Efeitos dos frutos da Solanum lycocarpum St Hil em ratas prenhes e sua prole durante a gestação PDF
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UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO FACULDADE DE CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS Programa de Pós-Graduação em Toxicologia e Análises Toxicológicas Efeitos dos frutos da Solanum lycocarpum St Hil em ratas prenhes e sua prole durante a gestação e início da lactação: alterações na esfera reprodutiva e na atividade dos sistemas monoaminérgicos centrais Aline Schwarz Tese para obtenção do grau de DOUTOR Orientadora: Profa. Dra. Helenice de Souza Spinosa São Paulo 2005 UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO FACULDADE DE CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS Programa de Pós-Graduação em Toxicologia e Análises Toxicológicas Efeitos dos frutos da Solanum lycocarpum St Hil em ratas prenhes e sua prole durante a gestação e início da lactação: alterações na esfera reprodutiva e na atividade dos sistemas monoaminérgicos centrais Aline Schwarz Tese para obtenção do grau de DOUTOR Orientadora: Profa. Dra. Helenice de Souza Spinosa São Paulo 2005 Aline Schwarz Efeitos dos frutos da Solanum lycocarpum St Hil em ratas prenhes e sua prole durante a gestação e início da lactação: alterações na esfera reprodutiva e na atividade dos sistemas monoaminérgicos centrais Comissão Julgadora da Tese para obtenção do grau de Doutor Profa. Dra. Helenice de Souza Spinosa orientador/presidente Viviane Mayumi Maruo 1o. examinador Ana Cristina Tasaka 2o. examinador Ernani Pinto Junior 3o. examinador Regina Lucia Moraes Moreaux 4o. examinador São Paulo, 11 de novembro de 2005. Dedico esta tese aos meus queridos pais, amado filho e irmãos. Sem vocês não seria o que sou hoje, nem tão pouco chegaria até aqui. Amo vocês! "Tenha sempre presente que a pele se enruga, o cabelo embranquece, os dias convertem-se em anos... Mas o que é importante não muda; a tua força e convicção não têm idade. Atrás de cada linha de chegada, há uma de partida. Atrás de cada conquista, vem um novo desafio. Enquanto estiveres vivo, sente-te vivo. Se sentes saudades do que fazias, volta a fazê-lo. Continua, quando todos esperam que desistas. Não deixes que enferruje o ferro que existe em ti. Faz com que em vez de pena, te tenham respeito. Quando não conseguires correr através dos anos, trota. Quando não conseguires trotar, caminha. Quando não conseguires caminhar, use uma bengala. Mas nunca te detenhas!" Madre Teresa de Calcutá Agradecimentos Agradeço, primeiramente, a Deus e à Nossa Senhora por me concederem saúde, forças, determinação, vontade e perseverança. Agradeço aos animais aqui empregados que tiveram suas vidas sacrificadas, pois sem eles nenhum procedimento poderia ter sido desenvolvido. São de fato a alma do trabalho! Agradeço ao meu querido Nelson que sempre me apoiou, acreditou e me proporcionou momentos de alegria e tranquilidade. Amo você! Agradeço à Profa. Helenice de Souza Spinosa que me acolheu, confiou e acima de tudo sempre acreditou em mim. Obrigada Professora! O que me tornei hoje devo à senhora! Agradeço à Profa. Silvia Berlanga pela atenção, apoio e interesse por meu bem estar pessoal e por minha vida profissional. Muito obrigada pela valiosa e importantíssima ajuda! Agradeço de coração! Agradeço à Dra. Mitsue Haraguchi pela atenção em etapas importantes do projeto. Agradeço ao Professor Ernani Pinto pela preciosa colaboração. Valeu! Agradeço aos professores Regina Lúcia Moraes Moreau, Alexandre Barbuto, Wilma Kempinas, Maria Lúcia Z. Dagli , Jorge C. Florio e Maria M. Bernardi pelo valioso auxílio quando necessário. Muito obrigada! Agradeço à Profa. Dra. Elfriede Marianne Bacchi do Departamento de Farmacognosia da FCF-USP por disponibilizar a estufa para a secagem dos frutos. Muito obrigada! Agradeço ao Paulo Cesar e à Ester do CEPTOX (USP-Pirassununga) pela valiosa ajuda e amizade. Muitíssimo obrigada! Agradeço aos meus queridos amigos da Toxicologia: Maurício, Dani, Paula, Simone, Emerson, Luciane, Thiago, Virgínia, Alexandre. Obrigada a todos vocês! Agradeço aos meus queridos amigos da Veterinária: Milena, Érika, Márcia, Camila, Julia, Andréia, Caio, Guto, Domenica, Monica, Breno, Marcos. Valeu pelo apoio! Agradeço aos queridos amigos do ICB: Paula, Alexandra, Clara, Andrea, Marisa, Marcio. Conhecer vocês foi tudo de bom! Agradeço à querida Célia pela valiosa orientação. Muito obrigada! Agradeço à Magali, Pricila e Ricardo do laboratório do VPT. Obrigada pela atenção! Agradeço à Cláudia e aos funcionários do biotério do VPT. Obrigada pelo carinho e imprescindível ajuda! À todos os demais que participaram e colaboraram de alguma maneira nesta etapa que aqui finaliza. Muito obrigada! Sumário Lista de Figuras............................................................................................................................ 01 Lista de Tabelas............................................................................................................................ 04 Resumo.............................................................................................................................................. 07 Abstract............................................................................................................................................ 08 1. Introdução.................................................................................................................................. 09 2. Objetivos .................................................................................................................................... 31 3. Material e métodos................................................................................................................. 32 3.1 Animais......................................................................................................................... 32 3.2 Planta............................................................................................................................. 32 3.3 Equipamentos, vidrarias, aparelhos e outros............................................ 33 3.4 Drogas e reagentes.................................................................................................... 35 3.5 Kits analíticos............................................................................................................. 37 4. Procedimentos.......................................................................................................................... 39 4.1 Extração dos alcalóides dos frutos verdes dessecados e moídos da S. lycocarpum..................................................................................................................... 39 4.2 Identificação dos alcalóides solamargina e solasonina nos frutos verdes dessecados e moídos da S. lycocarpum.................................................... 42 4.3 Preparo da ração com 10% de S. lycocarpum.................................................. 44 4.4 Diagnóstico de prenhez.......................................................................................... 45 4.5 Avaliação da toxicidade materna...................................................................... 46 4.6 Desempenho reprodutivo e avaliação perinatal.......................................... 46 4.7 Acompanhamento do ciclo estral....................................................................... 47 4.8 Análise do peso úmido e estudo histopatológico de órgãos acessórios dos aparelhos reprodutivos masculino e feminino e outros órgãos diversos..................................................................................................................................... 48 4.9 Ovariectomia de fêmeas....................................................................................... 48 4.10 Avaliação do comportamento sexual............................................................ 49 4.10.1 Orientação sexual de machos................................................................. 49 4.10.2 Comportamento sexual de fêmeas....................................................... 51 4.10.3 Comportamento sexual de machos....................................................... 52 4.11 Estudo da fertilidade das proles........................................................................ 54 4.11.1 Em fêmeas.......................................................................................................... 55 4.11.2 Em machos.......................................................................................................... 56 4.12 Avaliação dos níveis de metabólitos de hormônios sexuais em fezes de ratos e dos níveis séricos de hormônios tireoideanos na prole adulta............................................................................................................................... 56 4.12.1 Colheita e armazenamento do material fecal........................................ 56 4.12.2 Colheita e armazenamento do soro............................................................ 57 4.12.3 Processamento das amostras fecais.......................................................... 57 4.12.4 Dosagens hormonais....................................................................................... 59 4.12.5 Validação de kits para as dosagens fecais............................................ 61 4.12.6 Níveis dos metabólitos dos hormônios sexuais em diferentes períodos da gestação....................................................................................................... 61 4.12.7 Transformação das concentrações fecais determinadas por RIE.......................................................................................................................................... 61 4.13 Dosagem dos níveis cerebrais de DA, HVA, DOPAC,, MHPG, VMA, 5-HT e 5-HIAA........................................................................................................ 62 4.13.1 Procedimentos para obtenção de amostras de homogenatos cerebrais...................................................................................................... 62 4.13.2 Condições cromatográficas........................................................................... 63 4.13.3 Preparo das soluções padrões de monoaminas...................................... 64 5. Delineamento experimental................................................................................................ 65 5.1 Avaliação da toxicidade materna...................................................................... 65 5.2 Desempenho reprodutivo e avaliação perinatal.......................................... 66 5.3 Análise do peso úmido e estudo histopatológico de órgãos..................... 66 5.4 Avaliação do comportamento sexual............................................................... 67 5.5 Estudo da fertilidade das proles...................................................................... 68 5.6 Dosagem dos metabólitos de hormônios sexuais nas fezes de ratos........................................................................................................................................... 69 5.7 Dosagem dos níveis de neuromaminas cerebrais e seus metabólitos nas regiões hipotalâmica e estriatal do SNC de ratos............ 70 5.8 Análise estatística................................................................................................ 70 6. Resultados.................................................................................................................................. 72 6.1 Extração e identificação de alcalóides dos frutos verdes dessecados e moídos da S.lycocarpum.............................................................................................. 72 6.2 Avaliação da toxicidade materna....................................................................... 80 6.3 Desempenho reprodutivo e avaliação perinatal........................................ 88 6.4 Avaliação do ciclo estral....................................................................................... 96 6.5 Análise do peso úmido e estudo histológico de diferentes órgãos retirados................................................................................................................................... 97
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