Effet de l'environnement sur la croissance et l'accumulation de métabolites secondaires chez ...

238 Pages·2017·3.78 MB·French

by  Kamel Imikirene

AVERTISSEMENT

Ce document est le fruit d'un long travail approuvé par le jury de
soutenance et mis à disposition de l'ensemble de la
communauté universitaire élargie.

Il est soumis à la propriété intellectuelle de l'auteur. Ceci
implique une obligation de citation et de référencement lors de
l’utilisation de ce document.

D'autre part, toute contrefaçon, plagiat, reproduction illicite
encourt une poursuite pénale.

Contact : [email protected]

LIENS

Code de la Propriété Intellectuelle. articles L 122. 4
Code de la Propriété Intellectuelle. articles L 335.2- L 335.10
http://www.cfcopies.com/V2/leg/leg_droi.php
http://www.culture.gouv.fr/culture/infos-pratiques/droits/protection.htm
Ecole(cid:6)Doctorale(cid:6)Sciences(cid:6)et(cid:6)Ingénierie(cid:6)des(cid:6)Ressources(cid:6)
Procédés(cid:6)Produits(cid:6)Environnement(cid:6)
INSTITUT NATIONAL POLYTECHNIQUE DE LORRAINE
ECOLE NATIONALE SUPERIEURE D’AGRONOMIE ET DES INDUSTRIES ALIMENTAIRES

Thèse
Pour obtenir le grade de

Docteur de l’INPL
en Sciences Agronomiques
Présentée et soutenue publiquement par

VU Thi Dao
Le 04 Juillet 2008

(cid:1)(cid:2)(cid:2)(cid:3)(cid:4)(cid:5)(cid:6)(cid:7)(cid:3)(cid:6)(cid:8)(cid:9)(cid:3)(cid:10)(cid:11)(cid:12)(cid:13)(cid:14)(cid:10)(cid:10)(cid:3)(cid:15)(cid:3)(cid:10)(cid:4)(cid:6)(cid:5)(cid:16)(cid:13)(cid:6)(cid:8)(cid:17)(cid:6)(cid:18)(cid:13)(cid:14)(cid:12)(cid:5)(cid:5)(cid:17)(cid:10)(cid:18)(cid:3)(cid:6)(cid:3)(cid:4)(cid:6)(cid:8)(cid:9)(cid:17)(cid:18)(cid:18)(cid:16)(cid:15)(cid:16)(cid:8)(cid:17)(cid:4)(cid:12)(cid:14)(cid:10)(cid:6)(cid:6)
(cid:1)(cid:2)(cid:3)(cid:4)(cid:5)(cid:2)(cid:6)(cid:7)(cid:8)(cid:8)(cid:9)(cid:10)(cid:7)(cid:2)
(cid:7)(cid:3)(cid:6)(cid:15)(cid:19)(cid:4)(cid:17)(cid:20)(cid:14)(cid:8)(cid:12)(cid:4)(cid:3)(cid:5)(cid:6)(cid:5)(cid:3)(cid:18)(cid:14)(cid:10)(cid:7)(cid:17)(cid:12)(cid:13)(cid:3)(cid:5)(cid:6)(cid:18)(cid:21)(cid:3)(cid:22)(cid:6) (cid:6)(cid:23)(cid:12)(cid:8)(cid:8)(cid:24)(cid:6)(cid:18)(cid:16)(cid:8)(cid:4)(cid:12)(cid:11)(cid:19)(cid:6)(cid:3)(cid:10)(cid:6)
(cid:18)(cid:14)(cid:10)(cid:7)(cid:12)(cid:4)(cid:12)(cid:14)(cid:10)(cid:5)(cid:6)(cid:21)(cid:14)(cid:13)(cid:5)(cid:6)(cid:5)(cid:14)(cid:8)(cid:6)(cid:25)(cid:6)(cid:12)(cid:15)(cid:26)(cid:17)(cid:18)(cid:4)(cid:6)(cid:7)(cid:3)(cid:5)(cid:6)(cid:2)(cid:17)(cid:18)(cid:4)(cid:3)(cid:16)(cid:13)(cid:5)(cid:6)(cid:20)(cid:12)(cid:14)(cid:4)(cid:12)(cid:27)(cid:16)(cid:3)(cid:5)(cid:6)(cid:3)(cid:4)(cid:6)(cid:17)(cid:20)(cid:12)(cid:14)(cid:4)(cid:12)(cid:27)(cid:16)(cid:3)(cid:5)(cid:24)(cid:6)

Directeur de thèse : Prof. GONTIER Eric

Composition du jury :

(cid:23)(cid:15)(cid:3)(cid:24)(cid:6)(cid:28)(cid:29)(cid:30)(cid:31)(cid:29) !"(cid:23)(cid:29)##(cid:29)(cid:31)(cid:6)$(cid:14)(cid:15)(cid:12)(cid:10)(cid:12)(cid:27)(cid:16)(cid:3)(cid:6):(cid:6)Prof.(cid:6)à(cid:6)la(cid:6)Faculté(cid:6)de(cid:6)pharmacie,(cid:6)Nancy(cid:6)(cid:6)(cid:6) Rapporteur(cid:6)
(cid:23)(cid:15)(cid:3)(cid:24)(cid:6)%& #(cid:1)(cid:28)"’&!# (cid:6)(cid:23)(cid:12)(cid:18)(cid:21)((cid:8)(cid:3)(cid:6):(cid:6)MDC$HDR(cid:6)à(cid:6)l’UPJV(cid:6)d’Amiens(cid:6)(cid:6) (cid:6) (cid:6)(cid:6) Rapporteur(cid:6)
(cid:23)(cid:24)(cid:6))(cid:30)’*(cid:1)(cid:31)#(cid:6)(cid:29)(cid:13)(cid:15)(cid:17)(cid:10)(cid:7)(cid:6):(cid:6)Prof.(cid:6)émérite(cid:6)à(cid:6)l’ENSAIA$INPL(cid:6)de(cid:6)Nancy(cid:6)(cid:6) (cid:6) (cid:6) Président(cid:6)
(cid:23).(cid:6)+’,(cid:29)(cid:28)(cid:28)(cid:1)(cid:31)(cid:6),(cid:16)(cid:20)(cid:3)(cid:13)(cid:4)(cid:6):(cid:6)Chargé(cid:6)de(cid:6)Recherche,(cid:6)CNRS$IBMP(cid:6)de(cid:6)Strasbourg(cid:6) (cid:6) Examinateur(cid:6)
(cid:23)(cid:24)(cid:6)%&(cid:30)(cid:31))(cid:29)(cid:30)$(cid:6)-(cid:13)(cid:19)(cid:7)(cid:19)(cid:13)(cid:12)(cid:18)(cid:6):(cid:6)Prof.(cid:6)à(cid:6)l’ENSAIA$INPL(cid:6)de(cid:6)Nancy(cid:6) (cid:6) (cid:6) (cid:6) Examinateur(cid:6)
(cid:23)(cid:24)(cid:6))&!# (cid:1)(cid:31)(cid:6)(cid:1)(cid:13)(cid:12)(cid:18)(cid:6):(cid:6)Prof.(cid:6)à(cid:6)l’Université(cid:6)de(cid:6)Picardie(cid:6)Jules(cid:6)Verne(cid:6)d’Amiens(cid:6)(cid:6) (cid:6) Examinateur(cid:6)
REMERCIEMENTS

Ce(cid:6)travail(cid:6)a(cid:6)été(cid:6)réalisé(cid:6)au(cid:6)laboratoire(cid:6)UMR(cid:6)Agronomie(cid:6)et(cid:6)Environnement(cid:6)(LAE)$INRA/INPL,(cid:6)de(cid:6)l’Ecole(cid:6)Nationale(cid:6)Supérieure(cid:6)
d’Agronomie(cid:6) et(cid:6) des(cid:6) Industries(cid:6) Alimentaires(cid:6) –(cid:6) Institut(cid:6) National(cid:6) Polytechnique(cid:6) de(cid:6) Lorraine,(cid:6) Nancy(cid:6) et(cid:6) au(cid:6) laboratoire(cid:6)
Androgenèse(cid:6)et(cid:6)Biotechnologie(cid:6)(AEB)(cid:6)de(cid:6)l’Université(cid:6)Picardie(cid:6)et(cid:6)Jules(cid:6)Verne,(cid:6)Amiens.(cid:6)(cid:6)
Avant(cid:6)de(cid:6)présenter(cid:6)ce(cid:6)mémoire,(cid:6)j’aimerai(cid:6)remercier(cid:6)tous(cid:6)ceux(cid:6)qui(cid:6)ont(cid:6)contribué(cid:6)à(cid:6)sa(cid:6)réalisation.(cid:6)
En(cid:6)premier(cid:6)lieu,(cid:6)je(cid:6)voudrais(cid:6)dire(cid:6)combien(cid:6)je(cid:6)suis(cid:6)particulièrement(cid:6)reconnaissante(cid:6)au(cid:6)Prof.(cid:6)Eric(cid:6)GONTIER,(cid:6)mon(cid:6)directeur(cid:6)de(cid:6)
thèse,(cid:6)de(cid:6)m’avoir(cid:6)accordé(cid:6)sa(cid:6)confiance(cid:6)en(cid:6)m’acceptant(cid:6)pour(cid:6)travailler(cid:6)sur(cid:6)ce(cid:6)sujet(cid:6)avec(cid:6)lui.(cid:6)Il(cid:6)a(cid:6)suivi(cid:6)mes(cid:6)travaux(cid:6)avec(cid:6)intérêt(cid:6)
tout(cid:6)en(cid:6)me(cid:6)prodiguant(cid:6)des(cid:6)conseils(cid:6)toujours(cid:6)justes.(cid:6)Et(cid:6)il(cid:6)a(cid:6)su(cid:6)me(cid:6)redonner(cid:6)courage(cid:6)et(cid:6)aider(cid:6)à(cid:6)traverser(cid:6)des(cid:6)moments(cid:6)difficiles(cid:6)
et(cid:6)des(cid:6)instants(cid:6)de(cid:6)doute.(cid:6)Je(cid:6)tiens(cid:6)tout(cid:6)particulièrement(cid:6)à(cid:6)le(cid:6)remercier(cid:6)profondément(cid:6)pour(cid:6)son(cid:6)aide(cid:6)appréciable,(cid:6)sa(cid:6)
gentillesse,(cid:6)sa(cid:6)grande(cid:6)disponibilité(cid:6)et(cid:6)sa(cid:6)compréhension.(cid:6)Je(cid:6)le(cid:6)remercie(cid:6)également(cid:6)pour(cid:6)m’être(cid:6)venu(cid:6)en(cid:6)aide(cid:6)en(cid:6)acceptant(cid:6)
de(cid:6)financer(cid:6)les(cid:6)derniers(cid:6)mois(cid:6)de(cid:6)thèse.
Je(cid:6)remercie(cid:6)monsieur(cid:6)Sylvain(cid:6)PLANTUREUX,(cid:6)Prof.(cid:6)et(cid:6)directeur(cid:6)de(cid:6)LAE(cid:6)à(cid:6)l’ENSAIA(cid:6)et(cid:6)madame(cid:6)Brigitte(cid:6)SANGWAN$
NORREEL,(cid:6)Prof.(cid:6)et(cid:6)directeur(cid:6)de(cid:6)AEB(cid:6)à(cid:6)l’UPJV,(cid:6)qui(cid:6)m’ont(cid:6)accueillie(cid:6)dans(cid:6)leurs(cid:6)équipes(cid:6)de(cid:6)recherche.(cid:6)
Je(cid:6)remercie(cid:6)vivement(cid:6)monsieur(cid:6)Prof.(cid:6)Armand(cid:6)GUCKERT(cid:6)et(cid:6)monsieur(cid:6)Prof.(cid:6)Frédéric(cid:6)BOURGAUD(cid:6)à(cid:6)l’ENSAIA/INPL,(cid:6)les(cid:6)co$
directeurs(cid:6)de(cid:6)ma(cid:6)thèse,(cid:6)qui(cid:6)m’ont(cid:6)aidé(cid:6)à(cid:6)prendre(cid:6)les(cid:6)bonnes(cid:6)directions(cid:6)et(cid:6)m’ont(cid:6)conseillé(cid:6)et(cid:6)encouragé(cid:6)tout(cid:6)au(cid:6)long(cid:6)de(cid:6)la(cid:6)
thèse.(cid:6)
Je(cid:6)tiens(cid:6)à(cid:6)remercier(cid:6)Mme(cid:6)Prof.(cid:6)Dominique(cid:6)LAURAIN$MATTAR(cid:6)et(cid:6)Mme(cid:6)MDC$HDR(cid:6)BOITEL$CONTI(cid:6)Michèle(cid:6)qui(cid:6)ont(cid:6)bien(cid:6)
voulu(cid:6)accepter(cid:6)de(cid:6)juger(cid:6)ce(cid:6)travail(cid:6)en(cid:6)tant(cid:6)que(cid:6)rapporteurs(cid:6)de(cid:6)thèse.(cid:6)J’exprime(cid:6)aussi(cid:6)ma(cid:6)profonde(cid:6)reconnaissance(cid:6)aux(cid:6)
professeurs(cid:6)Armand(cid:6)GUCKERT,(cid:6)Hubert(cid:6)SCHALLER,(cid:6)Frédéric(cid:6)BOURGAUD(cid:6)et(cid:6)Eric(cid:6)GONTIER,(cid:6)membres(cid:6)du(cid:6)jury(cid:6)de(cid:6)thèse.(cid:6)
Je(cid:6)souhaite(cid:6)exprimer(cid:6)toute(cid:6)ma(cid:6)gratitude(cid:6)à(cid:6)Alain(cid:6)HEHN(cid:6)qui(cid:6)m’a(cid:6)guidée(cid:6)dans(cid:6)le(cid:6)contrôle(cid:6)de(cid:6)l’état(cid:6)transgénique(cid:6)du(cid:6)matériel(cid:6)
végétal.(cid:6)Avec(cid:6)sa(cid:6)disponibilité,(cid:6)sa(cid:6)patience(cid:6)et(cid:6)sa(cid:6)connaissance(cid:6)du(cid:6)monde(cid:6)de(cid:6)la(cid:6)biologie(cid:6)moléculaire,(cid:6)il(cid:6)m’a(cid:6)aidée(cid:6)à(cid:6)
comprendre(cid:6)les(cid:6)enjeux(cid:6)et(cid:6)difficultés(cid:6)de(cid:6)ce(cid:6)travail(cid:6)de(cid:6)recherche.(cid:6)(cid:6)
Je(cid:6)souhaite(cid:6)adresser(cid:6)tous(cid:6)mes(cid:6)remerciements(cid:6)à(cid:6)Mme(cid:6)M.(cid:6)BOITEL$CONTI,(cid:6)M.(cid:6)J$C.(cid:6)LABERCHE,(cid:6)M.(cid:6)C.(cid:6)ROBIN(cid:6)et(cid:6)M.(cid:6)E.(cid:6)NAVA(cid:6)
SAUCEDO,(cid:6)qui(cid:6)ont(cid:6)toujours(cid:6)trouvé(cid:6)le(cid:6)temps(cid:6)pour(cid:6)mener(cid:6)avec(cid:6)moi(cid:6)des(cid:6)discussions(cid:6)très(cid:6)enrichissantes.(cid:6)(cid:6)
Mes(cid:6)remerciements(cid:6)s’adressent(cid:6)également(cid:6)à(cid:6)mesdames(cid:6):(cid:6)C.(cid:6)LARRIERE,(cid:6)T.(cid:6)OLIVIER,(cid:6)M.(cid:6)POIRET,(cid:6)M.(cid:6)CALLIER,(cid:6)C.(cid:6)RAYON(cid:6)
et(cid:6)à(cid:6)messieurs(cid:6):(cid:6)D.(cid:6)THIERY,(cid:6)G.(cid:6)VASSEUR.(cid:6)Ils(cid:6)ont(cid:6)fait(cid:6)preuve(cid:6)d’efficacité(cid:6)et(cid:6)de(cid:6)gentillesse(cid:6)pour(cid:6)traiter(cid:6)nos(cid:6)demandes(cid:6)malgré(cid:6)
leur(cid:6)charge(cid:6)de(cid:6)travail.(cid:6)
Mes(cid:6)remerciements(cid:6)vont(cid:6)aussi(cid:6)aux(cid:6)doctorants(cid:6)de(cid:6)LAE(cid:6):(cid:6)F.(cid:6)BITEAU,(cid:6)C.(cid:6)BENARD,(cid:6)R.(cid:6)KOLLER,(cid:6)S.(cid:6)DOERPER,(cid:6)R.(cid:6)LARBAT,(cid:6)B.(cid:6)
CLEGUE,(cid:6)M.(cid:6)CREGUT(cid:6)et(cid:6)l’ingénieur(cid:6)B.(cid:6)MIGNARD(cid:6)pour(cid:6)leurs(cid:6)aides,(cid:6)leur(cid:6)dévouement(cid:6)et(cid:6)leur(cid:6)gentillesse(cid:6)tout(cid:6)au(cid:6)long(cid:6)de(cid:6)ma(cid:6)
thèse.(cid:6)(cid:6)
Je(cid:6)tiens(cid:6)également(cid:6)à(cid:6)remercier(cid:6)les(cid:6)doctorants(cid:6)de(cid:6)AEB(cid:6):(cid:6)N.(cid:6)KHODOROVA(cid:6)pour(cid:6)son(cid:6)aide(cid:6)dans(cid:6)le(cid:6)traitement(cid:6)des(cid:6)photos(cid:6)et(cid:6)qui(cid:6)
m’a(cid:6)offert(cid:6)son(cid:6)amitié(cid:6);(cid:6)S.(cid:6)LEHRAIKI,(cid:6)H.(cid:6)AL(cid:6)BALKHI,(cid:6)B.(cid:6)MENDOU(cid:6)et(cid:6)R.(cid:6)NASRI(cid:6)pour(cid:6)leur(cid:6)aide(cid:6)durant(cid:6)les(cid:6)deux(cid:6)dernières(cid:6)
années(cid:6);(cid:6)les(cid:6)post$doctorants(cid:6):(cid:6)TLM(cid:6)TRAN,(cid:6)Y.(cid:6)HUET(cid:6)pour(cid:6)leurs(cid:6)conseilles(cid:6)et(cid:6)aides(cid:6)durant(cid:6)mes(cid:6)dernières(cid:6)expériences,(cid:6)et(cid:6)
enfin,(cid:6)C.(cid:6)JOUSSE(cid:6)pour(cid:6)ses(cid:6)aides(cid:6)et(cid:6)relectures(cid:6)de(cid:6)mon(cid:6)document.(cid:6)
Ma(cid:6)gratitude(cid:6)va(cid:6)aussi(cid:6)à(cid:6)tous(cid:6)les(cid:6)stagiaires,(cid:6)techniciens,(cid:6)chercheurs(cid:6)et(cid:6)enseignants$chercheurs(cid:6)appartenant(cid:6)aux(cid:6)laboratoires(cid:6)
de(cid:6)Nancy(cid:6)et(cid:6)d’Amiens(cid:6)pour(cid:6)leur(cid:6)accueil(cid:6)sympathique(cid:6);(cid:6)qui(cid:6)m’ont(cid:6)fait(cid:6)part(cid:6)de(cid:6)leur(cid:6)passion(cid:6)de(cid:6)recherche,(cid:6)et(cid:6)n’ont(cid:6)pas(cid:6)hésité(cid:6)à(cid:6)
consacrer(cid:6)du(cid:6)temps(cid:6)à(cid:6)répondre(cid:6)mes(cid:6)questions.(cid:6)(cid:6)
Mes(cid:6)remerciements(cid:6)s’adressent(cid:6)aux(cid:6)docteurs(cid:6):(cid:6)H.(cid:6)DE(cid:6)BON(cid:6)(CIRAD(cid:6)de(cid:6)Montpellier)(cid:6)pour(cid:6)l’aide(cid:6)qu’il(cid:6)m’a(cid:6)apporté(cid:6)pour(cid:6)ma(cid:6)
venue(cid:6)en(cid:6)France(cid:6)et(cid:6)J.(cid:6)LE(cid:6)BOT(cid:6)pour(cid:6)m’avoir(cid:6)initié(cid:6)à(cid:6)la(cid:6)recherche(cid:6)au(cid:6)sein(cid:6)d’un(cid:6)laboratoire(cid:6)français(cid:6)à(cid:6)l’unité(cid:6)Plantes(cid:6)et(cid:6)
Systèmes(cid:6) de(cid:6) Cultures(cid:6) Horticoles(cid:6) de(cid:6) l’INRA(cid:6) d’Avignon(cid:6);(cid:6) aux(cid:6)messieurs(cid:6) directeurs(cid:6):(cid:6) J$F(cid:6) LEFEVRE(cid:6) $(cid:6) responsable(cid:6) de(cid:6)
plateforme(cid:6)régionale(cid:6)de(cid:6)Picardie(cid:6)pour(cid:6)son(cid:6)autorisation(cid:6)de(cid:6)travailler(cid:6)dans(cid:6)son(cid:6)local,(cid:6)J$P(cid:6)FEVRE(cid:6)de(cid:6)la(cid:6)société(cid:6)de(cid:6)PAT(cid:6)SAT(cid:6)et(cid:6)
R.(cid:6)SANGWAN(cid:6)de(cid:6)CNRS(cid:6)qui(cid:6)m’ont(cid:6)encouragé(cid:6)au(cid:6)cours(cid:6)de(cid:6)ma(cid:6)thèse.(cid:6)
Cette(cid:6)étude(cid:6)n’aurait(cid:6)pu(cid:6)se(cid:6)réaliser(cid:6)sans(cid:6)l’apport(cid:6)du(cid:6)gouvernement(cid:6)de(cid:6)mon(cid:6)pays(cid:6)le(cid:6)Viet(cid:6)Nam(cid:6)qui(cid:6)m’a(cid:6)alloué(cid:6)une(cid:6)bourse(cid:6)
d’étude,(cid:6)et(cid:6)plus(cid:6)particulièrement(cid:6)l’ensemble(cid:6)du(cid:6)personnel(cid:6)du(cid:6)Projet(cid:6)322.(cid:6)Qu’il(cid:6)retrouve(cid:6)ici(cid:6)toute(cid:6)ma(cid:6)reconnaissance(cid:6)et(cid:6)mes(cid:6)
plus(cid:6)vifs(cid:6)remerciements.(cid:6)(cid:6)(cid:6)
Je(cid:6)ne(cid:6)terminerai(cid:6)pas(cid:6)mes(cid:6)remerciements(cid:6)sans(cid:6)une(cid:6)pensée(cid:6)pour(cid:6)ma(cid:6)famille,(cid:6)et(cid:6)ma(cid:6)petite(cid:6)Dieu(cid:6)Huong,(cid:6)à(cid:6)qui(cid:6)(cid:6)je(cid:6)dois(cid:6)un(cid:6)
soutien(cid:6)tant(cid:6)moral(cid:6)qu’affectif(cid:6)et(cid:6)qui(cid:6)ont(cid:6)su(cid:6)m’entourer(cid:6)tout(cid:6)au(cid:6)long(cid:6)de(cid:6)ce(cid:6)travail,(cid:6)un(cid:6)soutien(cid:6)qui(cid:6)va(cid:6)bien(cid:6)au$delà(cid:6)de(cid:6)ce(cid:6)que(cid:6)je(cid:6)
pourrais(cid:6)exprimer.(cid:6)
Encore(cid:6)merci(cid:6)à(cid:6)tous(cid:6)!(cid:6)(cid:6)
2
LEXIQUE/ABREVIATION

%MS : pourcentage de matière sèche
°C : degré Celsius
µM : micromolaire
µS/cm ou mS/cm : microSiemens/cm ou milliSiemens/cm
A.r. : Agrobacterium rhizogenes
ADN : acide désoxyribonucléique
ADN-T : Acide DéoxyriboNucléique de Transfert
AIA : acide indole acétique
ARN : acide ribonucléique
BET : bromure d’ethidium
BF : biomasse fraîche
BS : biomasse sèche
CLHP : chromatographie liquide haute performance (cf. HPLC)
CPG : chromatographie en phase gazeuse (cf. GC)
DMSO : Dimethyl Sulfoxide (C H OS)
2 6
DO : densité optique
DPI : Dots Per Inch (pixels par pouce). Nombre de pixels sur 2.54 cm2 (pouce anglais),
permettant d'exprimer la résolution d'une image. Une image affichée sur un écran est de
72dpi, une image destinée à l'impression est généralement de 300dpi.
EDTA : Acide Ethylène Diamine Tétra Acétique
egfp : gène codant la protéine verte fluorescente modifiée
ENSAIA : Ecole Nationale Supérieure d’Agronomie et des Industries Alimentaires
GFP : green fluorescent protein - protéine verte fluorescente d’Aequorea victoria
gus : gène codant pour l’enzyme de β-glucuronidase
H : hyoscyamine (289g/mol)
H&S: hyoscyamine + scopolamine
H6H : hyoscyamine-6β-hydroxylase
Homa : homatropine (275g/mol)
HPLC : chromatographie liquide haute performance (cf. CLHP)
INRA : Institut National de la Recherche Agronomique
IUPAC: International Union for Pure and Applied Chemistry
Kb : kilo de base égale 1000 pb
m : mètre
M : molaire, mM : milimolaire
MeJa : Méthyle Jasmonate
MII : métabolites secondaires
MS : solution nutritive de Murashige et Skoog
mS/cm : milliSiemens/cm
3
NS : non significatif (utilisé pour les différences statistiques)
p/v : poids/volume
pb : paire de base
PCR : (cf. PCR), Polymerase Chain Reaction. Réaction en chaîne de la polymérase
permettant d’amplifier un ADN dont la séquence des extrémités est connue.
rpm : rotation par minute
S : scopolamine (303g/mol)
SN : solution nutritive
T°C : température en degré centigrade
UFC : Unité Formant Colonie correspondant à la formation d’une colonie sur milieu
gélosé.
UPJV : Université de Picardie Jules Verne
v/v : volume/volume
vir : gènes de virulence
vvm : volume d'air par volume de liquide et par minute

4
SOMMAIRE

Introduction générale et présentation des objectifs ………………………………..1

PARTIE I : SYNTHESE BIBLIOGRAPHIQUE

I-1. Les métabolites secondaires végétaux ………………………………….…...7
I-1.1 Nature, distribution et rôle écologique des métabolites secondaires végétaux ………7
I-1.2 Importance économique et pharmaceutique des métabolites secondaires végétaux....7
I-2. Procédés d’obtention de métabolites secondaire à partir de végétaux.……………....9
I-2.1 Extraction de métabolites secondaires (MII) à partir de plantes entières………… 9
I-2.2 Biotechnologies végétales pour la production de MII végétaux …………………...11
I-3. Les alcaloïdes tropaniques et leur occurrence chez Datura innoxia Mill. …………..20
I-3.1 Les alcaloïdes tropaniques, hyoscyamine et scopolamine ……………………….20
I-3.2 Biosynthèse des alcaloïdes tropaniques ……………………………………………22
I-3.3 Datura innoxia Mill., origine et description de la plante ……………………….. 25
I-3.4 Variation de la concentration et de la nature des alcaloïdes tropaniques au sein de la
plante entière …………………………………………………………………...26
I-3.5 Utilisations anciennes et modernes des daturas …………………………………….29
I-4. Les cultures végétales hors sol …………………………...…………….……………..30
I-4.1 Cultures hydroponiques …………………………………………………………….31
I-4.2 Cultures aéroponique ……………………………………………………………….32
I-4.3 Procédé « Plantes à Traire » …………………………….………………………..32
I-4.4 Intérêts et utilisations des cultures hors sol ………………………………………33
I-5. Transformation génétique des végétaux par Agrobacterium …………………..…...34
I-5.1 Organisation des plasmides pTi et pRi d’Agrobacterium …………………………..36
I-5.2 Les vecteurs dérivés du plasmide pTi et pRi d’Agrobacterium …………………….38

5
PARTIE II : MATERIEL ET METHODES

II-1. Matériel ……………………………………………………………………….……… 43
II-1.1 Matériel végétal …………………..……………………………………………… 43
II-1.2 Matériel bactérien et vecteurs utilisés …………………………………..………... 43
II-1.3 Conditions de culture ……..……………………………………………………… 45
II-2. Milieux de culture ………………………………………………...………..……….46
II-2.1 Milieux de base pour bactéries …………………………...…………………..…46
II-2.2 Milieux de culture basique pour les plantes de daturas ………………………….47
II-2.3 Milieu de régénération des racines de datura …….…….………………………...47
II-2.4 Composés ajoutés en fonction des différentes expériences………………………47
II-3. Méthodes de culture ……………..…………………...…………………………….48
II-3.1 Culture de bactéries ...………………………………………………………………48
II-3.2 Germination des graines de Datura innoxia en conditions stériles …..…..…..…….49
II-3.3 Germination des graines de Datura innoxia en condition non stérile ………..……50
II-3.4 Culture hydroponique en condition stérile ……………..………………………….51
II-3.5 Culture hydroponique en condition non stérile …………..………………………..53
II-4. Méthodes analytiques ……………………………...……….…………………....55
II-4.1 Morphologie racinaire et aérienne …………………………………………….55
II-4.2 Echantillonnages de biomasses ………………………………………..……..56
II-4.3 Dénombrement des microorganismes………..……………………………….56
II-4.4 Mesure de la dégradation de H&S dans les solutions nutritives ………..….…57
II-4.5 Méthode d’extraction …...………………………………………………..…...57
II-4.6 Méthode de dosage des alcaloïdes tropaniques ………………………...…….58
II-4.7 Méthode de dosage de l’azote total et du carbone total ….……………...…..….….61
II-4.8 Méthode de dosage des chlorophylles …………………………..……….…...61
II-5. Technique de transformation bactérienne par électroporation ……………62
II-5.1 Préparation des bactéries compétentes …………….…………..…………………..62
II-5.2 Transformation bactérienne ………………………………………...……………...62
II-5.3 Extraction et analyse d’ADN plasmidique …………………………………63
II-6. Evaluation de l’état transgénique du matériel végétal obtenu ……….....…...64
II-6.1 Observation de la protéine EGFP …………………………..………………..……..64
II-6.2 Test de détection de la β-glucuronidase (test histochimique X-gluc) ………...……64
II-6.3 Confirmation moléculaire de la transformation …..…………….………………….65
II-7. Traitement statistique des données ….……………...…………...……………....…...67
6
PARTIE III : RESULTATS ET INTERPRETATIONS

Positionnement de la problématique scientifique …………...……………………..69

(cid:1)(cid:1)(cid:1)(cid:1)(cid:2)(cid:2)(cid:2)(cid:2)(cid:3)(cid:3)(cid:3)(cid:3)(cid:4)(cid:4)(cid:4)(cid:4)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:6)(cid:6)(cid:6)(cid:6)(cid:7)(cid:7)(cid:7)(cid:7)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:10)(cid:10)(cid:10)(cid:10)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:11)(cid:11)(cid:11)(cid:11)(cid:11)(cid:11)(cid:11)(cid:11)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:6)(cid:6)(cid:6)(cid:6)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:12)(cid:12)(cid:12)(cid:12)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:13)(cid:13)(cid:13)(cid:13)(cid:14)(cid:14)(cid:14)(cid:14)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:15)(cid:15)(cid:15)(cid:15)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:7)(cid:7)(cid:7)(cid:7)(cid:17)(cid:17)(cid:17)(cid:17)(cid:15)(cid:15)(cid:15)(cid:15)(cid:15)(cid:15)(cid:15)(cid:15)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:18)(cid:18)(cid:18)(cid:18)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:15)(cid:15)(cid:15)(cid:15)(cid:6)(cid:6)(cid:6)(cid:6)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:3)(cid:3)(cid:3)(cid:3)(cid:19)(cid:19)(cid:19)(cid:19)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:17)(cid:17)(cid:17)(cid:17)(cid:6)(cid:6)(cid:6)(cid:6)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:20)(cid:20)(cid:20)(cid:20)(cid:21)(cid:21)(cid:21)(cid:21)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)
(cid:22)(cid:22)(cid:22)(cid:22)(cid:21)(cid:21)(cid:21)(cid:21)(cid:7)(cid:7)(cid:7)(cid:7)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:13)(cid:13)(cid:13)(cid:13)(cid:3)(cid:3)(cid:3)(cid:3)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:1)(cid:1)(cid:1)(cid:1)(cid:7)(cid:7)(cid:7)(cid:7)(cid:17)(cid:17)(cid:17)(cid:17)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:22)(cid:22)(cid:22)(cid:22)(cid:22)(cid:22)(cid:22)(cid:22)(cid:3)(cid:3)(cid:3)(cid:3)(cid:15)(cid:15)(cid:15)(cid:15)(cid:1)(cid:1)(cid:1)(cid:1)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:12)(cid:12)(cid:12)(cid:12)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:22)(cid:22)(cid:22)(cid:22)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:4)(cid:4)(cid:4)(cid:4)(cid:13)(cid:13)(cid:13)(cid:13)(cid:3)(cid:3)(cid:3)(cid:3)(cid:15)(cid:15)(cid:15)(cid:15)(cid:6)(cid:6)(cid:6)(cid:6)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:22)(cid:22)(cid:22)(cid:22)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:6)(cid:6)(cid:6)(cid:6)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:13)(cid:13)(cid:13)(cid:13)(cid:3)(cid:3)(cid:3)(cid:3)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:4)(cid:4)(cid:4)(cid:4)(cid:7)(cid:7)(cid:7)(cid:7)(cid:17)(cid:17)(cid:17)(cid:17)(cid:12)(cid:12)(cid:12)(cid:12)(cid:21)(cid:21)(cid:21)(cid:21)(cid:1)(cid:1)(cid:1)(cid:1)(cid:6)(cid:6)(cid:6)(cid:6)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:17)(cid:17)(cid:17)(cid:17)(cid:15)(cid:15)(cid:15)(cid:15)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)
(cid:12)(cid:12)(cid:12)(cid:12)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:18)(cid:18)(cid:18)(cid:18)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:6)(cid:6)(cid:6)(cid:6)(cid:3)(cid:3)(cid:3)(cid:3)(cid:19)(cid:19)(cid:19)(cid:19)(cid:17)(cid:17)(cid:17)(cid:17)(cid:13)(cid:13)(cid:13)(cid:13)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:6)(cid:6)(cid:6)(cid:6)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:22)(cid:22)(cid:22)(cid:22)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:22)(cid:22)(cid:22)(cid:22)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:1)(cid:1)(cid:1)(cid:1)(cid:17)(cid:17)(cid:17)(cid:17)(cid:15)(cid:15)(cid:15)(cid:15)(cid:12)(cid:12)(cid:12)(cid:12)(cid:3)(cid:3)(cid:3)(cid:3)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:7)(cid:7)(cid:7)(cid:7)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:22)(cid:22)(cid:22)(cid:22)(cid:9)
Effets de « l’environnement physique » sur la croissance et la production de
métabolites secondaires ……………………………………...…….………………..71
III-1. Mise en place d'un dispositif pilote de culture et essai d'amélioration de la
disponibilité en oxygène pour la respiration racinaire ……..…………………..………71
III-1.1 Croissance végétative ……………………………………………..…………….72
III-1.2 Production de biomasse …………………………………………...……………..74
III-1.3 Production de métabolites secondaires ………………………………….………..75
III-1.4 Discussion et conclusion partielle ………………………………...……………..77
III-2. Effet de l’intensité de la lumière…………………………………….………..…… 78
III-2.1 Croissance des plantes cultivées sous quatre intensités d'éclairement………….…80
III-2.2 Production de biomasse sous quatre intensités d’éclairement.………..……...……81
III-2.3 Production d'alcaloïdes tropaniques sous quatre intensités d'éclairement………....82
III-2.4 Discussion et conclusion partielle …………………………………………...…..84
III-3. Effet de la qualité de la lumière ……………………………………….……………85
III-3.1 Effet de la qualité de la lumière sur la croissance….………..……………………. 85
III-3.2 Effet de la qualité de la lumière sur la (production de) biomasse……………..…...87
III-3.3 Effet de la qualité de la lumière sur la production d'alcaloïdes tropaniques …..…..88
III-3.4 Discussion et conclusion partielle ………………………………...……………..89
III-4. Effet combiné de la température et de la lumière …………………..……………..90
III-4.1 Description du dispositif expérimental …...…………………………...…………..90
III-4.2 Contrôle du climat et variables climatiques de l’expérience ………...………….92
III-4.3 Influence des paramètres environnementaux sur la croissance des plantes………..95
III-4.4 Influence des paramètres environnementaux sur la production de métabolites
secondaires ……………….…………………………………..………………………….100
III-4.5 Influence des paramètres environnementaux sur les microorganismes présents
dans la solution nutritive ……………………………………………...…………………102
7
III-4.6 Effet de la microflore de la solution nutritive sur la dégradation des alcaloïdes
tropaniques……………………………………………………………...……….……….104
III-4.7 Discussions et conclusion partielle ………………………...…………………..108

Effets de « l’environnement chimique » sur la croissance et la production de
métabolites secondaires……………………….…………………………….………….110

III-5. Effet du pH des milieux de culture ………………….…………………………….110
III-5.1 Croissance végétative ……………………….…………………………………...111
III-5.2 Etude de la production de biomasse et des rendements …………..…………...…112
III-5.3 Etude de la production d'alcaloïdes tropaniques ………….….…………………..113
III-6. Effet de la disponibilité en azote du milieu sur la croissance, la biosynthèse
et l’accumulation des alcaloïdes tropaniques ………………………………………….114
III-6.1 Description de l’expérience ……………………………………………………..115
III-6.2 Influence de l’apport azoté sur la croissance de la plante………...…………….116
III-6.3 Etude de la quantité d'alcaloïdes produites par plante ……….…………………..122
III-6.4 Discussion et conclusion partielle ………………………..……………………....124
III-7. Conclusion partielle du chapitre I …………………….……………………………125

(cid:1)(cid:1)(cid:1)(cid:1)(cid:2)(cid:2)(cid:2)(cid:2)(cid:3)(cid:3)(cid:3)(cid:3)(cid:4)(cid:4)(cid:4)(cid:4)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:6)(cid:6)(cid:6)(cid:6)(cid:7)(cid:7)(cid:7)(cid:7)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:10)(cid:10)(cid:10)(cid:10)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:11)(cid:11)(cid:11)(cid:11)(cid:11)(cid:11)(cid:11)(cid:11)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:6)(cid:6)(cid:6)(cid:6)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:12)(cid:12)(cid:12)(cid:12)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:13)(cid:13)(cid:13)(cid:13)(cid:14)(cid:14)(cid:14)(cid:14)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:15)(cid:15)(cid:15)(cid:15)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:7)(cid:7)(cid:7)(cid:7)(cid:17)(cid:17)(cid:17)(cid:17)(cid:15)(cid:15)(cid:15)(cid:15)(cid:15)(cid:15)(cid:15)(cid:15)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:18)(cid:18)(cid:18)(cid:18)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:15)(cid:15)(cid:15)(cid:15)(cid:6)(cid:6)(cid:6)(cid:6)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:19)(cid:19)(cid:19)(cid:19)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:17)(cid:17)(cid:17)(cid:17)(cid:6)(cid:6)(cid:6)(cid:6)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:20)(cid:20)(cid:20)(cid:20)(cid:21)(cid:21)(cid:21)(cid:21)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)
(cid:22)(cid:22)(cid:22)(cid:22)(cid:21)(cid:21)(cid:21)(cid:21)(cid:7)(cid:7)(cid:7)(cid:7)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:13)(cid:13)(cid:13)(cid:13)(cid:3)(cid:3)(cid:3)(cid:3)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:1)(cid:1)(cid:1)(cid:1)(cid:7)(cid:7)(cid:7)(cid:7)(cid:17)(cid:17)(cid:17)(cid:17)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:22)(cid:22)(cid:22)(cid:22)(cid:22)(cid:22)(cid:22)(cid:22)(cid:3)(cid:3)(cid:3)(cid:3)(cid:15)(cid:15)(cid:15)(cid:15)(cid:1)(cid:1)(cid:1)(cid:1)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:12)(cid:12)(cid:12)(cid:12)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:22)(cid:22)(cid:22)(cid:22)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:4)(cid:4)(cid:4)(cid:4)(cid:13)(cid:13)(cid:13)(cid:13)(cid:3)(cid:3)(cid:3)(cid:3)(cid:15)(cid:15)(cid:15)(cid:15)(cid:6)(cid:6)(cid:6)(cid:6)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:22)(cid:22)(cid:22)(cid:22)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:6)(cid:6)(cid:6)(cid:6)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:13)(cid:13)(cid:13)(cid:13)(cid:3)(cid:3)(cid:3)(cid:3)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:4)(cid:4)(cid:4)(cid:4)(cid:7)(cid:7)(cid:7)(cid:7)(cid:17)(cid:17)(cid:17)(cid:17)(cid:12)(cid:12)(cid:12)(cid:12)(cid:21)(cid:21)(cid:21)(cid:21)(cid:1)(cid:1)(cid:1)(cid:1)(cid:6)(cid:6)(cid:6)(cid:6)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:17)(cid:17)(cid:17)(cid:17)(cid:15)(cid:15)(cid:15)(cid:15)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)
(cid:12)(cid:12)(cid:12)(cid:12)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:18)(cid:18)(cid:18)(cid:18)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:6)(cid:6)(cid:6)(cid:6)(cid:3)(cid:3)(cid:3)(cid:3)(cid:19)(cid:19)(cid:19)(cid:19)(cid:17)(cid:17)(cid:17)(cid:17)(cid:13)(cid:13)(cid:13)(cid:13)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:6)(cid:6)(cid:6)(cid:6)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:22)(cid:22)(cid:22)(cid:22)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:22)(cid:22)(cid:22)(cid:22)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:1)(cid:1)(cid:1)(cid:1)(cid:17)(cid:17)(cid:17)(cid:17)(cid:15)(cid:15)(cid:15)(cid:15)(cid:12)(cid:12)(cid:12)(cid:12)(cid:3)(cid:3)(cid:3)(cid:3)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:5)(cid:7)(cid:7)(cid:7)(cid:7)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:8)(cid:22)(cid:22)(cid:22)(cid:22)(cid:9)(cid:9)(cid:9)(cid:9)

Effets d’Agrobacterium rhizogenes sur les cultures hydroponiques …..…….129
III-1. Effets comparés de différentes souches d'A. rhizogenes ……………………...…..129
III-1.1 Croissance végétative …………….……………………………………………...129
III-1.2 Production de biomasse …………………………………………………………131
III-1.3 Production de métabolites secondaires ……………….………………………....132
III-2. Effets de la souche A. rhizogenes TR7 ………………………………………...…133
III-2.1 Croissance végétative ………….………………………………………………...134
III-2.2 Production de biomasse …………………..……………………………………..136
III-2.3 Production de métabolites secondaires ……………………………………… .. 137
III-2.4 Evolution de la microflore dans la solution nutritive …………………………...139
III-2.5 Conclusion partielle ……………………………………………………………..140
8
III-3. Utilisation de gènes rapporteurs egfp et gus en vue de comprendre l'effet d’A.
rhizogenes TR7……………...…….……………………………………………………..141
III-3.1 Croissance végétative et production de biomasse ………..……………………141
III-3.2 Production de métabolites secondaires ………………...………………………144
III-3.3 Evolution de la microflore dans la solution nutritive …………………………..146
III-3.4 Effet de la microflore de la solution nutritive sur la dégradation des alcaloïdes
tropaniques ……………………………………………………...………………………147

Développement de cultures hydroponiques stériles pour l’étude de l’interaction
plante-microorganismes ……………………………………………………………….149
III-4. Effets de la microflore dans la solution nutritive …………………………………149
III-4.1 Microflore et croissance des plantes ……………………………………………150
III-4.2 Microflore et accumulation d'alcaloïdes dans la plante ………………………...153
III-4.3 Discussion et conclusion partielle ………………………………………………154
III-5. Evaluation de la capacité d'absorption racinaire d'alcaloïdes présents dans la
solution nutritive ………………………………………………………………………..155
III-5.1 Evolution de la concentration de H&S dans la solution nutritive ………………155
III-5.2 Accumulation de H&S dans la plante …………………………………………..156
III-5.3 Discussion et conclusion partielle ………………………………………………158
III-6. Effet de l’inoculation par Agrobacterium rhizogenes …………………………….159
III-6.1 Effet combiné d’Agrobacterium rhizogenes et d'une microflore diversifiée……159
III-6.2 Effet combiné d'A. rhizogenes TR7 et de l'acétosyringone utilisée comme
activateur de virulence…………………………………………………………………165
III-7. Détermination des modalités d'action d'Agrobacterium par analyse des racines
obtenues après co-culture plantes-bactéries en conditions axéniques…………168
III-7.1 Co-cultures axéniques Datura-Agrobacterium…………………………………..168
III-7.2 Etude de l’expression des gènes rapporteurs…………………………………….170
III-7.3 Isolement de racines et réalisation de tests en culture in vitro…………………..172
III-7.4 Confirmation moléculaire de l'état transgénique des racines……………………175
III-7.5 Caractérisation de la croissance et du métabolisme des racines transformées…..181
III-7.6 Discussion et conclusion partielle……………………………………………….183

CONCLUSIONS GENERALES ET PERSPECTIVES ……………………………………186
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES ……………………………………….…………. 194
LISTE DE FIGURES – PLANCHES – TABLEAUX …………………………………….. 211
ANNEXES
CUMMUNICATIONS SCIENTIFIQUES

9