tabelas e Quadros
Quadro 1: Terminologia do Sistema de grupo sanguíneo Duffy 14
adotada pela Sociedade Internacional de Transfusão
Sanguínea.
Tabela 1: Sequência de primers utilizados na genotipagem do 32
gene DUFFY.
Tabela 2: Sequência de primers iniciadores utilizados na 38
genotipagem do GATA.
Tabela 3: Freqüência alélica do gene DUFFY polimorfismo 48
rs12075 (125G>A) e freqüência das mutações
rs2814778 (-33T>C), rs34599082 (265C>T) e rs13962
(298G>A) nos pacientes com AF.
Tabela 4: Resultado da genotipagem dos indivíduos portadores 49
do fenótipo Fy(a+b-).
Tabela 5: Resultado da genotipagem dos indivíduos portadores 50
do fenótipo Fy(a+b+).
Tabela 6: Resultado da genotipagem dos indivíduos portadores 51
do fenótipo Fy(a-b+).
Tabela 7: Resultado da genotipagem dos indivíduos portadores 51
do fenótipo Fy(a+b+).
Tabela 8: Distribuição das manifestações laboratoriais segundo 53
fenótipo Duffy Negativo ou Positivo.
Tabela 9: Distribuição da manifestação de PAP segundo fenótipo 54
Duffy Negativo ou Positivo.
Tabela 10: Distribuição da manifestação de priapismo segundo 56
fenótipo Duffy Negativo ou Positivo.
vii