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FERNANDA MARQUES CASTRUCCI Relação Ancestral do Clone Endêmico de Pseudomonas aeruginosa produtor de SPM-1: Análise Comparativa entre Eletroforese em Campo Pulsátil e Tipagem por Seqüenciamento de Múltiplos Loci Tese apresentada à Universidade Federal de São Paulo - Escola Paulista de Medicina para obtenção do Título de Mestre em Ciências. São Paulo 2008 FERNANDA MARQUES CASTRUCCI Relação Ancestral do Clone Endêmico de Pseudomonas aeruginosa produtor de SPM-1: Análise Comparativa entre Eletroforese em Campo Pulsátil e Tipagem por Seqüenciamento de Múltiplos Loci Tese apresentada à Universidade Federal de São Paulo - Escola Paulista de Medicina para obtenção do Título de Mestre em Ciências. Orientadora: Profa. Dra. Ana Cristina Gales Universidade Federal de São Paulo - UNIFESP Co-orientadora: Dra. Suzane Silbert Universidade Federal de São Paulo - UNIFESP Este trabalho foi realizado com auxílio financeiro fornecido pela Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP). Processo nº 2005/57496-1). São Paulo 2008 ii CASTRUCCI, Fernanda Marques Relação Ancestral do Clone Endêmico de Pseudomonas aeruginosa produtor de SPM-1: Análise Comparativa entre Eletroforese em Campo Pulsátil e Tipagem por Seqü enciamento de Múltiplos Loci. Fernanda Marques Castrucci - São Paulo, 2008. xix, 138f. Tese (Mestrado) – Universidade Federal de São Paulo. Escola Paulista de Medicina. Programa de Pós-gradua ção em Doenças Infecciosas e Parasitárias Título em inglês: Ancestral relationship of endemic clone of Pseudomonas aeruginosa producing SPM-1: Comparative analysis among Pulsed field gel electrophoresis and Multilocus sequence typing. Key-words: 1. Pseudomonas aeruginosa 2. Tipagem Molecular 3. PFGE 4.MLST iii UNIVERSIDADE FEDERAL DE SÃO PAULO ESCOLA PAULISTA DE MEDICINA DISCIPLINA DE INFECTOLOGIA Chefe do Departamento: Prof. Dr. Angelo Amato Vincenzo de Paola Coordenador do curso de Pós-graduação: Prof. Dr. Ricardo Sobhie Diaz São Paulo 2008 iv FERNANDA MARQUES CASTRUCCI Relação Ancestral do Clone Endêmico de Pseudomonas aeruginosa produtor de SPM-1: Análise Comparativa entre Eletroforese em Campo Pulsátil e Tipagem por Seqüenciamento de Múltiplos Loci BANCA EXAMINADORA: Titular: Profª. Drª Luci Corrêa Titular: Profa Dra Beatriz Meurer Moreira Titular: Prof. Dr. Afonso Luís Barth Suplente: Profª. Drª. Libera Maria Dalla Costa Aprovada em: ___/___/___ v “Há mais dos meus pais em mim do que eu supunha...” (anônimo) vi Ao meu pai Antonio, que abriu mãos de suas realizações pessoais para proporcionar as nossas ... Dedico vii Também... À minha mãe Shirley, exemplo de dedicação e amor incondicional... À minha avó Romilda, que admiro e tanto amo... Aos meus irmãos Simone e Bruno, por saber que sempre teremos uns aos outros... Ao meu marido Luiz, por partricipar dos meus sonhos, proporcioná-los e ser tão companheiro... Dedico... viii AGRADECIMENTOS Agradeço à Profª Drª Suzane Silbert por abrir as portas do LEMC e do Setor de Tipagem Molecular, por aceitar a co-orientação e por todos os ensinamento e amizade. Agradeço à Drª Ana Cristina Gales por aceitar orientar-me e por todos os ensinamentos, e ser um exemplo de sabedoria e profissionalismo. Agradeço ao Prof. Dr. Antonio Carlos Campos Pignatari, por todos os ensinamentos e por ser um exemplo a seguir. Agradeço à Miriam do Carmo, Adriana Nicoletti e à Raquel Girardelo pela ajuda técnica e grande amizade. Agradeço à Jussima Monteiro e Andréa Pereira por terem sido tão maravilhosas! Agradeço aos alunos de iniciação ciêntífica Vinícius Sales e Bruna Teixeira, e à mestranda Paula Ignez por toda ajuda no setor de Tipagem Molecular. Agradeço a Fernanda Inoue e ao Rodrigo Cayô por toda amizade, ombro amigo, companheirismo e força. A contribuição que vocês deram foi inestimável! Devo muito à vocês! Agradeço ao secretário da Disciplina de Infectologia Charlys por ter sido tão prestativo, eficiente e amigo. E a secretária do Laboratório Rosana Capecce pelo coleguismo e ajuda profissional. Agradeço ao meu grande amigo Wagner Cid Parente por ter sido precursor e responsável por tudo isso. Agradeço a todos os meus amigos e companheiros do LEMC/ALERTA por me fazer crer que o melhor do mestrado são as pessoas!!! ix SUMÁRIO ÍNDICE DE ABREVIATURAS E SIGLAS ........................................................ XIII ÍNDICE DE TABELAS ..................................................................................... XV ÍNDICE DE FIGURAS .................................................................................... XVI RESUMO .......................................................................................................XVIII 1 - JUSTIFICATIVA ............................................................................................ 1 2 - REVISÃO DA LITERATURA ......................................................................... 4 2.1 - Agente Etiológico: Pseudomonas aeruginosa .......................................... 4 2.1.1 - Fatores de Virulência ...................................................................... 4 2.1.2 - Mecanismos de Resistência ........................................................... 5 2.1.2.1 - Resistência Intrínseca ................................................................ 6 2.1.2.2 - Resistência Adquirida ................................................................ 7 2.1.2.2.1 - Diminuição de Permeabilidade da Membrana e Sistema de Efluxo................................................................................................... 7 2.1.2.2.2 - Produção de Enzimas ......................................................... 8 2.1.2.2.3 - Resistência Conferida por Mutações ................................ 11 2.1.3 - Resistência a Múltiplas Drogas ..................................................... 11 2.2 - Epidemiologia e Importância Clínica das infecções causadas por P. aeruginosa ..................................................................................................... 12 2.3 - Tipagem Molecular ................................................................................. 16 2.3.1 - Aplicação ...................................................................................... 16 2.3.2 - Características .............................................................................. 19 2.3.3 - Eletroforese em Campo Pulsátil - Pulsed Field Gel Electroforesis - PFGE ....................................................................................................... 22 2.3.4 - Ribotipagem Automatizada ........................................................... 24 x
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