Aproximación a la determinación electroquímica del grado de metilación del ADN

317 Pages·2016·17.96 MB·Spanish

by  Ariadna Brotons Cuevas

APROXIMACIÓN A LA DETERMINACIÓN ELECTROQUÍMICA
DEL GRADO DE METILACIÓN DEL ADN

Ariadna Brotons Cuevas
Instituto Universitario de Electroquímica
APROXIMACIÓN A LA DETERMINACIÓN ELECTROQUÍMICA DEL GRADO DE 
METILACIÓN DEL ADN 
Ariadna Brotons Cuevas 
Tesis presentada para aspirar al grado de
Doctora por la Universidad de Alicante
Mención de Doctora
Doctorado en Electroquímica.
Ciencia y Tecnología
Dirigida por:
Dr. Jesús Iniesta Valcárcel Dr. José Solla Gullón Dr. Francisco J. Vidal Iglesias
Profesor titular del Investigador Doctor del Investigador Doctor del
Dpto. de Química Física de la Instituto de Electroquímica Instituto de Electroquímica
Universidad de Alicante de la Universidad de Alicante de la Universidad de Alicante

A la Madrina, por convertirme en una oveja (negra) de ciencias.
A mi padre, por inspirarme.

“De eso se trata, de coincidir con gente que te haga ver cosas que tu no ves.
Que te enseñen a ver con otros ojos”

Mario Benedetti
“Voy a vencer este cáncer,
o morir en el intento”

Michael Landon

A los que perdieron la lucha.
A mi madre, por ganarla.
A Bea, guerrera de mil batallas.

“No te rindas, aún estás a tiempo
de alcanzar y comenzar de nuevo,
aceptar tus sombras, enterrar tus miedos,
liberar el lastre, retomar el vuelo.

No te rindas que la vida es eso,
continuar el viaje,
perseguir tus sueños,
destrabar el tiempo,
correr los escombros y destapar el cielo.”

Mario Benedetti
En la vida y en la ciencia gana la colaboración a la competición, y en este trabajo hay
muchos granitos de arena aportados por mucha gente a la que tengo que dar las gracias. Si
he llegado hasta aquí ha sido con el apoyo de muchas personas que, en lo personal y en lo
académico, no han dejado que sucumbiera, ni tirara la toalla.
GRACIAS
Al Dr. Iniesta, por darme la oportunidad de hacer la Tesis. Este proyecto me ha ayudado a
levantarme por las mañanas con un objetivo. También por hacerme parte de “sus chicas” y
tener tanta paciencia conmigo.
Al Dr. Solla, por todas las explicaciones y todo el apoyo. Recuerdo aquel día en el que
entró en el zulo, me tocó el hombro y me dijo “Estoy orgulloso de ti”. Y que eso saliera del
exigente Solla, para mi tiene mucho valor.
Al Dr. Vidal, por todo. Me ha ayudado en cada paso y he aprendido muchísimo con él.
Tiene la virtud de saber explicar conceptos complicados para que una humilde bióloga
entienda cosas que nunca imaginó que existieran. Fui reacia a empezar con la parte
fundamental, pero es la que más he disfrutado y con la que más he aprendido. Mucho de
ello, gracias a él.
Al Dr. Montiel, por darme esta oportunidad y confiar en mí.
A Dolores, por presentarme a Jesús, por ser mi amiga y por ayudarme siempre.
A Rosi, compañera y amiga.
A Rubén, por cada piropo, cada chiste, cada risa.
A Juan Víctor, por cada abrazo.
A Ricardo, por cada mensaje de apoyo.
A Valentín por su amistad en estos últimos años.
Al Dr. Busó, siempre dispuesto a ayudar.
A Betzhy, Paula y Rubén Rizo, David, María, Carlos y Alfonso, Victoria, Fran, Omar,
Milena, Irene y Dean, por haber hecho esta etapa mucho más amena.
A las chicas de Jesús, porque esta tesis es un poco suya. A Leti, por las lecciones de
química básica, por ayudarme en todo, explicarme, acompañarme en el camino. A Naira,
por tanta ayuda que me ha prestado, por dar una bocanada de aire fresco al lab. A Elena,
mi bióloga favorita, por todo el tiempo que pasó con nosotras. A Miguel Ángel, “chica de
Jesús honorifica”, por su sentido del humor. A Naxo, apasionado por la bioelectroquímica,
siempre dispuesto a ayudar.
A María, no solo mi compañera, sino mi confidente, mi Pingu. A Ana B, por ser mi amiga,
mi amarilla. Me has enseñado, abrazado, llorado y reído conmigo... y por todo eso siempre
serás parte de mí.
A Hal, - ¿Cómo una conversación sobre la cocción excesiva de un huevo puede dar tanto
de si? - por enseñarme que hay que luchar para que nuestros sueños se hagan realidad.
Al Dr. Gamero,
Gracias por lo profesional,
Gracias por lo personal,
Quizás más lo primero que lo segundo,
Y también viceversa.
Gracias por cada lección, por el tiempo invertido en enseñarme, por cada noche en vela,
por cada abrazo, break, sesión de pelis, por cada hojaldre… Alonso, gracias por estar ahí...
¡Y que siga sonando la música!
A Bea, por ser mi amiga todos estos años. No se puede expresar con palabras toda la
gratitud que siento hacia ella por acompañarme en esta montaña rusa.
A mis compañeros de viaje, Carol, Aitor, Ángel y Laura. Sin ellos no habría sido capaz
de terminar la primera etapa. Dra. Egea, gracias por transmitir esa fuerza y positividad.
Siempre mi pequeña gran amiga.
A Mónica, Paz, Ana, Antonio, Sergio, Jana e Irene por suplir mis ausencias en la clínica.
A La Madrina, Paloma y Mar, siempre mis modelos. Sin ellas yo habría sido distinta.
Al Dr. Brotons, mi padre, de él heredé estas ganas de saber y seguir avanzando. ¡Va por
ti!
A Victoria, mi madre, por transmitirme esa fuerza y enseñarme que se puede hacer más de
una cosa a la vez.
A Augusto, mi “hermanito”, por hacerme sentir tan orgullosa.
Muchos han sido los que me han ayudado de una forma u otra. Espero no olvidarme de
nadie.

Y aquí estamos, 5 años después. Han sido años muy complicados. Lo que empezó como
un reto profesional: Siendo bióloga introducirme en el complicado mundo de la
electroquímica; se transformó en un reto personal: Sobrevivir sin dejar de disfrutar de la
vida… Continuar viviendo.
Índice

Índice I
ÍNDICE
SECCIÓN I .............................................................................................. 1
CAPÍTULO 1: INTRODUCCIÓN ........................................................ 3
CAPÍTULO 2: ASPECTOS BIOLÓGICOS FUNDAMENTALES ................ 7
Bases Nitrogenadas, Nucleósidos y Nucleótidos ........................................ 9
Bases Nitrogenadas ................................................................................. 9
Nucleósidos ........................................................................................... 16
Nucleótidos ........................................................................................... 19
Ácido Desoxirribonucleico (ADN) ............................................................. 23
Mutación frente a Modificación epigenética ............................................ 25
Epigenética .............................................................................................. 27
Metilación del ADN .................................................................................. 28
Metilación de la Citosina ....................................................................... 28
Metilación de la Guanina ...................................................................... 28
Consecuencias de las alteraciones epigenéticas ........................................ 32
Relación entre las alteraciones epigenéticas y el cáncer ...................... 32
Relación entre las alteraciones epigenéticas y las técnicas de
reproducción asistida ............................................................................ 36
CAPÍTULO 3: DETERMINACIÓN DE LA METILACIÓN DEL ADN. ...... 37
Determinación electroquímica de la metilación del ADN: Materiales de
carbono ................................................................................................... 40
Determinación electroquímica de la metilación del ADN: Oro .................. 41
CAPÍTULO 4: OBJETIVOS .............................................................. 51