F. M. E. Teixeira, A. B. C. R. Lima Análise da colonização da fauna de dípteros em ambiente aberto e fechado em carcaças de Oryctolagus cuniculus Franciellen Mouradian Emidio Teixeira¹; Ana Beatriz Carollo Rocha Lima1 ¹Curso de Ciências Biológicas. Universidade Paulista - UNIP, campus Jundiaí, Instituto de Ciências da Saúde. Avenida Armando Giassetti, 577 - Vila Hortolândia - Trevo Itu/Itatiba - Jundiaí – SP, CEP 13214- 525. Resumo: Os insetos da ordem díptera são muito utilizados para solução de crimes pela entomologia forense, dado que o seu ciclo de vida pode ser afetado por fatores bióticos e abióticos, e através da análise destes fatores é possível determinar o intervalo pós- morte (IPM). O presente estudo teve o objetivo de determinar a incidência e colonização de insetos necrófagos da ordem díptera nas carcaças em ambiente indoor e outdoor na região de Campo Limpo Paulista e Jarinú, e desta forma contribuir com informações que possam auxiliar em investigações forenses na região. Para isso, duas carcaças de coelho (Oryctolagus cuniculus) de médio porte (aproximadamente 2 kg) foram dispostas em local aberto e fechado, dentro de uma armadilha para coletar os dípteros. A coleta de dípteros maduros e imaturos nas carcaças foi realizada diariamente e os espécimes coletados foram fixados em álcool 70%. As amostras foram levadas ao laboratório Charles Darwin na Universidade Paulista – UNIP, campus Jundiaí, onde ocorreu o processo de triagem e identificação. O experimento teve duração de 18 dias, sendo que no ambiente interno houve a esqueletização da carcaça no décimo oitavo dia e no ambiente externo a esqueletização ocorreu em cinco dias. Foram identificadas dez espécies, sendo 5 da família Calliphoridae e 4 da família Fannidae. De acordo com a literatura, a colonização de famílias Calliphoridae e Fannidae ocorre principalmente na estação quente e na região sudoeste. Os resultados do presente estudo podem contribuir para futuras investigações forenses na região. Palavras-chave: Entomologia forense; Indoor; Outdoor. Analysis of the colonization and ecological succession of diptera fauna indoor and outdoor environment using Oryctolagus cuniculus carcasses Abstract: Insects of the order Diptera are widely used for the solution of crimes by forensic entomology, since their life cycle can be affected by biotic and abiotic factors, and through the analysis of these factors it is possible to determine the postmortem interval (PMI). This study aimed to determine the incidence and colonization of carrion insects of the order Diptera in carcasses in indoor and outdoor environment in the region of Campo Limpo Paulista and Jarinú, and thus contribute with information that may assist in forensic investigations in the region. For this, two medium-sized rabbit carcasses (Oryctolagus cuniculus) (approximately 2 kg) were arranged in an open and closed place, inside a trap to collect dipterans. The collection of mature and immature dipterans in the carcasses was performed daily and the specimens collected were fixed in 70% alcohol. Samples were taken to the laboratory Charles Darwin at Universidade Paulista - UNIP Jundiaí campus, where there was the process of screening and identification. The experiment had a duration of 18 days, and in the internal environment skeletonization of the carcass occurred on the eighteenth day and in the external environment skeletonization occurred in five days. Ten species were identified, UNISANTA Bioscience Vol. 8 nº 2 (2019) p. 163-172 Página 163 F. M. E. Teixeira, A. B. C. R. Lima 5 of the Calliphoridae family and 4 of the Fannidae family. According to the literature, the colonization of Calliphoridae and Fannidae families occurs mainly in the hot season and in the southwest region. The results of the present study may contribute to future forensic investigations in the region. Keywords: Forensic Entomology; Indoor; Outdoor. Introdução exemplares coletados com a bibliografia específica ou com exemplares A entomologia forense é a depositados em coleções, existentes na ciência que aplica o estudo de insetos e sua maioria em museus e universidades. sua colonização em procedimentos Estas coleções são subdivididas em (1) legais. Esta ciência divide-se em: (1) coleções de pesquisa, consideradas entomologia urbana, que estuda grandes coleções preservadas interações entre os insetos e o ambiente provenientes das várias regiões urbano; (2) entomologia de produtos zoogeográficas; (2) coleções de estocados, que estuda relações entre identificação, aquelas que servem de insetos e infestação de produtos apoio a rotina de identificação de estocados; e (3) entomologia médico- materiais para diversas finalidades e (3) legal, que estuda insetos úteis nas coleções de tipo, que reúnem investigações criminais¹. exemplares que auxiliam na descrição As pesquisas na área de das espécies encontradas². entomologia médico-legal são A colonização cadavérica ocorre realizadas desde 1850, e nas últimas por meio da sucessão ecológica de décadas vem obtendo grande progresso. diversas ordens de insetos que chegam No início havia uma certa resistência no cadáver em seus diferentes estágios quanto à sua aplicação, mas com o de decomposição (legiões). Existem passar do tempo ela foi sendo aceita, e oito ondas de legiões durante todo o hoje traz grandes avanços nas processo, sendo que na primeira e investigações, apesar de ser utilizada segunda legião são encontrados somente por poucas instituições criminais². dípteros, já na terceira até a oitava são A metodologia mais usada em encontrados coleópteros. As ordens entomologia forense é a determinação cronológicas dessas legiões ocorrem de do IPM (intervalo pós-morte). Os acordo com fatores abióticos e bióticos4. estudos para determinar o IPM se Barros et al.5 e Pantaleão et al.6 utilizam da determinação da idade das afirmam que a família Sarcophagidae é larvas ou pupas de diferentes espécies pioneira na colonização dos cadáveres, coletadas no local da morte. O IPM é por proliferar em estações mais frias, calculado de acordo com a temperatura enquanto a família Calliphoridae prefere local, características do ambiente, os estágios iniciais de decomposição. condições bióticas e sucessão das A colonização ocorre logo após espécies colonizadoras. Cada fator a morte caso a carcaça esteja em acarreta em um intervalo post-mortem temperatura ambiente. As espécies diferente³. colonizadoras podem ser classificadas Para que especialistas consigam de acordo com sua disposição realizar investigações forenses para fins ecológica7 em (1) necrófagas, que além de determinação de IPM, é necessário de se alimentar diretamente dos tecidos que os pesquisadores identifiquem as da carcaça, também a utilizam como um larvas ou pupas comparando os substrato de criação; (2) parasitoides UNISANTA Bioscience Vol. 8 nº 2 (2019) p. 163-172 Página 164 F. M. E. Teixeira, A. B. C. R. Lima e/ou predadoras das espécies O objetivo geral do presente necrófagas, espécies onívoras que se estudo foi determinar a incidência e alimentam de mais de um tipo de colonização de insetos necrófagos da matéria orgânica; e (3) espécies que ordem Diptera em carcaças na região visitam a carcaça em busca de refúgio das cidades de Jarinú e Campo Limpo ou por ser um microambiente propício Paulista, situadas no interior do estado para a postura dos ovos ou imaturos, de São Paulo (Brasil), e verificar as com temperatura e umidade elevadas e alterações em diferentes condições com uma quantidade de matéria experimentais, e dessa forma auxiliar orgânica suficiente para suprir a em futuros estudos na região sobre necessidade por recursos pelos colonização e sucessão ecológica. Os imaturos8. objetivos específicos foram: verificar a De acordo com Bornemissza9 e incidência e colonização dos adultos; Payne10, as espécies de dípteros comparar a colonização indoor e necrófagos pertencentes à família outdoor; auxiliar em futuros estudos Calliphoridae desempenham importante sobre colonização e sucessão ecológica. papel ecológico, pois auxiliam na decomposição da matéria orgânica e na Materiais e métodos ciclagem de nutrientes. Considerando-se A etapa de campo (disposição as fases de decomposição de uma das cobaias) foi realizada em uma carcaça animal e a composição das chácara de propriedade particular, espécies visitantes, possivelmente pode- situada entre as cidades de Campo se estimar uma sequência de Limpo Paulista e Jarinu no km 60 da colonização dos insetos nas carcaças. rodovia Edgar Máximo Zamboto, na Alguns gêneros dessa família são Via São Francisco,120, Estância São abundantes durante o processo de Paulo, Campo Limpo Paulista - SP decomposição, podendo ocorrer (coordenadas -23.200047, -46.731863). alterações sucessivas entre estes. A pesquisa foi feita em dois locais da chácara: um cômodo de alvenaria Objetivos externo desabilitada pelos moradores, e um campo perto de um lago (Figura 1). Figura 1. Locais onde foram dispostas as carcaças: (A) cômodo em alvenaria e (B) campo aberto. Fonte: Adaptado de Google Earth. UNISANTA Bioscience Vol. 8 nº 2 (2019) p. 163-172 Página 165 F. M. E. Teixeira, A. B. C. R. Lima Foram utilizados dois coelhos de Ética lei 11.794/2008, que permite a 6 meses de vida, cada um pesando 1.5 utilização de carcaças de animais, kg (Família Leporidae, espécie órgãos etc. comprados em frigorífico, Oryctolagus cuniculus) dispostas no não devendo osmesmos serem local do experimento em duas situações, submetidos à CEUA. uma em local abrigado (cômodo em Para a confecção da armadilha alvenaria - indoor), e outra em local foram utilizados os seguintes materiais: exposto (no ambiente - outdoor). caixa de verduras, garrafa pet 2L, Ambos foram comprados no dia 24 de arame, pano de algodão e tela escaline. janeiro de 2018, já abatidos por A caixa de verdura foi invertida para traumatismo craniano com objeto servir de base para a armadilha. A contundente e sem exsanguinação em estrutura foi construída em forma de estabelecimento comercial (criadouro pirâmide com arames e tela escaline, de coelhos para consumo alimentício com uma armadilha para coletar os caseiro). No mesmo dia as carcaças dípteros na parte superior feita de foram dispostas nos locais em que garrafa pet invertida. Em volta da caixa ocorreu o experimento. A aquisição das de verdura, foi colocado pano de carcaças foi realizada conforme algodão para que os dípteros não instruções fornecidas pelo Comitê de pudessem sair por lá (Figura 2). Figura 2. Armadilhas de coleta de dípteros adultos dispostas nos locais fechado (A) e aberto (B). Fonte: Do autor. UNISANTA Bioscience Vol. 8 nº 2 (2019) p. 163-172 Página 166 F. M. E. Teixeira, A. B. C. R. Lima As carcaças foram avaliadas e Os espécimes adultos foram monitoradas a cada três dias e no identificados a partir de seus caracteres mesmo horário quanto à presença de taxonômicos (características ovos, larvas e dípteros adultos, e a morfológicas) com o auxílio de chaves temperatura do ambiente foi aferida. de identificação e a partir da Para a coleta dos imaturos e adultos de comparação com os espécimes dípteros nas carcaças foram utilizados identificados na literatura em os seguintes materiais: pinça para experimentos semelhantes. Os coletar as larvas, álcool etílico hidratado parâmetros utilizados para identificação 70° INPM para conservar as amostras, das famílias foi baseado nos seguintes álcool em gel para captura dos dípteros aspectos morfológicos: olhos na armadilha e potes plásticos para compostos, aristas, apêndices, coloração armazenar as coletas. e formato das asas, mesonoto, tergito e esternito (Figura 3). Figura 3. Díptero adulto (família Calliphoridae), destacando-se os caracteres morfológicos utilizados para a identificação taxonômica. Fonte: Do autor. Os espécimes foram preservados em álcool 70% e posteriormente Resultados analisados em lupas para melhor visualização dos caracteres A carcaça disposta em local taxonômicos. fechado (indoor) levou dezoito dias para atingir a esqueletização, enquanto a A identificação taxonômica foi carcaça disposta em local aberto realizada nas dependências da (outdoor) levou cinco dias (Figura 4). Universidade Paulista - UNIP, campus Foi possível observar que a massa larval Jundiaí, no Laboratório Museu Darwin. outdoor foi bem maior do que indoor. UNISANTA Bioscience Vol. 8 nº 2 (2019) p. 163-172 Página 167 F. M. E. Teixeira, A. B. C. R. Lima Figura 4. Representação dos estágios de decomposição das carcaças em local fechado (A) e aberto (B) em diferentes períodos do experimento. Fonte: Do autor. Os dados referentes à presença da verificação da temperatura do de ovos, larvas e dípteros adultos, além ambiente encontram-se na Tabela 1. UNISANTA Bioscience Vol. 8 nº 2 (2019) p. 163-172 Página 168 F. M. E. Teixeira, A. B. C. R. Lima Tabela 1. Características do processo de colonização Data Experimento Características Ambiente Ambiente (dia) Aberto Fechado 24/01/2018 Presença ovo - - (Dia 1) Presença larva - - Presença adulto - - Temperatura ambiente 26°C 26°C 27/01/2018 Presença ovo X - (Dia 4) Presença larva X X Presença adulto X X Temperatura ambiente 20°C 23°C 30/01/2018 Presença ovo - - (Dia 7) Presença larva - X Presença adulto - X Temperatura ambiente - 24°C 02/02/2018 Presença ovo - (Dia 10) Presença larva - X Presença adulto - - Temperatura ambiente - 23°C 05/02/2018 Presença ovo - - (Dia 13) Presença larva - X Presença adulto - - Temperatura ambiente - 24°C 08/02/2018 Presença ovo - - (Dia 16) Presença larva - X Presença adulto - - Temperatura ambiente - 22°C 10/02/2018 Presença ovo - - (Dia 18) Presença larva - X Presença adulto - - Temperatura ambiente - 24°C Houve diferença na colonização espécies e famílias encontradas em cada entre os ambientes indoor e outdoor. As ambiente estão descritas na Tabela 2. Tabela 2. Identificação taxonômica das espécies Família Espécie Ambiente Ambiente Aberto Fechado Calliphoridae Lucilia spp x Lucilia versicolor x Lucilia sericata x x Calliphora lopesi x Paralucilia fulvinota x Fannidae Fannia canicularis x Fannia punctipennis x Fannia obscurinervis x Fannia pusio x Muscidae Spp. não identificada x UNISANTA Bioscience Vol. 8 nº 2 (2019) p. 163-172 Página 169 F. M. E. Teixeira, A. B. C. R. Lima Discussão colaboradores 13 na região de Atibaia encontrou Fannia cannicularis, F. No presente estudo ocorreu uma pusio, e Lucilia sericata. Já Moura e diferença em relação ao tempo de colaboradores14,15 descreveram em decomposição nos ambientes indoor e carcaças de ratos (Rattus outdoor. Em ambiente fechado, o norvergicus) o aparecimento de processo de decomposição espécies como F. punctipennis e F possivelmente ocorreu de forma mais obscurinervis na região de Curitiba, lenta pelo fato de a carcaça estar Paraná. As mesmas espécies também disposta em local que dificultou o foram identificadas no presente acesso dos dípteros, insetos necrófagos estudo. que contribuem significativamente para Não foi possível comparar a que este processo ocorra. O fato de a quantidade de indivíduos de cada massa larval outdoor ter sido maior do família nos locais indoor e outdoor, que indoor reforça esta hipótese; além pois alguns indivíduos apresentaram disso, apenas duas espécies ocorreram danificação em estruturas necessárias em local indoor, o que evidencia a para sua identificação taxonômica no dificuldade que esses dípteros têm para nível de família e espécie e, portanto, chegar até a carcaça, enquanto em local foram excluídos do estudo. outdoor ocorreram nove espécies. Em Ordens de insetos como estudos semelhantes envolvendo Coleoptera e Hymenoptera, ambientes indoor e outdoor, a consideradas espécies oportunistas, colonização de fauna foi semelhante em também foram excluídas do presente relação ao número de espécies, porém, estudo. Embora este parâmetro assim como no presente estudo, houve contribua para as análises de diferença em relação à abundância de decomposição, o mesmo não foi espécimes que se criaram na carcaça: adotado no presente estudo pelo fato em ambiente indoor houve maior de o aparecimento dos coleópteras abundância da família Calliphoridae, ser tardio nas carcaças. O presente enquanto em ambiente outdoor a estudo também não acompanhou o família Muscidae foi mais abundante11. processo de desenvolvimento de A ocorrência de dípteros ovos, larvas e pupas até o adultos em local indoor ocorreu a desenvolvimento de dípteros adultos, partir do quarto dia. Este dado embora estes poderiam contribuir corrobora com um estudo feito no para o cálculo de IPM em futuras sudoeste da Finlândia, no qual o investigações forenses e na eventual aparecimento tardio de adultos em identificação de espécies adicionais. local fechado e em número menor de Portanto, sugere-se que estudos indivíduos levou cerca de quatro posteriores realizem investigações dias, devido aos fatores abióticos complementares sobre a fauna dificultarem sua chegada até a associada de coleópteros e disposição da carcaça12. himenópteros, bem como realize o As famílias Calliphoridae e cultivo dos ovos e larvas de dípteros Fannidae são comumente encontrados nas carcaças na região. encontradas por serem famílias necrófagas. As espécies catalogadas Conclusão no presente estudo já foram relatadas em estudos semelhantes. Um estudo O experimento teve duração de realizado por Baltazar e 18 dias, sendo que no ambiente interno UNISANTA Bioscience Vol. 8 nº 2 (2019) p. 163-172 Página 170 F. M. E. Teixeira, A. B. C. R. Lima houve a esqueletização da carcaça no Cerrado do Distrito Federal, Brasil. décimo oitavo dia e no ambiente Revista Brasileira de Entomologia. externo a esqueletização ocorreu em 2008, 52(4), 606-609. cinco dias. Foram identificadas dez 6- Pantaleão, A. C. V., Silva, J. B., espécies no total, sendo 5 da família Pereira, S. S., & Silva, V. Fauna Calliphoridae e 4 da família Fannidae. cadavérica coletada em 3 biocenoses No presente estudo houve uma para aplicação em entomologia diferença em relação ao tempo de forense- [Dissertação de decomposição nos ambientes indoor e Graduação]. Ourinhos: Faculdades outdoor possivelmente devido à Integradas de Ourinhos; 2005. diferença entre os fatores bióticos e 7- De Carvalho, L. M. L., & Linhares, abióticos em cada um dos ambientes, o A. X. Seasonality of insect que contribui para que o processo de succession and pig carcass decomposição ocorra de uma forma decomposition in a natural forest mais lenta ou mais rápida. Também area in southeastern Brazil. Journal houve diferença na quantidade de of Forensic Science. 2001; 46(3), espécies nos ambientes indoor e 604-608. outdoor. 8- Anjos, V. A. Ocorrência de Os resultados do presente estudo muscóideos necrófagos em carcaças podem contribuir para futuras de animais silvestres no município investigações forenses na região. de Capão do Leão [trabalho de conclusão de curso]. Rio Grande do Referências Sul (RS): Instituto de Biologia – Universidade Federal de Pelotas, 1- Gomes, L. Entomologia Forense: Pelotas; 2009. novas tendências e tecnologias 9- Bornemissza, G. F. An analysis of nas ciências criminais. Rio de Arthropod succession in Carrion and Janeiro (RJ): Technical Books the effect of its decomposition on Editora; 2010. the soil fauna. Australian Journal of 2- Oliveira-Costa, J. Entomologia Zoology. 1957; 5(1), 1-12. forense: quando os insetos são os 10- Payne, J. A., & King, E. W. Insect vestígios. 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Indoors forensic (Insecta, Diptera) associados à entomology: colonization of human decomposição de carcaças de Sus remains in closed environments by scrofa Linnaeus (Suidae) em área de specific species of UNISANTA Bioscience Vol. 8 nº 2 (2019) p. 163-172 Página 171 F. M. E. Teixeira, A. B. C. R. Lima sarcosaprophagous flies. Forensic preliminary analysis of insects of Science International 199. 2010; (1- medico-legal importance in 3): 38-42. Curitiba, state of Paraná. Memórias 13- Baltazar, F. N., Cavallari, M. L., do Instituto Oswaldo Cruz. 1997; Avelar, R. R. F., Kobori, R., Muñoz, 92: 269-274. D. R. & Tolezano, J. E. 15- Moura, M. O., Carvalho, C. J. B., & Caracterização da entomofauna Monteiro-Filho, E. L. A. Estrutura cadavérica em região central do de comunidades necrófagas: efeito município de São Paulo. Boletim da partilha de recursos na Instituto Adolfo Lutz. 2012; diversidade. Revista Brasileira de 22(1):60-62. Zoologia. 2005; 22: 1134-1140. 14- Moura, M. O., Carvalho, C. J. 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