Determination of the Protein Fraction and Presence of Antibodies in the Seminal Fluid of Llama PDF
Preview Determination of the Protein Fraction and Presence of Antibodies in the Seminal Fluid of Llama
BBrriigghhaamm YYoouunngg UUnniivveerrssiittyy BBYYUU SScchhoollaarrssAArrcchhiivvee Theses and Dissertations 2002 DDeetteerrmmiinnaattiioonn ooff tthhee PPrrootteeiinn FFrraaccttiioonn aanndd PPrreesseennccee ooff AAnnttiibbooddiieess iinn tthhee SSeemmiinnaall FFlluuiidd ooff LLllaammaa ((LLaammaa ggllaammaa)) Francisco Flores Lopes Brigham Young University - Provo Follow this and additional works at: https://scholarsarchive.byu.edu/etd Part of the Animal Sciences Commons, and the Veterinary Medicine Commons BBYYUU SScchhoollaarrssAArrcchhiivvee CCiittaattiioonn Lopes, Francisco Flores, "Determination of the Protein Fraction and Presence of Antibodies in the Seminal Fluid of Llama (Lama glama)" (2002). Theses and Dissertations. 5386. https://scholarsarchive.byu.edu/etd/5386 This Thesis is brought to you for free and open access by BYU ScholarsArchive. It has been accepted for inclusion in Theses and Dissertations by an authorized administrator of BYU ScholarsArchive. For more information, please contact [email protected]. UUNNTIVVEERRSSIIDDAADD CATOLICA BOLIVIANA " " SAN PABLO UNIDAD ACADEMICA CAMPESINA TTIIAAHRUUAANNAACCOO CARRERA INGENIERIA ZOOTECNICA : Tesis de grado : DETERMINACIÓN DETERMINACION DEL PERFIL PROTEICO Y PRESENCIA DE ANTICUERPOS EN EL PLASMA SEMINAL DE LLAMA ( glama (L(Laammaa glama)) presentado por : FRANCISCO FLORES LOPES REQUISITO PARA OBTENER EL TITULO PROFESIONAL DE " " INGENIERO ZOOTECNISTA PAZBOLIVIA LLLAAAPPPAAAZZZB-B-BOOOLLLIIIVVVIIIAAA 2002 DEDICATORIA El presente trabajo eessttaá dedicado a la memoria de mi sseenñoorr padre Pedro : , qquuiieennppuussoo la piedra ffiumnddaammeennttaall para el iinmicciiooddeemmii pprrooffeessiioonnaalliizzaacciioónn DDeellmmiissmmoo . modo mis mmaáss ssmincceerrooss agradecimientos a mi abnegada madre Tiburcia por su apoyo y , : sacrificio ddiuirraannttee mis aafñtooss de estudio . A mi esposa A Nieves por su ccoommpprreennssiioónn y , . apoyo incondicional A mis hijos Hugo y : . Jessika ffuaeenntteess de iinnssppiirraacciioónn inagotable y , razón razon de vida Con todo mi aprecio a . mis hermanos DDaammiiaánn Macario Alberto y en : , , especial a MMaarrttiínn Quienes me brindaron su . apoyo para la ccuullmmiinnaacciioónn de mi pprrooffeessiioonnaalliizzaacciioónn . FRANCISCO FLORES LOPES AGRADECIMIENTOS A la Unidad AAccaaddeémmiiccaa Campesina de Tiahuanaco de la Universidad CCaattoólliiccaa Boliviana Carrera hIniggeenniieerríiaa ZZooootteéccnniiccaa Casa superior de estudios donde se forman , : . profesionales para el desarrollo del aárreeaa rural . T T Al Reverendo Padre Claudio Patty Director General de la UULLIAIAAACC-C--CTT a los CCaatteeddrraáttiiccooss de , , UAC la Carrera hIniggeenniieerriiaa ZZooootteéccnniiccaa y ddeemmaáss docentes de la UAC--T quienes son los , : país formadores de recursos humanos para el desarrollo de nuestra rreeggiioónn y el pais . Al M V Z Santiago Copa Quispe quien como amigo y Jefe de Carrera supo , , . . . orientarme muy acertadamente en el proceso de mi pprrooffeessiioonnaalliizzaacciioónn y apoyar la eejjeeccuucciioónn y ccoonncclluussiioónn de esta tteesstiss . Expreso mis mmaáss sinceros agradecimientos a la LLiiec Bioq Farm Nicolasa Lourdes Vino . . . guía Nina por ser mi mentora y guia antes durante y la ccuullmmiinnaacciioónn del presente trabajo de , , iinnvveessttiiggaacciioónn . De la misma manera a la LLiiec Bioq FFaarrmro Marcelina Condori de Perez, por sus . . . . sugerencias y recomendaciones para la ccoonncclluussiioónn de esta iinnvveessttiiggaacciioónn . Al M V Z GGuuiiddoe Medina Suca por su valiosa ccoonnttrriibbuucciioónn desinteresada hacia la , . . . iinnvveessttiiggaacciioónn . Al BENSON AGRICULTURE AND FOOD INSTITUTE (B(Brriigghhaamm Young University , USA Utah PPrroovvoe ) por su ccooooppeerraacciioónn financiera para la ccuullmmiinnaacciioónn de este trabajo , . . . . De la misma manera a mis ccoommppaanñeerrooss del equipo de tesistas del aárreeaa de rreepprroodduucccciioónn en ccaammeélliiddooss Pedro D Remigio y RReenneé AAddeemmaáss a Mario Cristobal MMaaggiínn Melecio : . , , . , , , , Flavio Walter Pedro M con los que ccoommppaarrttií mi vida estudiantil y ddeemmaáss personas , , , , . que directa o indirectamente apoyaron sugirieron y aportaron con su grano de arena en , . el ddeessaarrrrooUlloo de la presente iinnvveessttiiggaacciioónn . RREESSVUMMEENN A nivel iinntteermnaacciioonnaall Bolivia posee mayor ppoobbllaacciioónn de llamas seguido por el PPeerruú el , , , cual hace de nuestro ppaaiíss una potencia en este recurso renovable para trabajar y generar desarrollo eeccoonnoómmiiccoo principalmente por la calidad de su ccaarmnee que posee propiedades , , nutritivas superiores a otras especies animales comestibles . El desarrollo de la iinnvveessttiiggaacciioónn en nuestro ppaaiíss en llamas no tiene mucha , trascendencia Pero en otros paises existe avances desde vvaarriioess aafñlooss aattrraáss , , . eessppeecciifffliiccaammeennttee en el aárreeaa de rreepprroodduucccciioónn el cual presenta problemas para realizar un , rreeppoobbllaammiíeennttoo iinntteennssiivvoe por las ccaarraacctteerriíssttiiccaass singulares de su ccoóppuullaa y semen . - Con el presente trabajo realizado en la UUAACCTiaThiauhaunanaaccoo (U(UCCBB ) titulado , , . . . : DDeetteerrmmiinnaacciioónn del perfil proteico y presencia de anticuerpos en el plasma seminal de llamas de 3 4 y 5 aanñooss de edad en diferentes fechas de ccoolleecccciioónn de semen se ; , ; determinaron el nnuúmmeerroo de fracciones proteicas sus pesos moleculares presencia de , , anticuerpos y las concentraciones de las fracciones proteicas DDeetteerrmmiinnaánnddoossee la . presencia del posible componente del plasma seminal causante del bajo porcentaje de ccrriíaass logradas en estos animales . En el trabajo de campo se realizaron una serie de pruebas para que el macho responda , peruano a la ccoolleecccciioónn artificial del semen iniciando con la tteéccnniiccaa del mmaanniiqquuií ((peruano)) y ; otros los cuales no tuvieron resultados Se llooggrroó el objetivo con la tteéccnniiccaa del mmaanniiqquuií , . de grupa de llama el cual fue aceptado en un 80 % de los machos , . El trabajo de laboratorio ccoonnssiissttiioó en separar el plasma seminal del semen mediante cceennttrriiffuuggaacciioónn Para la ddeetteerrmmiinnaacciioónn de las fracciones proteicas se eemmpplleeoó la tteéccnniiccaa de , . la electroforesis El cual ppeerrmmiittiioó determinar el nnuúmmeerroo de fracciones proteicas sus , . pesos moleculares inmunoglobulinas y sus concentraciones , . La mayor cantidad de fracciones proteicas se pprreesseennttoó en los animales de 4 y 5 aanñooss de , edad con 15 a 18 fracciones proteicas En las colecciones de semen ppoerr semanas la , , . en uúllttiimmaa semana, pprreesseennttoó 18 fracciones proteicas, ((en el animal de 4 aafñtooss de eeddaadd)); los cuales posiblemente juegan un papel importante en la nnuuttrriicciioónn ccaappaacciittaacciioónn y , , pprrootteecccciioónn del espermatozoide . Los pesos moleculares de las proteinas del plasma seminal varian de un animal a otro y , , en las fechas de ccoolleecccciioónn Los rangos eexxttrreemmoess de los pesos moleculares es de 2000 . hasta 150 000 Daltons Los animales de 5 aanñooss de edad presentaron pesos moleculares , . mmaáss altos con respecto a las edades menores . En lo que respecta a las inmunoglobulinas o anticuerpos se eennccoonnttrroó pprrootteeiínnaass con , pesos moleculares de 150 000 a 152 500 Daltons en aanniimmaatleess de 3 y 5 aanñooss de edad y mediante la tteéccnniiccaa de la iinnmmuunnooddiiffuussiioónn radial se eennccoonnttrroó inmunoglobulinas G en el , plasma seminal de las llamas . Las concentraciones de las fracciones proteicas son variables con rraannggoess eexxttrreemmeoss de , mg ml 11.65 a 0.03 mg//ml de plasma seminal Estas variaciones son hheetteerrooggeénneeooss tanto en las . . . edades de los aanniímmaalleess como en las fechas de ccoolleecccciioónn existe ligera superioridad en los ; animales de 5 aanñooss de edad y en la tercera semana de ccoolleecccciioónn de semen . Los resultados obtenidos de las fracciones proteicas y sus pesos moleculares demuestran , que existen anticuerpos en el plasma seminal de la llama que juegan un papel , importante en la viabilidad eessppeerrmmaáttiiccaa por lo que se debe de seguir investigando para , determinar su ffuunncciioónn especifica y buscar aalltteermnaattiivvaass para aislar y neutralizar estos anticuerpos e incrementar los indices de fertilidad de estos animales . INDICE GENERAL pag . INTRODUCCION1 INTRODUCCION 1 1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . especificos2 1.1 Objetivo general 2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . III 1.1.1 Objetivos especificos 2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Bolivia3 2 REVISION BBfIfBiLLIIOOGGRRAAFFIICCAA 3 .3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . camelidos3 2.1 Los ccaammeélliiddooss en Bolivia 3 . . ge. . . . . . . .r. . . . . .m. . . . . . . . . . . . . .o. . . . . . . . .p. . . . . . . . l. . . . . a. . . . . . . .s. . . . . . .m. . . . . . . . . . . . . .a. . . . . . . .4. . . . . 2.1.1 GGeeooppoólliittiiccaa de los camélidos . . . orcg.a. . . .a. . . . . m. . . . . .n. . . . . . . . . . .e.i. . . . . . s. .l. . . . . .i. .m. . . .d. . . . . . . . . .o. . . . .o. . . . . .s. . . . . .4. .4. . . . . . 2.1.2 El peligro para el germoplassma angre44 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.1.3 La rreepprroodduucccciioónn de los camélidos 4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . proteinas5 defensa4 2.2 Defensas del organismo 4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.2.1 Funciones protectoras de la sangre 4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.2.1.1 Reacciones ggeenneerraaftleess due defennsa ciones54 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . proteinas6 2.3 Las proteínas 5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.3.1 Las pprrootteeiínnaass y sfus fuunciones nciones85 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . molecular8 2.3.1.1 CCllaassiiffiiccaacciioónn de las proteínas 6 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . proteinas8 2.4 Las enzimas y sus funciones 8 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Inmunologia10 2.5 Peso molecular 8 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.5.1 Peso molecular de las proteínas 8 . . . glob.u. . . . . . . . . . . . l. . . . . . . i. . . . . . .n. . . . . . . . . . . . .a. . . . . . . . . . .s. . . . . . . . .1. . . . . . . . . . . . .1. . . . . . 2.6 Inmunología 10 Respuestainmuneespecifica10 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.6.1 Respuesta inmune especifica 10 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . inmunoglobulinas11 2.6.2 Las globulinas 11 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Semen12 inmunoglobulinas11 2.6.3 Las inmunoglobulinas 11 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.6.4 Estructura de las inmunoglobulinas 11 . . . semun.i. .d. .i. .a. . . .d. .n. .e. . . s. . . .t. .e. . . .ta. .r. . .a. . . p. . . . e.l. . .p. . . .t.1. i. . .d. . . .i. .c. . . .a.2. . s. . . .1. . . 2 2.6.4.1 Las inmunoglobulinas como unidades tetrapeptidicas 12 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.7 Semen 12 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .r. . . . .e. . . . . . . .p. . . . . . . . r. . . . . .o. . . . . . . . .d. . . . . . . . u. . . . . . . . .c. . . . . . . .c. . . . . . . i. . . . .o. . . . . . . . .n. . . . . . . . 1. . . . . . . . .3. . . 2.7.1 Plasma seminal 12 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Autoinmunidad13 2.8 Inmunologia de la reproducción 13 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.8.1 Autoinmunidad 13 espermatozoides14 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.8.2 Aspectos iinnmmuunnoolloóggiiccooss de los espermatozoides 14 anticuerpos14 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.8.3 Estudios iinnmmuunnoolloóggiiccooss 14 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.9 DDeetteerrmmiinnaacciioónn de anticuerpoes lectroforesis1514 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.10 Concepto de la ttéeccnniiccaaddee electroforesis 15 . . momloe.v. . . . .i. . .lc. . .i. . d. . . . .ua. . . . .d. . . . .el. . . .l. .a.e. . . . c. . . .s.t. . r. . . .i.1. c. . . . .a. . . .17. . . . .5 2.10.1 PPaarraámmeettrrooss qquueeiinnfflluuyyeenn en la movilidad eléctrica 15 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . electroforesis17 degeles19 2.10.2 MMiiggrraacciióonnddee lsas mooléculasbregeles1817 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.10.3 Tipos de electroforesis 17 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.10.4 Electroforesis sobre geles 18 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . poliacrilamida20 2.10.5 Tipos de geles 19 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.10.5.1 Ventajas del gel de poliacrilamida 20 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.10.5.2 OObbtteenncciioónn del gel 21 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.10.5.3 PPrreeppaarraacciioónn de los geles 21 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.10.5.4 RReeffrriiggeerraacciioónn 22 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.10.6 CCaarraacctteerriíssttiiccaass de las electroforesis en gel , 22 . . . . . . . .SS. . . . .D.D. . . . . . S. . .S. . .). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . (PPAAGGEE 2.10.7 Electroforesis en gel de poliacrilamida SDS ((PAGE--SDS)) 23 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.10.8 DDeetteerrmmiinnaacciioónn de pesos moleculares 23 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.11 CCaarraacctteerriizzaacciioónn de las mmoolleéccuullaass proteicas 24 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.12 DDeetteerrmmiinnaacciioónn de pesos moleculares (P( PMM ) por ccrroommaattooggrraaffiíaa de eexxcclluussiioónn . . . . molecular 25 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.13 MMeeddiicciioónn de inmunoglobulinas 25 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.14 Correspondencia aannttiiggeénniiccaa entre cepas de campo y rreeffeerreenncdiaa de B CCaarnviiss por . . SDS . PAGE SSSSDDDDSSSS---PPPAAAGGGEEE 26 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.15 Electroforesis en gel de ppoolliiaaccrnillaammiiddaa al 10 % 27 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.16 Proteinas y anticuerpos en semen del hhuummaanneo 27 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.16.1 Los tejidos accesorios y sus secresiones 27 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.16.2 Anticuerpos asociados al plasma seminal y al espermatozoide 27 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.16.3 EEssttuuddiioossiinnmmuunnoolloóggiiccooss 28 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.16.4 Proteinas secretadas por la vesicula seminal 2288 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.16.5 Anticuerpos antiespermatozoides 29 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 MMAATTEERRIIAALLEESSYYMMEETTOODDOOSS 30 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.1 LLooccaalliizzaacciioónn 30 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.2 TTaammaanñoo de la muestra 30 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . :. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.3 Materiales para rreeccoolleecccciioónn de semen 31 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.4 Equipo y materiales para sseeppaarraacciioónn y ccoonnsseerrvvaacciioónn del plasma seminal 31 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.5 Equipo para la ddeetteerrmmiinnaacciioónn de los PM de las proteinas e inmunoglobulinas 32 . . . . . . . . . . . 3.6 Reactivos y soluciones para sseeppaarraacciioónn y ddeetteerrmmiinnaacciioónn de PM de Prot e Ig 32 . . . . . . . . . . . . . . 3.7 MMeéttooddoo 33 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Adquisición 3.7.1 Adquisicionddee animales 33 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.7.2 Transporte de los animales al lugar de la iinnvveessttiiggaacciioónn 33 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 33..88TTrraabbaajjoo de campo 33 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.8.1 Sanidad 33 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.9 Adiestramiento de los animales y tteéccnniiccaa de ccoolleecccciioónn de semen 34 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.9.1 SSeelleecccciioónn de los animales 34 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.9.2 CCoolleecccciioónn del semen 34 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 33..99..22.1l Armado de la vagina artificial y sus caracteristicas 35 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.9.2.2 MMoonnttaayy eeyyaaccuullaacciioónn 36 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.10 IIddeennttiiffiiccaacciioónn del semen colectado 36 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.11 Trabajo de laboratorio 37 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.11.1 SSeeppaarraacciioónn del plasma seminal del semen 37 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.11.2 VCCoonnsseerrvvaacciiaoónn del lplasmia sedminal ación373.377 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.12 DDeetteerrmmiinnaacciioónn del perfil proteico del plasma seminal 37 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.12.1 Validacion 37 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.12.2 EElleeccttrrooffoorreessisisddeepprrootetelínnaass 3388 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3..13 FFaaccttoorreessddeeeessttuuddiioo 42 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3..14 Variables de respuesta 42 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 33...1155.DDiisseenñoo experimental 42 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.16 AArrrreeggllooeessppaacciiaaLl 43 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ppaattrroónn4444 4 RESULTADOS Y DISCUSIONES 44 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4.1 . Electroforesis de pprrootteefínnaass e minmmuunnoogglloobbuulliinnaass 44 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4.1.1 El . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4.2 Fracciones proteicas en el plasma seminal de llamas 45 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4.2.1 Fracciones proteicas entre edades 47 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4.2.2 Fracciones proteicas entre semanas de ccoolleecccciioónn 48 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4.2.3 Fracciones proteicas entre ddiíaass de ccoolleecccciioónn en las semanas 49 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4.3 Pesos moleculares de las fracciones proteicas del plasma seminal de llama 51 . . . . . . . . . . . . . . . . 4.3.1 Pesos moleculares de fracciones proteicas entre edades 52 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4.3.2 Pesos moleculares entre semanas de ccoolleecccciioónn 54 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4.3.3 Pesos moleculares entre ddiíaass de ccoolleecccciioónn en las semanas 55 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4.4 PPrreesseenncciiaaddee anticuerpos en el plasma seminal de llama 57 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4.4.1 PPrreesseenncciiaaddee anticuerpos entre edades 57 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4.4.2 Presencia de anticuerpos entre semanas de ccoolleecccciioónn 58 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4.4.3 Presencia de anticuerpos entre ddiíaass de ccoolleecccciioónn en las semanas 59 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4.5 CCoonncceennttrraacciioónn de las fracciones proteicas en el plasma seminal de llama 60 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4.5.1 CCoonncceennttrraacciioónn de fracciones proteicas entre edades 61 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4.5.2 CCoonncceennttrraacciioónn de fracciones proteicas entre semanas de ccoolleecccciioónn 63 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4.5.3 CCoonncceennttrraacciioónn de fracciones proteicas entre los ddiíaass de ccoolleecccciioónn en las semanas 64 . . . . . 5 CONCLUSIONES 67 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6. RECOMENDACIONES 69 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7 RREEVVIISSIIOÓNN BIBLIOGRAFICA 70 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8. ANEXOS 73 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . INDICE DE CUADROS Cuadro No 1 Indices zzooootteéccnniiccooss de algunos animales referentes a la rreepprroodduucccciioónn 3 . . . . . . . . Cuadro No 2 PPrrootteeiínnaass conjugadas 6 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Cuadro No 3 Otros grupos importantes de pprrootteeiínnaass 7 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Cuadro No 4 Pesos moleculares ddeeaallgguunnaass pprrootteeiínnaass 9 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Cuadro No 5 Pesos moleculares y distancias de fracciones proteicas 9 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Cuadro No 6 Algunas pprrootteeiínnaass eessttaánnddaarr empleadas normalmente a nivel iinntteermnaacciioonnaall , . . en PAGE 10 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . según Cuadro No 7 Tipos de electroforesis segun su utilidad y sseeppaarraacciioónn 18 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Cuadro No 8 CCoonncceennttrraacciioónn y porcentajes rreellaattiivvoess de inmunoglobulinas de suero y . . animales31 secreciones mamarias de bovinos y porcinos 24 . . . ., . . . . . . . . . . ., . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . ccoolleecccciioónn3366 Cuadro No 9 CCaannttiiddaaddyyeeddaadd ddeellooss animales 31 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Cuadro No 10 Semanas y ddiíaass de . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Cuadro No 11 Protocolo de pprreeppaarraacciioónn del gel 39 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Cuadro No 12 DDiissttrriibbuucciioónn de las colecciones por edad semanas y ddiíaass 43 , . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Cuadro No 13 NNuúmmeerroo de fracciones proteicas en el plasma seminal de llama 45 . . . . . . . . . . . . . . . . . Cuadro No 14 Promedios ggeenneerraalelesysy desviaciones estandar 46 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Cuadro No 15 AAnnaálliissiiss de varianza para fracciones proteicas 46 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Cuadro No 16 CCoommppaarraacciioónn de medias de fracciones proteicas entre semanas 49 . . . . . . . . . . . . . . . . . INDICE DE GGRRAÁFFIICCAASS GGrráaffiiccaaNNoo PPaattrroónn de pesos moleculares de pprrootteeiínnaass ppaattrroónn 45 1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . GGrráaffiiccaaNNoo 2 Promedios de fracciones proteicas entre edades 47 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . GGrráaffiiccaaNNoo 3 Promedios de fracciones proteicas entre semanas de ccoolleecccciioónn 48 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . GGrraáffiiccaa No 4 Promedios de fracciones proteicas entre ddiíaass de ccoolleecccciioónn en la sseemmaanna a5500 . . . . . . GGrráaffiiccaaNNoo 5 RRaannggeoss de pesos moleculares entre edades 52 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . GGrraáffiiccaa No 6 RRaannggeoss de pesos moleculares entre semanas de ccoolleecccciioónn 54 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . GGrraáffiiccaa No 7 Rangos de pesos moleculares entre ddiíaass de ccoolleecccciioónn en la semana 55 . . . . . . . . . . . . GGrráaffiiccaaNNoo 8 RRaannggeoss de pesos moleculares de fracciones proteicas del plasma . . seminal ddeebboovviinnoo 56 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . GGrraáffiiccaa No 9 CCoonncceennttrraacciioónn de fracciones proteicas entre edades 61 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . GGrráaffiiccaaNNoo 10 CCoonncceennttrraacciioónn de fracciones proteicas entre semanas de ccoolleecccciioónn 63 . . . . . . . . . . . . GGrráaffiiccaaNNoo 11 CCoonncceennttrraacciioónn de fracciones proteicas entre ddiíaass en la semana 64 . . . . . . . . . . . . . . . . . INDICE DE FIGURAS Figura No PPrrootteeiínnaass ppaattrroónn y su recorrido en la placa eelleeccttrrooffoorreéttiiccaa 1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . FFiigguurraaNNoo 2 Presencia de anticuerpos entre edades 57 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Figura No 3 Presencia de anticuerpos entre semanas de ccoolleecccciioónn 58 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . FFiigguurraaNNoo 4 Presencia de anticuerpos entre ddiíaass de ccoolleecccciioónn en las semanas 59 . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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