Avaliação comparativa do efeito dos ácidos graxos oléico, palmítico e esteárico sobre ...

150 Pages·2013·4.02 MB·Portuguese

UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO
FACULDADE DE CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS
Programa de Pós-Graduação em Ciências dos Alimentos
Área de Nutrição Experimental

AVALIAÇÃO COMPARATIVA DO EFEITO DOS ÁCIDOS GRAXOS OLÉICO,
PALMÍTICO E ESTEÁRICO SOBRE BIOMARCADORES DO PROCESSO
ATEROSCLERÓTICO

Claudimar de Jesus Oliveira

Tese para obtenção do grau de
DOUTOR

Orientador: Prof. Tit. Jorge Mancini Filho

São Paulo
2013
UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO
FACULDADE DE CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS
Programa de Pós-Graduação em Ciências dos Alimentos
Área de Nutrição Experimental

AVALIAÇÃO COMPARATIVA DO EFEITO DOS ÁCIDOS GRAXOS OLÉICO,
PALMÍTICO E ESTEÁRICO SOBRE BIOMARCADORES DO PROCESSO
ATEROSCLERÓTICO

Versão corrigida da Tese conforme Resolução CoPGr 5890.
O original encontra-se disponível no Serviço de Pós-Graduação da FCF/USP.

Claudimar de Jesus Oliveira

Tese para obtenção do grau de
DOUTOR

Orientador: Prof. Tit. Jorge Mancini Filho

São Paulo
2013
Fi c ha C atal o g ráf i c a
El a bo r a d a p el a D i vi s ã o de Bi bl i ot ec a e
Do c u m e nt a çã o d o C onj unto d a s Quí m i c a s d a US P .

O l i v e i r a , C l a u d i m a r d e J e s u s
O 4 8 a v A v a l i a ç ã o c o m p a r a t i v a d o e f e i t o d o s á c i d o s g r a x o s
o l é i c o , p a l m í t i c o e e s t e á r i c o s o b r e b i o m a r c a d o r e s d o p r o c e s s o
a t e r o s c l e r ó t i c o / C l a u d i m a r d e J e s u s O l i v e i r a . - - S ã o P a u l o ,
2 0 1 3 .
1 3 2 p .

T e s e ( d o u t o r a d o ) - F a c u l d a d e d e C i ê n c i a s F a r m a c ê u t i c a s
d a U n i v e r s i d a d e d e S ã o P a u l o . D e p a r t a m e n t o d e A l i m e n t o s e
N u t r i ç ã o E x p e r i m e n t a l .
O r i e n t a d o r : M a n c i n i F i l h o , J o r g e

1 . N u t r i ç ã o e x p e r i m e n t a l : C i ê n c i a d o s a l i m e n t o s 2 .
A t e r o s c l e r o s e I . T . I I . M a n c i n i F i l h o , J o r g e , o r i e n t a d o r .

6 4 1 . 1 C D D
Claudimar de Jesus Oliveira

AVALIAÇÃO COMPARATIVA DO EFEITO DOS ÁCIDOS GRAXOS OLÉICO,
PALMÍTICO E ESTEÁRICO SOBRE BIOMARCADORES DO PROCESSO
ATEROSCLERÓTICO

Comissão Julgadora
da
Tese pra obtenção do grau de Doutor

Presidente

1º examinador

2º examinador

3º examinador

4º examinador

São Paulo, de de 2013.
I

A Deus, por toda força.
À minha amada família pelo apoio, amor, compreensão e exemplo de
dignidade, ética e tenacidade.
A Carlos Eduardo Wanderley, pelo amor e por tudo que é em minha vida.
Aos meus queridos amigos por sempre estarem ao meu lado, seja onde for.
II
AGRADECIMENTOS

Ao estimado Prof. Jorge Mancini Filho, pela orientação deste trabalho
com dedicação, paciência e muitos ensinamentos.
Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico
(CNPq), por fomentar a realização desta pesquisa.
À querida equipe do Laboratórito de Lípides, da qual faço parte, com
muito orgulho (Ana Mara, Eliane, Fernanda Shinagawa, Fernanda Santana,
Illana, Lucília e Rosângela) e Liliane Pires, Viviane, Cristiane Hermes, Paula
Garcia e Felipe Gomes, amigos sempre presentes.
Aos docentes que ministraram as disciplinas as quais cursei.
A todos os funcionários da Faculdade de Ciências Farmacêuticas.
A equipe do Biotério de Experimentação Animal.
Aos técnicos Camila Marinho, Alexandre (B.16), Nilton, Alexandre
Pimentel, Laila Santos, Tatiana Garofalo e Elias, não somente pelo apoio
técnico, mas pela amizade.
Às professoras Sílvia Cozzolino, Sílvia Berlanga, Dulcinéia Paes e Ana
Campa por sempre permitirem que possamos compartilhar de novas técnicas,
equipamentos e estrutura para a realização dos nossos trabalhos.
Ao Dr. Artemir Coelho por sua amizade e por compartilhar seus
conhecimentos.
À equipe orientada pela professora Dulcinéia Paes, principalmente Júlio,
Fernanda, Martina e Marcela.
À Universidade de São Paulo, por toda sua estrutura.
Meus sinceros agradecimentos!
III
SUMÁRIO
LISTA DE FIGURAS
LISTA DE TABELAS
LISTA DE ABREVIATURAS
RESUMO
ABSTRACT

1. INTRODUÇÃO................................................................................ 1
2. REVISÃO BIBLIOGRÁFICA............................................................. 7
2.1. Aterosclerose.......................................................................... 7
2.2. Moléculas de adesão ICAM-1, VCAM-1, CD-36 e quimiocina
12
MCP-1......................................................................................
2.3. Ácido oleico............................................................................ 22
2.4. Ácidos graxos saturados......................................................... 25
2.5. Metabolismo de ácidos graxos................................................ 30
2.6. Peroxidação lipídica e aterosclerose........................................ 42
2.7. Enzimas antioxidantes............................................................. 45

3. OBJETIVOS................................................................................... 50
3.1. Objetivo geral......................................................................... 50
3.2. Objetivos específicos.............................................................. 50

4. MATERIAL E MÉTODOS................................................................ 51
4.1. Ensaio biológico..................................................................... 51
4.2. Elaboração das dietas – tratamentos....................................... 52
4.3. Coeficiente de Eficácia Alimentar – CEA................................... 54
4.4. Lipidograma........................................................................... 54
4.5. Preparo dos tecidos hepático, cardíaco e cerebral................... 54
4.5.1. Fígado............................................................................. 54
4.5.2. Coração............................................................................. 55
4.5.3. Cérebro........................................................................... 55
4.6. Enzimas antioxidantes............................................................. 56
4.6.1. Atividade da Superóxido Dismutase.................................. 56
4.6.2. Atividade da Catalase....................................................... 57
4.7. Peroxidação lipídica do tecido hepático, cerebral e cardíaco.... 57
4.8. Determinação de proteína dos tecidos..................................... 58
4.9. Perfil de ácidos graxos dos tecidos e rações........................... 58
4.10 Extração, transcrição e amplificação do mRNA das moléculas
de adesão e quimiocina – ensaio Quantitative Real Time Poly-
merase Chain Reaction............................................................ 59
4.10.1. Extração de RNA do tecido cardíaco............................... 59
4.11. Estatística............................................................................. 62

5. RESULTADOS E DISCUSSÃO....................................................... 63
5.1. Perfil de ácidos graxos – rações............................................. 63
5.2. Coeficiente de Eficácia Alimentar (CEA)................................... 64
5.3. Resultados de HDL-c, LDL-c, colesterol total e TAG................. 65
5.4. Perfil lipídico do tecido hepático.............................................. 74
5.5. Perfil lipídico do tecido cardíaco............................................. 78
5.6. Peroxidação lipídica................................................................ 79
5.7. Atividade de enzimas antioxidantes......................................... 82
5.8. Biomarcadores ateroscleróticos – moléculas de adesão ICAM-1,
VCAM-1, CD-36 e quimiocina MCP-1 86
6. CONSIDERAÇÕES FINAIS............................................................. 94

7. CONCLUSÕES.............................................................................. 96

8. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS.................................................. 97

9. ANEXOS....................................................................................... 130
VI
LISTA DE FIGURAS

Figura 1. Resumo do processo aterosclerótico com migração,
diferenciação de monócitos, células musculares lisas e expressão de
moléculas de adesão......................................................................... 11
Figura 2. Vias para a produção e remoção de ERO´s pelas enzimas
SOD, CAT, GPx e GR.................................................................................. 48
Figura 3. Determinação da concentração sérica (média) de colesterol
HDL (mg/dL) em camundongos fêmeas alimentadas com ração
suplementada com tioleato, tripalmitato e triestearato por período de seis
semanas................................................................................................................. 66
Figura 4. Determinação da concentração sérica (média) de colesterol
LDL (mg/dL) em camundongos fêmeas alimentadas com ração
suplementada com tioleato, tripalmitato e triestearato por período de seis
semanas................................................................................................................. 69
Figura 5. Determinação da concentração sérica (média) de colesterol
total (mg/dL) em camundongos fêmeas alimentadas com ração
suplementada com tioleato, tripalmitato e triestearato por período de seis
semanas.................................................................................................................. 72
Figura 6. Determinação da concentração sérica (média) de triacilglicerol
(mg/dL) em camundongos fêmeas alimentadas com ração suplementada
com tioleato, tripalmitato e triestearato por período de seis semanas.... 73
Figura 7. Determinação da quantidade (média) de ácido linoleico
(g/100g), no tecido hepático de camundongos fêmeas alimentadas com
ração suplementada com tioleato, tripalmitato e triestearato por período
de seis semanas.................................................................................................... 75
Figura 8. Determinação da quantidade (média) de ácido palmítico
(g/100g), no tecido hepático de camundongos fêmeas alimentadas com
ração suplementada com tioleato, tripalmitato e triestearato por período
de seis semanas.................................................................................................... 76
Figura 9. Determinação da quantidade (média) de ácido palmítico (g/100g), no
tecido hepático de camundongos fêmeas alimentadas com raçã
suplementada com trioleato, tripalmitato e triestearato por período de seis
semanas.................................................................................................................... 76
Figura 10. Determinação da quantidade (média) de ácido oleico (g/100g)
no tecido hepático de camundongos fêmeas alimentadas com ração
78
suplementada com tioleato, tripalmitato e triestearato por período de seis