Cloning, sequence analysis and expression of a fatty-acid binding protein gene of Helicoverpa assulta (Lepidoptera: Noctuidae)

2007·0.48 MB·

by  Tao, Zhang

昆 虫 学 报 !"#$%&#’(’)’*+"$,+&+"$，!"#$%%&，’（% ’）：’$()’** +,,-%.’./0$10
"""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""
烟实夜蛾脂肪酸结合蛋白基因的克隆、
序列分析与表达
张 涛，安世恒，尹新明!
（河南农业大学植物保护学院，郑州 .’%%%$）
摘要：应用IK/LMI技术，从烟实夜蛾 -.)+"’/.01$$223)#$幼虫脂肪体组织和血细胞总I-@中反转录扩增脂肪酸结合
蛋白（C"77#/"=5GN5;G5;<FB87D5;，O@PL）基因的 =Q-@片段，克隆到原核表达载体 FR3S/.K/$上，转化大肠杆菌 PT$2
（Q3*），用+LKR进行诱导表达并进行检测。结果表明：扩增得到的片段全长*11 N（F RD;P";U登录号为QV$111.$），
编码2*$个氨基酸残基，预测分子量2’W% UQ，等点电’W(*。O@PL融合了R,K。原核表达后经电泳检测到约.2 UQ
大小的外源蛋白，XDE7DB;N687检测表明是目的蛋白。
关键词：烟实夜蛾；脂肪酸结合蛋白；基因克隆；序列分析；原核表达
中图分类号：V100 文献标识码：@ 文章编号：%.’./0$1（0 $%%&）%’/%’$(/%0
!"#$%$&，’()*($+( ,$,"-’%’ ,$. (/01(’’%#$ #2 , 2,33-4,+%. 5%$.%$& 01#3(%$
&($( #2 !"#$%&’"()* *++,#-*（6(0%.#03(1,：7#+3*%.,(）
YZ@-RK"8，@- ,:5/ZD;<，[+- S5;/!5;<!（M866D<D 8C L6";7 LB87D=758;，ZD;"; @<B5=A67AB"6 \;5JDBE57#，
Y:D;<9:8A .’%%%$，M:5;"）
85’31,+3：@ C"77#/"=5G N5;G5;< FB87D5;（O@PL）<D;D 8C -.)+"’/.01$ $223)#$ ]"E =68;DG ";G DHFBDEEDG C8B
CAB7:DB E7AG# 8; 57E CA;=758;? K:D =Q-@ D;=8G5;< 7:D O@PL ]"E 5E86"7DG CB84 7:D C"7 N8G# ";G N688G =D66 8C
-? $223)#$ 6"BJ"D N# BDJDBED 7B";E=B5F758; F86#4DB"ED =:"5; BD"=758;（IK/LMI）? K:D CB"<4D;7 =8;7"5;5;<
O@PL <D;D ]"E 5;EDB7DG 5;78 FR3S/.K/$ DHFBDEE5JD JD=78B，";G 7:D DHFBDEE58; ]"E 5;GA=DG N# +LKR ";G 7:D;
=:D=UDG? K:D BDEA67E E:8]DG 7:"7 O@PL 5; -? $223)#$ ]"E*11 NF 5; 6D;<7:（BD<5E7DBDG 5; RD;P";U ]57: 7:D
"==DEE58; ;8? QV$111.$），D;=8G5;<"FDF75GD8C2*$ "45;8"=5G BDE5GADE，";G 7:DFBDG5=7DG486D=A6"B]D5<:7
]"E 2’W% UQ? K:D O@PL ]"E CAEDG ]57: R,K? M:D=UDG ]57: ,Q,/L@R3，7:D FB8U"B#875= DHFBDEE58; FB8GA=7
486D=A6"B ]D5<:7 ]"E "N8A7 .2 UQ，";G 57 ]"E CAB7:DB =8;C5B4DG ]57: XDE7DB; N687?
9(- :#1.’：-.)+"’/.01$ $223)#$；C"77#/"=5G N5;G5;< FB87D5;（O@PL）；<D;D =68;5;<；ED^AD;=D ";"6#E5E；
FB8U"B#875= DHFBDEE58;
脂肪酸结合蛋白（C"77#/"=5G N5;G5;< FB87D5;， 酸的摄取与转运，在脂质代谢中起重要作用（,78B=:
O@PL）是一组多源性小分子细胞内蛋白质，相对分 ";G K:A4EDB，$%%%）。它在脂肪酸的生成过程中具有
子量大约为 2$ _ 20 UQ（‘:U"BA .# $)?，211’）。 重要的生物学功能，参与细胞内脂肪酸的运输，调整
‘=U;DB等（21&$）在研究大鼠小肠脂肪酸吸收的调节 细胞内脂肪酸的浓度，协助将脂肪酸运至进行 /氧
!
时，在肠粘膜上发现了脂肪酸结合蛋白，后来又发现 化的场所，以及甘油三酯和磷脂的合成部位
这种蛋白广泛存在于动物的心肌、小肠、肝脏、脂肪 （aDDBU"4F ";G !""74";，211’）。研究表明，脂肪酸
组织、脑和表皮中，已发现的脂肪酸结合蛋白包括心 结合蛋白与动物运动能力高度相关（唐量等，$%%’；
肌型（Z/O@PL）等共 1 种（J"; -5DA]D;:8JD; .# $)?， 胡红梅等，$%%’）。目前有关昆虫脂肪酸结合蛋白的
2110）。脂肪酸结合蛋白可结合许多配体，参与脂肪 研究较少，仅涉及美洲棉铃虫 -.)+"’/.01$ 4.$
基金项目：河南省杰出青年科研基金项目（%*2$%%2%%%）；河南省创新人才培养基金项目（$%%’$%%&）
作者简介：张涛，21&&年生，男，硕士，研究方向为昆虫分子生物学和毒理学，3/4"56：7"89:";<=;>:874"56?=84
!通讯作者@A7:8BC8B=8BBDEF8;GD;=D，3/4"56：H5;45;<#5;>:874"56?=84
收稿日期ID=D5JDG：$%%0/2%/*%；接受日期@==DF7DG：$%%&/%2/%’
:期 张 涛等：烟实夜蛾脂肪酸结合蛋白基因的克隆、序列分析与表达 :2*
（!"#$%&’’ !" #$(，)**+，据 ,-./）、非洲沙漠蝗 !"# 方法
%&’()"*&!+&# ,+!,#+(#（01 !" #$(，2332）、烟草天蛾 !"#"! 引物设计：根据 S"’.&’X 中美洲棉铃虫
-#./0&# )!1"#（."’’#’4 !" #$(，)**2）、黑腹果蝇 <=.>基因序列（登录号为 =<3@CCO9，!"#$%&’’ !"
2+*)*3’($# 4!$#.*,#)"!+（56&7$"68’ !" #$(，2332，据 #$(，)**+，据,-./）设计并由上海生物工程技术服
,-./）和家蚕 5*4671 4*+(（,#1 !" #$(，2339，据 务有 限 公 司 合 成 基 因 引 物。正 向 引 物：:W;
,-./）等，研究表明脂肪酸结合蛋白基因在动物中 =SS=E--=ESS-=EE-EEESS-==S;OW（下划线表示
存在一定的同源性。昆虫脂肪酸结合蛋白的功能与 5#4!!酶 切 位 点）；反 向 引 物：:W;=-E-S=S
体内脂类有关，而昆虫脂质无论在量上还是在质上 EE=SS--EESE=SE=E-ES;O（W 下划线表示 ;’*!酶
都有其资源研究和利用的特点（吴时敏和裘爱泳， 切位点）。
233:）。昆虫飞翔肌中的脂肪酸结合蛋白与人的 !; !"#"# 总D,=抽提：选取烟实夜蛾:龄幼虫，取:3
<=.> 相似，从氨基酸序列来看，人与东亚飞蝗 %4 脂肪体和血淋巴，用 E&P&D& 公司的 D,=#F8
8*&0)"# 4(,+#"*+(# 等价的碳平均方差为 3?@2 A D"&4"’6试剂按照说明书进行总D,=的提取。
（B&&6%&’ !" #$(，)**C）。 !"#"$ DE;>-D扩增：以提取的 D,=为模板，按照
烟实夜蛾 9!$(&*:!+3# #))0$"# 是一种世界性的烟 E&P&D&公司U’" 56"7 D,= >-D P#6说明书进行 DE;
草害虫，在我国除西藏外均有发生（辛海军等， >-D扩增。反应条件为:3J反转录O3 %#’；*CJ变
233:），在基因水平上研究该虫继而利用基因工程的 性2 %#’；接着进行O3个循环，循环条件为*CJ O3
成果研制害虫生理生化干扰剂是非常迫切的。对烟 F，:9J O3 F，@2J )%#’，最后@2J延伸)3%#’。扩增
实夜蛾的脂肪酸结合蛋白研究国内外尚未见报道。 完毕后，用)K的琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色后
本实验拟通过 DE;>-D 方法，扩增烟实夜蛾脂肪酸 拍照，并用凝胶回收试剂盒回收目的片段。
结合蛋白（!&FF;<=.>）基因 GH,=，并对其进行克隆、 !"#"% >-D产物的克隆、鉴定和序列测定：将回收
测序、表达和检测。 的>-D产物克隆到7BH)+;E载体，然后转化大肠杆
菌QB)3*，蓝白斑筛选，随机挑取一白色菌落，培养
! 材料和方法 后使用 E&P&D&公司质粒小样快速抽提试剂盒提取
质粒，用 5#4!!和 ;’*!双酶切方法，鉴定重组克
!"! 材料 隆 7BHY!&FF;<=.>，并委托 E&P&D&公司测序。
!"!"! 试虫：烟实夜蛾由河南农业大学植物保护 !"#"& 重组表达质粒的构建：经 ;’*!和 5#4!!
学院昆虫学系实验室单管饲养。饲养条件：温度 双酶切重组克隆 7BHY!&FF;<=.> 质粒，回收 C33 Z7
（2+I)）J，相对湿度 93K L+3K，光周期 )9MN+H。 大小的片段，与同样以 ;’*!和 5#4!!双酶切的
人工饲料由每) 333 4 含主要能量物质麦麸 ):3 4、 原核表达载体 7SRT;CE;2质粒连接。二者以ON)的
黄豆粉+3 4、酵母 O3 4、干酪素 C3 4、蔗糖 23 4与适 摩尔比混合，在 EC 连接酶的作用下于 )CJ连接过
量维生素和防腐剂共融于琼脂胶中制成。 夜。转化大肠杆菌 QB)3*，过夜培养后，提取质粒
!"!"# 菌种及质粒：7BH)+;E载体购自 E&P&D&公 H,=，用 ;’*!和 5#4!!双酶切鉴定阳性克隆，)K
司，大肠杆菌 QB)3*和 .M2)（HRO）、质粒 7SRT;CE;2 琼脂糖凝胶电泳观察分析，获得 !&FF;<=.> 与谷胱
均来自本实验室。 甘肽转移酶融合表达载体 7SRTY!&FF;<=.>。
!"!"$ 主要试剂及工具：总 D,=抽提试剂 D,=#F8 !"#"’ 诱导表达：将鉴定正确的重组表达质粒
D"&4"’6、用于DE;>-D的U’" 56"7 D,= >-D P#6、质粒 7SRTY!&FF;<=.> 转化大肠杆菌 .M2)，挑取阳性克
小样快速抽提试剂盒、EC H,=连接酶、限制性内切 隆接种于含)33 4Y%M氨苄青霉素 M.培养基，O@J
"
酶5#4!!和 ;’*!、标准蛋白质分子量等购自 过夜培养，将菌液以 )K比例接种于 O %M 同样 M.
E&P&D&公司，辣根过氧化物酶底物 H=. 以及鼠抗 培养基中，O@J培养 O [后加入诱导物异丙基;);硫
S5E单抗购自 ../公司，辣根过氧化物酶标记的羊 代; ;H;半乳糖苷（/>ES）至浓度为 3?: %%8$YM，O@J
#
抗鼠二抗购自华美生物工程公司，硝酸纤维素（,-） 培养C [后，取培养液离心收集菌体。用)33 M)\
"
膜购自 >V8%"4&公司，T;4&$、/>ES、丙烯酰胺和 ,，,W; >.5重悬菌体，加等体积的2\5H5;>=SR M8&]#’4 缓
甲叉双丙烯酰胺试剂由生工生物工程（上海）有限公 冲液（)33 %%8$YM7!9?+ EV#F;!-$，2K 巯基乙醇，CK
司生产，其他均为国产或进口分析纯试剂。 5H5，3?2K溴酚蓝，23K甘油）后剧烈振荡悬浮，煮沸
MA" 昆虫学报 *,-%./-#&#0#12,%32/2,% M"卷
!" #$%，离心后取上清液以备下步实验（张传溪， 用!"#!和$%&>!双酶切方法鉴定，一条带大小约
&""!）。 8"" 9:，另一条带大于&""" 9:，分别与>?00)@+4*基
!"#"$ ’(’)*+,- 和 ./01/2% 印迹分析：先进行 因和 :;(!<)3质粒载体的大小相符合。
’(’)*+,-，再将胶转移到硝酸纤维素膜上，然后用 #"# 序列测定和分析
封闭液过夜；接着结合鼠抗 ,’3 单抗，并洗脱；而 序列测定（图 !）分析表明，烟实夜蛾脂肪酸结
后结合辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗，并洗脱； 合蛋白基因 ’%(())*$+ 开放式阅读框全长 ABB 9:
最后置于(+4中显色，蒸馏水中终止显色反应（张 （,/%4?%C 登录号为 (D&BBB8&），编码 !A& 个氨基酸
传溪，&""!）。 残基，利用 *2E1*?2?#（F11:：==GGGH/I:?0JHKF=1EEL0=）计
算的分子量为!MN" C(，等电点为MN<A。
# 结果与分析 使用 7LO01?L .和,/%/PEK软件对烟实夜蛾与其
他哺乳动物及昆虫的脂肪酸结合蛋白氨基酸进行多
#"! 烟实夜蛾脂肪酸结合蛋白基因的扩增和克隆 重联配，结果（图&）表明：烟实夜蛾脂肪酸结合蛋白
将烟实夜蛾总56+经53)*75扩增的产物进行 基因与鳞翅目近缘种美洲棉铃虫 @+4*的同源性高
琼脂糖凝胶电泳分析。从分析结果可以看出，扩增 达BQR，与烟草天蛾和家蚕的同源性分别达到了
产物长度约 8"" 9:，与预期长度一致。将纯化的扩 8&R和8"R。与双翅目的果蝇、哺乳动物马和牛的
增片段与 :;(!<)3 载体连接，质粒 :;(=>?00)@+4* @+4*同源性为A&R，与人的 @+4*同源性为&SR。
图! ’%(())*$+基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列
@$TH ! 6OKL/E1$P/?%P?#$%E?K$P0/UO/%K/EV ’%(())*$+ T/%/
#"% 烟实夜蛾脂肪酸结合蛋白基因原核表达载体 Z*3,诱导下，可产生8! C(左右的特异蛋白质条带，
的构建 而经 Z*3, 诱导的含有 :,-W)83)& 的 4Y&!（(-A）工
经!"#!和$%&>!双酶切重组克隆 :;(=>?00) 程菌以及 4Y&（! (-A）则没有相应的特异条带（图 A：
@+4*质粒，回收8"" 9:大小的片段，与相同双酶切 +），说明表达产物是融合了&Q C( ,’3的目的蛋白。
的原核表达载体:,-W)83)&质粒连接。转化大肠杆 对表达产物与 ,’3 同时进行 ./01/2% 印迹分析，结
菌X;!"B，过夜培养后，提取质粒 (6+，再双酶切，电 果表明:,-W=>?00)@+4*蛋白条带和单 ,’3条带同
泳观察，得到8"" 9:大小目的片段，表明:,-W=>?00) 时与抗,’3抗体发生很强的交叉反应，表明融合蛋
@+4*原核表达载体构建成功。 白得到了表达且分子量大于单 ,’3，与预测结果一
#"& 烟实夜蛾脂肪酸结合蛋白基因在大肠杆菌中 致（图A：4）。
的表达与检测
含有 :,-W=>?00)@+4* 的 4Y&!（(-A）工程菌在
P期 张 涛等：烟实夜蛾脂肪酸结合蛋白基因的克隆、序列分析与表达 P@9
图! 不同物种脂肪酸结合蛋白基因氨基酸序列比对
"#$% ! &’#$()*(+,-.)#(,./#01*23*(/*1,--.++45./#06#(0#($78,+*#($*(*1-8,)0#--*8*(+17*/#*1
!% "##$%&"：烟实夜蛾 !’%()*+’,-" "##$%&"；!% .’"：美洲棉铃虫 !’%()*+’,-" .’"；/% #’0&"：烟草天蛾 /"12$)" #’0&"；3% 4*,(：家蚕
3*45604*,(；7%)"5"%%$#：马 78$$# )"5"%%$#；3% &"$,$#：牛 3*# &"$,$#；!% #"-(’1#：人 !*4* #"-(’1#；9% 4’%"1*:"#&’,：黑腹果蝇
9,*#*-;(%"4’%"1*:"#&’,。黑色代表9::;同源性 <=* 6’./> 8*78*1*(+1 9::; #0*(+#+4；灰色代表?:;同源性 <=* $8.4 8*78*1*(+1 ?:;
#0*(+#+4%
部分，既为昆虫的肌肉系统和生理反应提供必要的
能量，也是昆虫性信息素的前体物质，而且与昆虫的
抗寒性有关（雷朝亮和荣秀兰，!::@）。目前，国内罕
见关于昆虫脂肪酸结合蛋白的报道，所以昆虫学研
究者应该加强这方面的研究，以揭示其对于昆虫体
内脂肪酸的功能。
F*((#($ 等（9QQ!）采用 C射线或核磁共振技术
获得了脂肪酸结合蛋白的结构。而在对昆虫 "&FG
基因的研究中，又以蝗虫飞翔肌中 "&FG 基因居多
（K3 ’& "%%，!::!；R3/>* ’& "%%，!::S）。本研究运用
分子生物学实验技术克隆了 E.115"&FG 基因，并成
功在大肠杆菌中表达。
本研究采用 T<5GUT方法所获取的目的基因克
隆后可直接用于基因工程的表达，在不能确定 E.11
图@ 重组质粒7ABCDE.115"&FG在大肠杆菌中的表达 5"&FG是否含有内含子的情况下，采用T<5GUT方法
"#$% @ BH78*11#,(,-7ABCDE.115"&FG#( 7#);’,();(")*%( 特异性的扩增出 E.115"&FG抗原编码区基因序列，
&：9!; IJI5G&AB；F：K*1+*8(6’,+；L：蛋白质分子量标准G8,+*#(
所得到的片段可直接用于克隆表达，并已证明构建
),’*/3’.8M*#$=+).8>*8；9：诱导的7ABCDE.115"&FG表达菌全菌体
成功。近年来，先后有在大肠杆菌中表达其他物种
<=*+,+.’/*’’,- 7% )*%( 7ABCDE.115"&FG#(03/*064NG<A；!：诱导
的7ABC5O<5!表达菌全菌体 <=* +,+.’ /*’’ ,- 7% )*%( 7ABC5O<5! "&FG 的报道（I)#+= .(0 V,=(1,(，9Q??；I/=..7 ’&
#(03/*064NG<A；@：表达菌全菌体<=*+,+.’/*’’,-7% )*%(；O：E.115 "%%，9QQS）。为了获得足够量的蛋白用以进一步研
"&FG5AI<；P：AI<% 究，作者选用了简便、高效及生产成本低的原核表达
系统载体 7ABC5O<5!。其优点在于：表达产率高，
! 讨论 重组蛋白主要以可溶形式存在于胞质中，融合蛋白
的分离纯化简单易行。AI<融合蛋白作为大肠杆菌
已有研究表明，脂肪酸结合蛋白对其他物种在 中表达的蛋白，已被广泛应用，并多见报道（R#3 ’&
脂类摄取与转运中起重要作用。在昆虫的生活史 "%%，!::@；王弘#等，!::P）。利用 AI<融合蛋白沉
中，脂类具有重要作用，它是虫体细胞膜的重要组成 降技术可以检测蛋白质互作，AI<融合蛋白常被用
QU1 昆虫学报 4)"#?&"-<-$-21)#91&1)# Q2卷
于制备抗体，这些抗体可用于!"#$"%&印迹来研究蛋 中国农业出版社@ LSLTULU］
白质的互作（’()*%++, (&- ./##"00，1221）。本研究成 BH/ .^，]"&+‘(&7!%HID$ 5J，!%HID$ XJ，122U@ ’$%/?$/%"，).Y;
"Z3%"##H+& (&- 0H&,(I" )(33H&I +N $D" *%(H&7$F3" N($$F (?H-7*H&-H&I
功应用345678971表达载体表达出4’9融合蛋白并
3%+$"H&I"&"（/#=5P）N%+)E"*%(NH#D（>#&1-.!.1-）@ ?(.-5!#& ,-(.&#$
使用!"#$"%&印迹技术检测。分析和检测结果均表
-/01-)8!<1*".3，1P（2 8）：PLQTP1Q@
明与已报道的其他:;<=的理化性质基本一致。这 B/?,"C，cH(+V，‘(&J+"%,"%, K9，d""%,()3 XK，K()H0$+& X;，122A@
为进一步纯化融合蛋白及制备多克隆抗血清打下 :($$F7(?H-7*H&-H&I3%+$"H&N%+)$D"N0HID$)/#?0"+N @-)(*"#<12.#"-.1#：
基础。 "‘+0/$H+&(%F‘(%H($H+&# H& N($$F (?H- *H&-H&I@ 01-)8!<1*".3，8Q（12）：
烟实夜蛾与其他哺乳动物及昆虫 :;<=基因的 A1>ATAU2Q@
J(($)(&.4K，]"I(&+ J，‘(& J+"%,"%, K9<，‘(& J(%%"aHb, !X;，‘(&
同源性分析结果表明，只有以其为依据设计引物的
-"%K+%#$]X，’(??D"$$H&H XC，d""%,()3 XK，L>>8@ =%H)(%F #$%/?$/%"
美洲棉铃虫 :;<=的同源性较高，而与其他物种的
(&- *H&-H&I ?D(%(?$"%H#$H?# +N 0+?/#$ (&- D/)(& )/#?0" N($$F7(?H-7
同源性都不高。考虑到 :;<= 存在 > 种不同的类 *H&-H&I3%+$"H&@ ?(.-5!#&,-(.&#$-/01-)8!<1*".3，11L：S2LTSL2@
型，可能本研究克隆的 :;<= 基因与其他物种的不 \?,&"% .W，J(&&H&I X;，=+33"&D(/#"& .<，!H00H() WBK，L>P1@ ;
属于同一种类型。由此推测昆虫体内存在 :;<=的 *H&-H&I3%+$"H& N+% N($$F (?H- H& ?F$+#+0 +N H&$"#$H&(0 )/?+#(，0H‘"%，
)F+?(%-H/)(&-+$D"%$H##/"#@ 9)1!&)!，LPP：QATQS@
不同空间和时间表达。
\D,(%/V，;#(F()( W，_#DHH K，YH#DH)/%( ’，’/&(D(%( Y，9(&(,( 9，
由于 :;<= 在人类多种疾病（9/&?)(& !" #$@，
W(a()/%( W，L>>Q@ ]"‘"0+3)"&$ +N ( #(&-aH?D "&EF)"70H&,"-
122A）以及其他研究中有重要价值，如：家畜家禽
H))/&+#+%*"&$ (##(F N+% $D" -"$"%)H&($H+& +N D/)(& D"(%$ $F3" N($$F
（利用和调节脂肪）（姜延志和李学伟，122A）、寄生 (?H-7*H&-H&I 3%+$"H& H& 30(#)( (&- /%H&" *F /#H&I $a+ -HNN"%"&$
虫（从宿主获得其自身不能合成的长链脂肪酸及固 )+&+?0+&(0 (&$H*+-H"# #3"?HNH? N+% D/)(& D"(%$ N($$F (?H-7*H&-H&I
醇类物质）（B"" !" #$@，122A），且这方面的相关报道 3%+$"H&@ ,-(.&#$-/;<<(&-$-21)#$%!"8-’*，LPS：>>TLLL@
’()*%++,X，./##"00]!，1221@ J+0"?/0(%C0+&H&I：;B(*+%($+%FJ(&/(0@
颇多，并达到了相当的深度（CD)/%EFG#,(，122A），因
U%-"-@ <"HbH&I：’?H"&?"=%"##@ L8P8TL8SA@［萨姆布鲁克 X，拉
此可以将这些成果应用到昆虫 :;<= 的研究中，以
塞尔 ]!，1221@ 分子克隆实验指南@ 第U版@ 北京：科学出版
期获得较快的研究进展。 社@ L8P8TL8SA］
’?D((3:4，’3"?D$<，‘(&-"%d/##"4X，<+%?D"%#9，40($EX:，L>>A@ \&"7
参 考 文 献（!"#"$"%&"’）
#$"33/%HNH?($H+&+N%($D"(%$7$F3"N($$F(?H-7*H&-H&I3%+$"H&"Z3%"##"-H&
?*)8!.1)81# )-$1@ ,-(.&#$ -/ 78.-<#"-2.#583 0， 01-<!’1)#$
<"&&H&IJJ，’)H$D ;:，!"00# J;，K+0-"& KJ，L>>1@ C%F#$(00HE($H+&，
455$1)#"1-&*，AP>：ALTAP@
#$%/?$/%"-"$"%)H&($H+&(&-0"(#$7#M/(%"#%"NH&")"&$$+LOPQR%"#+0/$H+&
’)H$D ]<，X+D&#+& W’，L>SS@ ’H&I0"7#$"3 3/%HNH?($H+& +N 3+0F3"3$H-"#
+N$D"N($$F7(?H-7*H&-H&I3%+$"H&H#+0($"-N%+)%#&’()#*!+"#B@ ,-(.&#$
-/%-$!)($#.01-$-23，11S：12ST1L>@ "Z3%"##"-H& ?*)8!.1)81# )-$1 (# N/#H+&# aH$D I0/$($DH+&" ’7$%(&#N"%(#"@
CD)/%EFG#,(;，122A@ 9D" )/0$HI"&" N()H0F +N N($$F (?H-7*H&-H&I 3%+$"H&# 6!&!，A（P L）：ULT82@
（:;<=#）：:/&?$H+&，#$%/?$/%" (&- 3+0F)+%3DH#)@ ,-(.&#$ -/ 455$1!’ ’$+%?DX，9D/)#"%;5;，1222@ 9D"N($$F(?H-$%(&#3+%$N/&?$H+&+NN($$F(?H-
6!&!"1)*，8（P L）：U>T8S@ *H&-H&I3%+$"H&@ 01-)81<1)#!"01-583*1)#4)"#，L8S（A L）：1ST88@
K/KJ，6/K!，VH&IW，XHCY，BHV，6H"V，J(+VJ，122Q@ 5NN"?$#+N 9(&I B，9H(& ^X，6H+&I ^V，^D(&I Vc，122Q@ ’$/-F +N $D" I"&"#
(*"%+*H?"Z"%?H#"(&-%+#HI0H$(E+&"+&$D""Z3%"##H+&+N==;.!，4B[98 "Z3%"##H+&+N’C]71(&-<7:;<=H&$D")H?"*%(H&+N"Z"%?H#"7H&-/?"-
(&-:;<=#I"&"#H&Y\])H?"@ 781&!*!,-(.&#$-/95-."*%!’1)1&!，18 N($HI/" *F I"&"?DH3 ?]Y; )H?%+(%%(F@ 781&!*! ,-(.&#$ -/ 455$1!’
（L）：QQTQ>@［胡红梅，许豪文，应康，季朝能，李瑶，谢毅，毛 A83*1-$-23，1（L 1）：LUPTLU>@［唐量，田振军，熊正英，张英起，
裕民，122Q@ 有氧运动和罗格列酮对Y\]小鼠==;.!、4B[98和 122Q@ 应用基因芯片技术对疲劳性运动小鼠脑组织脂肪酸代谢
:;<=#基因表达的影响@ 中国运动医学杂志，1（8 L）：QQTQ>］ 相关基因表达的初步研究@ 中国应用生理学杂志，1L（1）：LUP
XH(&IV^，BH6!，122A@ J+0"?/0(%?0+&H&I(&-$H##/"7#3"?HNH?"Z3%"##H+&+N TLU>］
H&$"#$H&(07$F3" N($$F (?H- *H&-H&I 3%+$"H& H& 3+%?H&"@ 4)"# 6!&!"1)# 9/&?)(& 4，5%*(F 5，K+) 6，dH‘+ _]，C()3+# K，.H)) 5<，
91&1)#，U（U 1）：L1QTLU1@［姜延志，李学伟，122A@ 猪_7:;<=基 K+$()H#0HIH0 4’，122A@ ; I"&"$H? ‘(%H(&$ ($ $D" N($$F (?H-7*H&-H&I
因的分子克隆与组织特异性表达分析@ 遗传学报，UU（1）：L1Q 3%+$"H& #AB 0+?/# %"-/?"# $D" %H#, N+% DF3"%$%HI0F?"%H-")H(，$F3" 1
TLU1］ -H(*"$"#，(&- ?(%-H+‘(#?/0(% -H#"(#"@ A.-)!!’1&2* -/ "8! C#"1-&#$
B""X’，WH) _’，’+D& !J，B"" X，V+&I 9’，122A@ ; ]Y; ‘(??H&" 4)#’!<3-/9)1!&)!*，L2（U LS）：A>P2TA>PQ@
"&?+-H&I ( N($$F (?H-7*H&-H&I 3%+$"H& +N 7$-&-.)81* *1&!&*1* H&-/?"# ‘(&YH"/a"&D+‘"& :;，‘(& -"% d/##" 4X，40($E X:C，L>>A@ J")*%(&"7
3%+$"?$H‘" H))/&" %"#3+&#" H& ’3%(I/"7](a0"F %($#@ 9)#&’1&#:1#& (##+?H($"- (&- ?F$+30(#)H? N($$F (?H-7*H&-H&I 3%+$"H&@ @151’*，UL
,-(.&#$-/;<<(&-$-23，A（U U）：LA>TLPA@ （’/330@）：11UT11P@
B"HCB，.+&I 6B，122U@ 4"&"%(0 5&$+)+0+IF@ <"HbH&I：CDH&( ;I%H?/0$/%" d""%,()3 XK，J(($)(& .4KX，L>>Q@ CF$+30(#)H? N($$F (?H- *H&-H&I
=%"##@ LSLTULU@［雷朝亮，荣秀兰，122U@ 普通昆虫学@ 北京： 3%+$"H&#：$D"H%#$%/?$/%"(&-I"&"#@ A.-2.!**1&@151’D!*!#.)8，U（8 L）：
$期 张 涛等：烟实夜蛾脂肪酸结合蛋白基因的克隆、序列分析与表达 $AA
!"#$%& 究与开发，!（A !）：$%#$$］
’()*+,，’()*-.，/0(/1，12)*,/，3()+，45(6-，%77$& 89:;2<<06) /0)+,，’()*W，’()*X-，W?.P，/0(/T，%77$& 3526FF?;;2)F2()C
6=>6?<2@69:A=;(*>2)B()C:;2:(;(B06)6=:6DEFD6)(D()B0G6CE(*(0)<B >()(*2>2)B6=B52 :%-’+#8%"911&&0-*1& !%&*’+’2%&，（!）：Y%#YY&［辛
@69:A& !"#$"%&&’()’#*%+,(#-#$.，（!!）：%"#A7&［王弘#，王颖 海军，王刚，王开运，顾春波，夏晓明，%77$& 烟青虫的发生及
超，夏雪培，彭建霞，谭获，赵勇，%77$&小鼠@69:A片段的表达 防治& 农药，（!）：Y%#YY］
和多克隆抗体的制备& 中国生物工程杂志，（!!）：%"#A7］ 45()* ./，%77!& O)(DE<0< 6= P(F?D6V0;?< 16DE52C;0) W2)2 ()C 1;6B20)
’?H，.5()*’，I0FJ2;<K+(?)2;D()C ,，+0*63，+(?)2;D()C L+，%77%& X0)(<2，()C 89:;2<<06) 6=+?>() 8;EB5;6:602B0) W2)20) P(F?D6V0;?<K
.5(;(FB2;0M(B06)6= ( )2N =(BBE (F0C ;2<:6)<2 2D2>2)B B5(B F6)B;6D< B52 0)<2FBSE<B2>& P20Z0)*：+0*52;8C?F(B06)1;2<<& R"#!7A&［张传溪，
29:;2<<06) 6= B52 D6F?<B >?<FD2 @OP1 *2)2& /#-%+0-1" 1(2 3%--0-1" %77!& 昆虫杆状病毒:5、:J基因分析和人81[基因在杆状病毒K
)’#+,%4’&*".，%AQ：!"A#!R7& 昆虫系统中的表达& 北京：高等教育出版社& R"#!7A］
’?ST，H0?O-，%77$& U2V2D6:>2)B<6= =?)FB06)(D 0)<2FB D0:0C<()C 60D<&
51*0"1-!"#20+*6%&%1"+, 1(2 7%8%-#94%(*，!A（!）：$%#$$&［吴时 （责任编辑：黄玲巧）
敏，裘爱泳，%77$& 昆虫功能性脂质与油脂的开发& 天然产物研