departamento de biología funcional y antropología física metalotioneínas en peces y gasterópodos

218 Pages·2007·4.04 MB·Spanish

DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA FUNCIONAL Y
ANTROPOLOGÍA FÍSICA

METALOTIONEÍNAS EN PECES Y GASTERÓPODOS : SU
APLICACIÓN EN LA EVALUACIÓN DE LA
CONTAMINACIÓN

ROCÍO UREÑA ROBLES

UNIVERSITAT DE VALENCIA
Servei de Publicacions
2007
Aquesta Tesi Doctoral va ser presentada a Valencia el dia 15 de
Desembre de 2006 davant un tribunal format per:

- D. Juan Javier Díaz Mayans
- D ª. María João Bebianno
- D. Julián Blasco Moreno
- D. Manuel Soto López
- D ª. María Dolores Garcerá Zamorano

Va ser dirigida per:
D ª. Amparo Torreblanca Tamarit
D. José Juan del Ramo Romero

©Copyright: Servei de Publicacions
Rocío Ureña Robles

Depòsit legal:
I.S.B.N.:978-84-370-6761-2
Edita: Universitat de València
Servei de Publicacions
C/ Artes Gráficas, 13 bajo
46010 València
Spain
Telèfon: 963864115
Departament de Biologia Funcional i Antropologia Física

Metalotioneínas en peces y gasterópodos:
su aplicación en la evaluación de la
contaminación

Rocío Ureña Robles
Burjassot, Valencia
2006
I
Tesis presentada por Rocío Ureña Robles para optar al grado de Doctora en
Ciencias Biológicas por la Universitat de València.

Fdo. Rocío Ureña Robles

Tesis dirigida por:

Amparo Torreblanca Tamarit, Doctora en Ciencias Biológicas y Profesora
Titular de Fisiología de la Universitat de València.

Jose Juan del Ramo Romero, Doctor en Ciencias Biológicas y Profesor Titular
de Fisiología de la Universitat de València.

Fdo. Amparo Torreblanca Tamarit Fdo. Jose Juan del Ramo Romero

La investigación presentada en esta Tesis se realizó en la Unidad de Fisiología Animal del
Departament de Biologia Funcional i Antropologia Física de la Facultat de Ciències Biològiques
de la Universitat de València, y se ha realizado durante el disfrute de una Beca del Programa
Nacional de Formación de Profesorado Universitario (FPU) del Ministerio de Educación y Ciencia
(Ref: AP2001-0373).

II
A mi madre

III
“En el punto donde se detiene la ciencia, empieza la imaginación”
Heyendhal
IV
Agradecimientos.
En primer lugar, agradecer a Amparo y Jose que la realización de este
trabajo haya sido posible, por confiar en mí y ayudarme en todo lo posible.
A Agustín Pastor por su inestimable ayuda en el análisis de las muestras
de metal. A Libia Sanz del Laboratorio de Proteínas de Biomedicina y a sus
compañeros, por enseñarme y responder a todas mis preguntas acerca de la
electroforesis y los geles. A Luz Valero y Pino del Servicio de Proteómica del
Centro de Investigaciones Príncipe Felipe, por su colaboración en la
espectrometría de masas y su paciencia conmigo.
A Maria Bebianno por acogerme en su laboratorio, enseñarme el método
polarográfico y atenderme siempre que lo necesitaba.
A los miembros del departamento por echarme una mano cuando la he
pedido, y en especial, a mis compañeras de laboratorio, a Ame y Ana, por
resolver todas mis dudas y estar dispuestas a escucharme, a Gloria por
todas las horas que ha echado conmigo en el laboratorio y a Neus por ser
mi compañera y mi amiga.
A todas mis amigas por estar siempre ahí y animarme cuando me
quedaba sin fuerzas. Y a Rosa porque siempre tiene las palabras que
necesito oír.
A mi madre y mis hermanos, que a pesar de no entender mucho este
camino, siempre me han animado a seguirlo.
A Jero, que me ha apoyado en esto, porque era importante para m
V
ÍNDICE
VI
Índice
ÍNDICE
.

ORGANIZACIÓN DE LA TESIS...........................................................1

1. INTRODUCCIÓN GENERAL............................................................5
1.1. CARACTERÍSTICAS GENERALES DE LAS METALOTIONEÍNAS..........................9
1.1.1. Metalotioneínas en peces...................................................................13
1.1.2. Metalotioneínas en gasterópodos........................................................15
1.2. MÉTODOS DE DETERMINACIÓN DE METALOTIONEÍNA................................16
1.2.1. Saturación con plata..........................................................................19
1.2.2. Polarografía de pulso diferencial (PPD)...............................................21
1.2.3. Ejercicio de intercalibración (BEQUALM)..............................................24
1.3. METALES EN EL MEDIO ACUÁTICO.............................................................25
1.3.1. Cadmio.............................................................................................28
1.3.2. Plomo...............................................................................................29
1.4. BIBLIOGRAFÍA...........................................................................................30

2. IMPACTO DE LA CONTAMINACIÓN POR METALES SOBRE
CARPAS Y BARBOS EN DIFERENTES PUNTOS DEL RÍO EBRO.........39
2.1. INTRODUCCIÓN.........................................................................................41
2.2. MATERIALES Y MÉTODOS..........................................................................43
2.2.1. Obtención de las muestras. ...............................................................43
2.2.2. Cuantificación de metalotioneína por saturación con plata....................45
2.2.3. Determinación de metales..................................................................47
2.2.4. Análisis estadístico.............................................................................48
2.3. RESULTADOS. ...........................................................................................49
2.4. DISCUSIÓN................................................................................................57
2.5. BIBLIOGRAFÍA...........................................................................................62

VII
3. ESTUDIOS EN ANGUILA EUROPEA Anguilla anguilla. .................65
3.1. INTRODUCCIÓN.........................................................................................67
3.2. MATERIALES Y MÉTODOS..........................................................................71
3.2.1. Diferencias en el contenido en metales y en metalotioneína
entre anguilas salvajes y cultivadas..............................................................71
3.2.1.1. Obtención de las muestras........................................................71
3.2.1.2. Determinación de metalotioneína por polarografía (PPD).............71
3.2.1.3. Determinación de metales.........................................................73
3.2.1.4. Análisis estadístico....................................................................74
3.2.2. Efectos de la exposición a plomo en anguila........................................74
3.2.2.1. Obtención de las muestras y exposición a plomo........................74
3.2.2.2. Determinación de metalotioneína y de metales...........................75
3.2.2.3. Cromatografía de exclusión molecular........................................76
3.2.2.4. Análisis estadístico....................................................................77
3.3. RESULTADOS...........................................................................................78
3.3.1. Diferencias en el contenido en metales y en metalotioneína
entre anguilas salvajes y cultivadas..............................................................78
3.3.2. Efectos de la exposición a plomo en anguila........................................88
3.4. DISCUSIÓN..............................................................................................98
3.5. BIBLIOGRAFÍA.......................................................................................108

4. ESTUDIOS EN EL GASTERÓPODO Melanopsis dufouri...............113
4.1. INTRODUCCIÓN.....................................................................................115
4.2. MATERIALES Y MÉTODOS.......................................................................120
4.2.1. Respuesta de Melanopsis dufouri frente a la exposición a
cadmio.....................................................................................................120
4.2.1.1. Muestreo, transporte y aclimatación.........................................120
4.2.1.2. Exposición a cadmio................................................................121
4.2.1.3. Estudios preliminares..............................................................123
4.2.1.4. Aspectos metodológicos en la determinación de
metalotioneína en M. dufouri...............................................................124
4.2.1.5. Evaluación de la exposición crónica a cadmio en la salud
del individuo, acumulación de metal y contenido en metalotioneína. .....127
4.2.1.6. Determinación de metalotioneína por polarografía (PPD)...........128
4.2.1.7. Determinación de metales.......................................................129
VIII