Arbeiten mit Membranproteinen

36 Pages·2010·2.65 MB·German

Arbeiten mit Membranproteinen
Rupert Abele
Überblick
• Solubilisierung
• Reinigung
• Liposomenpräparation
• Rekonstitution
Selbstorganisation von Detergenzien und Lipiden
(cid:190) Detergenz → Bildung von Mizellen (a)
(cid:190) Phospholipiden → Bildung von Lipiddoppelschichten (b) und Liposomen (c)
Einteilung von Detergenzien
• Ionische Detergenzien
hohe Solubilisationseffizienz
stark denaturierend
• Nichtionische Detergenzien
milde Detergenzien
kurze Kettenlängen (C -C ) führen oft zur
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Inaktivierung des Membranproteins
Einteilung von Detergenzien
• Gallensäuresalze
ionische Detergenzien mit starrem
steroidem Rückgrat bildet nierenförmige Aggregat
weniger inaktivierend als ionische Detergenzien
• Zwitterionische Detergenzien
Eigenschaften zwischen ionischen
und nicht ionischen Detergenzien
CHAPSO
Eigenschaften von Detergenzien
CMC (critical micellar concentration)
(cid:190) verringert sich mit Länge der Alkylkette
(cid:190) erhöht sich mit Anzahl der Doppelbindungen oder Verzweigungen
(cid:190) erhöht sich mit der Konzentration von Gegenionen von ionischen Detergenzien
Eigenschaften von Detergenzien
N (aggregation number)
(cid:190) Anzahl der monomeren Detergenzmoleküle in einer Mizelle
(cid:190) erhöht sich mit der Konzentration von Gegenionen von ionischen Detergenzien
CMT (critical micellar temperature)
(cid:190) Temperatur, bei der monomeres, kristallines und mizellenhaltiges Detergenz im
Gleichgewicht sind
(cid:190) Detergenzlösungen werden klar
Cloud point (Trübungspunkt)
(cid:190) Temperatur über der CMT, bei der nichtionische Detergenzien trübe werden
(cid:190) Phasentrennung in Detergenz reiche und –verarmte Phase
(eg. Triton X-114, 22 °C)
Faustregel
Eigenschaften von Detergenzien
Phasen der Solubilisierung