endocarditis cronica sobre válvula protésica por propionibacterium acnes

162 Pages·2009·2.64 MB·Spanish

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE MADRID
DEPARTAMENTO DE MEDICINA

ENDOCARDITIS CRONICA SOBRE VÁLVULA
PROTÉSICA POR PROPIONIBACTERIUM ACNES:
DE SUS MANIFESTACIONES CLÍNICAS A SUS
CARACTERÍSTICAS FISIOPATOLÓGICAS

TESIS DOCTORAL

AUTORA: LAURA GUÍO CARRIÓN

DIRECTORA: CRISTINA SARRIÁ CEPEDA

Madrid, 2010

AGRADECIMIENTOS

A la Dra. Cristina Sarriá Cepeda, a quien le debo el haberme embarcado en el
mundo de la investigación, por la oportunidad que me ha brindado por poder
desarrollar esta tesis doctoral, por toda la sabiduría, la búsqueda de la
perfección, la ética científica y el afán de superación que siempre me ha
transmitido. Por sus desvelos. Por su tiempo. Pero sobre todo porque después
de estos años queda una profunda amistad, a pesar de la distancia. Gracias de
corazón.

A la Dra. Mª Carmen de las Cuevas, por su ayuda en el laboratorio de
Microbiología, su incondicionalidad y sus enseñanzas. A la Dra. Teresa
Alarcón, por su paciencia al transmitir conocimientos y por su tesón. Al resto
de médicos del servicio de Microbiología del Hospital de La Princesa, por su
constante apoyo.

Al Dr. Gamallo, por su entusiasmo, su dedicación, su entrega, y su cariño.

Al Dr. Juan Duarte, por ser ejemplo del trabajo bien hecho. Al Dr. Nuche, por su
colaboración con el proyecto.

Al Dr. Francisco Sánchez Madrid, y a todo el personal del Laboratorio de
Inmunología, especialmente e a Mónica Sala-Valdés, por toda la ayuda
prestada en la consecución de los experimentos.

Al resto de compañeros que han colaborado a lo largo de estos años con el
Grupo de Estudio de Endocarditis, entre ellos a los Drs. Diego A. Rodríguez y
Juan Víctor Sanmartín. Quiero agradecer de forma especial al Dr. Alberto
Domínguez, fue él quien me animó a entrar en el Grupo, vaya mi cariño allí
donde esté.
A la Dra. Fariñas, el Dr. Velayos, el Dr. Pintado, y el Dr. Cereizo, por habernos
permitido analizar datos de sus pacientes.

A la Fundación para la Investigación Biomédica del Hospital Universitario de La
Princesa, por la concesión de una beca a éste trabajo.

A mis padres, porque siempre han creído en mí, y gracias a ese apoyo me he
convertido en la persona que soy. A mi hermana María, por toda la ayuda
prestada en temas informáticos.

A mis hijos Pablo, Irene y Daniel, sois lo mejor de mi vida y mi más preciado
tesoro.

Y por supuesto a Eduardo, mi amor, mi aliento.

INDICE
INDICE

1. INTRODUCCIÓN Y ESTADO ACTUAL DEL TEMA ………………….……… 6

1.1. INTRODUCCIÓN ………………………………………………………………………….……..… 7

1.2. PROPIONIBACTERIUM ACNES

1.2.1. GENERALIDADES...................................................................................................... 8
1.2.2. VIRULENCIA Y PROPIEDADES INMUNOMODULADORAS .............................10
1.2.3. PROPIONIBACTERIUM ACNES TIPO I Y II................................................. ........ 12
1.2.4. LA ENDOCARDITIS POR PA EN LA LITERATURA …………………………........15
A. DESCRIPCIÓN DE LOS CASOS PUBLICADOS DE EIVPPA ……………………….. 20
B. DESCRIPCIÓN DE LOS CASOS PUBLICADOS DE EI NATIVA POR PA………….. 23

1.3. NUEVOS CONCEPTOS EN LA PATOGENESIS DE LA ENDOCARDITIS
PROTÉSICA

1.3.1. LA BIOCAPA ………………………………………………………………………..……...26
1.3.1.1. GENERALIDADES .............................................................................................................26
1.3.1.2. LA BIOCAPA DEL P. ACNES ……………………………………….……...……........ 32
1.3.1.3. VISUALIZACIÓN DE LA BIOCAPA............................................................. ............34
1.3.2. LA ANGIOGÉNESIS Y LOS POLIMORFISMOS DEL VEGF ............................. 37
1.3.3. LA METALOSIS .......................................................................................................... 39

1.4. PROCEDIMIENTOS MICROBIOLÓGICOS PARA EL DIAGNÓSTICO DE LA
ENDOCARDITIS NO BASADOS EN CULTIVOS MICROBIOLÓGICOS .......... 41

1.4.1. LA BIOLOGÍA MOLECULAR EN LA ENDOCARDITIS: DIAGNÓSTICO
POR PCR....................................................................................................... ............. 42
1.4.2. LA INMUNOLOGÍA EN EL DIAGNÓSTICO DE LA INFECCIÓN:
INMUNOFLUORESCENCIA Y ANTICUERPOS MONOCLONALES (ACMO)…..44

1
INDICE

2. HIPÓTESIS…..…………………………………………............…………….............. 46

3. OBJETIVOS…………………………………………………………………….............48

4. MATERIAL Y MÉTODOS…………………………………………..…………... 50

4.1. INVESTIGACIÓN CLÍNICA

4.1.1. DEFINICIONES …………………….……………………………….……....51
4.1.2. PACIENTES……………………….……...…………………......................51
4.1.3. DATOS .................................................................................................52
4.1.3.1. EPIDEMIOLÓGICOS............................................................................................ 52
4.1.3.2. CLÍNICOS.............................................................................................................. 52
4.1.3.3. ECOCARDIOGRÁFICOS....................................................................................... 52
4.1.3.4. MICROBIOLÓGICOS …........................................................................................ 53
4.1.3.5. TERAPEÚTICOS................................................................................................... 53

4.1.4. PROCEDIMIENTOS ………………………………….………………….… 53
4.1.4.1. CLÍNICOS .............................................................................................................53
4.1.4.2. ECOCARDIOGRAFICOS .....................................................................................53
4.1.4.3. MICROBIOLÓGICOS ………………………………..………………………………...54
4.1.4.3.1. CULTIVOS ...............................................................................................54
4.1.4.3.2. DETECCION DE P. ACNES MEDIANTE PCR EN TIEMPO REAL (RT-PCR)......55
4.1.4.3.2.1. SONDAS FRET …………………………………………………….…....…...58
4.1.4.3.2.2. SYBR-GREEN ………………………………………………….….…………59
4.1.4.4. ANATOMOPATOLÓGICOS:...................................................................61
2
INDICE

4.2. INVESTIGACIÓN BÁSICA ………………………………………………….…...…62

4.2.1. LA BIOCAPA DEL PROPIONIBACTERIUM ACNES……………………..….…...62

4.2.1.1. DESARROLLO Y OBTENCIÓN DE BIOCAPA IN VITRO................................. 62
4.2.1.2. VISUALIZACIÓN DE LA BIOCAPA DE PA………………………….………….67
4.2.1.2.1 MARCAJE CON ANTICUERPOS MONOCLONALES…………..…….……….......67
4.2.1.2.2. TINCIÓN CON CALCOFLUOR……………………………………..…….…….……...69

4.2.2. DETERMINACIÓN DEL BIOTIPO DE PROPIONIBACTERIUM
ACNES……………………………………………………………………………..….……..71

4.2.3. DETERMINACIÓN DE LOS POLIMORFISMOS DEL GEN VEGF
EN SANGRE PERIFERICA DE LOS PACIENTES CON EIVPPA………………………. 72

5.- RESULTADOS …………………………………………………..…………...….75

5.1. INVESTIGACIÓN CLÍNICA …………………………………………..………..…76

5.1.1. DESCRIPCIÓN DE LOS CASOS MÁS REPRESENTATIVOS ……..…….……...76
5.1.1.1. CASO 1 .......................................................................................................................76
5.1.1.2. CASO 3 .......................................................................................................................78
5.1.1.3. CASO 4 .......................................................................................................................79
5.1.1.4. CASO 6 .......................................................................................................................79
5.1.1.5. CASO 13 .....................................................................................................................81

5.1.2. CLÍNICA
5.1.2.1. EPIDEMIOLOGÍA….………………………………………………………........................ 82
5.1.2.2. CLÍNICA..…………………………………………………………………………………......84
3
INDICE
5.1.2.3. ECOCARDIOGRAFÍA……………………………………………………...........................86
5.1.2.4. MICROBIOLOGÍA ……………………………………………………………………….…. 89
5.1.2.4.1.1. CULTIVOS ………………………………………………………………………………………………. 89
5.1.2.4.1.2. BIOLOGÍA MOLECULAR: DETECCIÓN DE P. ACNES MEDIANTE PCR EN TIEMPO

REAL ............................................................................................................................................. 91
5.1.2.5. TRATAMIENTO Y EVOLUCIÓN …………………………..............................................94
5.1.2.6. DESCRIPCION MACROSCOPICA...............................................................................98
5.1.2.7. HISTOLOGÍA…………………………………………. .....................................................99

5.2. INVESTIGACIÓN BÁSICA …………………………………………………….…101

5.2.1.. LA BIOCAPA DEL PROPIONIBACTERIUM ACNES………………….………101

5.2.1.1. DESARROLLO Y OBTENCIÓN DE BIOCAPA................................................... 101
5.2.1.2. VISUALIZACIÓN DE LA BIOCAPA DE PROPIONIBACTERIUM ACNES…..….. 103
5.2.1.2.1. TINCIÓN CON ANTICUERPOS MONOCLONALES.………………………….…... 103
A. MICROSCOPÍA DE INMUNOFLUORESCENCIA………………..…...………..… 103
B. MICROSCOPIA LASER CONFOCAL……………………………………….….… 105
5.2.1.2.2. TINCION CON CALCOFLUOR………………………….…………………..…….….…. 107

5.2.2. LOS BIOTIPOS DEL PROPIONIBACTERIUM ACNES …………………….….107

5.2.3. DETERMINACIÓN DE LOS POLIMORFISMOS DEL GEN VEGF EN
SANGRE PERIFERICA DE LOS PACIENTES CON EIVPPA……………..…………..…..109

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