! Ana Raquel Pinho Freitas ECOLOGY AND EVOLUTION OF ANTIMICROBIAL RESISTANCE IN ENTEROCOCCUS: A MULTILAYERED MOLECULAR APPROACH WITH EMPHASIS IN THE PLASMID DIVERSITY Tese do 3.º Ciclo de Estudos Conducente ao Grau de Doutoramento em Ciências Farmacêuticas na Especialidade de Microbiologia Tutors: Doutora María Teresa Coque Professora Doutora Luísa Vieira Peixe Servicio de Microbiología, Faculdade de Farmácia Instituto Ramón y Cajal de Investigación Universidade do Porto, Portugal Sanitaria (IRYCIS), Madrid, Spain April 2011 DE ACORDO COM A LEGISLAÇÃO EM VIGOR, NÃO É PERMITIDA A REPRODUÇÃO DE QUALQUER PARTE DESTA TESE. Ecology and evolution of antimicrobial resistance in Enterococcus: a multilayered molecular approach with emphasis in the plasmid diversity This work was financially supported by research grants from: • Fundação para a Ciência e a Tecnologia, Ministério da Ciência, Tecnologia e Ensino Superior of Portugal (fellowship SFRH/BD/24604/2005) (Research Scientific Projects POCI/AMB/61814/2004 and POCI/SAL/61385/2004) • European Union. Sixth Framework Programme – Approaches to control multi- resistant enterococci (ACE-LSHE-2007-037410) • Ministry of Science and Innovation from Spain (PI 07/1441, PS09/02381) • Ministerio de Educación y Ciencia of Spain, Programa Acciones Integradas Hispano-Portuguesas (H2004-0092) • Fondo de Investigaciones Sanitarias, Ministry of Health of Spain (PI 06/1141) Ao Bruno Aos meus pais e ao meu irmão Agradecimentos (Acknowledgements) Às minhas orientadoras, Dra. Teresa Coque e Prof. Doutora Luísa Peixe, que me iniciaram nesta viagem cientifica, quero expressar o meu sincero e profundo agradecimento pela oportunidade de integrar a vossa equipa de trabalho quando as solicitei e a confiança depositada desde o início. Pela orientação cientifica, pela revisão critica e aprendizagem constante, pela disponibilidade e amizade incansáveis, bem como pelas palavras de reconhecimento carinhosamente dirigidas, fonte de renovado estímulo para a concretização desta tese. Muito obrigada por esta oportunidade que seguramente marcará o meu percurso profissional e pessoal. À Prof. Doutora São José Nascimento, pela oportunidade de realizar este trabalho no Laboratório de Microbiologia da Faculdade de Farmácia da Universidade do Porto. A todos os Prof. Doutores do Serviço de Microbiologia, quero agradecer a simpatia com que me receberam e a disponibilidade demonstrada. À Cristina Costa e ao Nuno Oliveira, colaboradores essenciais no dia a dia do Laboratório de Microbiologia, agradeço o apoio e incentivo ao longo deste percurso. Obrigada pela companhia, pelo bom humor e pela prontidão em ajudar! À companheira de equipa no mundo dos coconuts, Carla Novais, quero registar e agradecer de forma especial todo o apoio demonstrado desde o primeiro dia. Pela disponibilidade, pelo que aprendi durante a nossa convivência, pelos desabafos nos momentos mais difíceis, mas também pelos muitos bons momentos e risadas dos últimos anos. Obrigada por estares presente em fases cruciais deste trabalho. À Patrícia Antunes, Sandra Quinteira e Filipa Grosso, companheiras assíduas dos últimos anos, agradeço o carinho com que me receberam, a partilha de conhecimentos, a amizade e incentivo sempre presentes dentro e fora do laboratório, as animadas aventuras dos congressos internacionais! Ficarão para sempre na minha memória os bons momentos que passamos. Ao Jorge Oliveira, pela ajuda crucial em momentos importantes, pela paciência infinita em ensinar os avanços da informática que tento acompanhar, pela amizade e apoio constantes. À Elisabete Machado, que sempre me apoiou nesta caminhada com palavras de alento e motivação mesmo à distancia. ! vii! Aos membros mais recentes Eduarda Silveira e Raquel Branquinho, agradeço o apoio e ajuda sempre presentes. Ao Dr. Fernando Baquero, por me ter recebido sempre de forma amistosa nas muitas estadias no Serviço de Microbiologia do Hospital Ramón y Cajal de Madrid, pela oportunidade de integrar a sua equipa de investigação nomeadamente em projectos internacionais, pelo incentivo e apoio em diferente etapas. Será sempre para mim uma referência tanto a nível profissional como pessoal. Ao Prof. Doutor Rafael Cantón e a todos os membros do Serviço de Microbiologia do Hospital Ramón y Cajal, agradeço a forma carinhosa com que sempre me receberam e o apoio constante. A todos os companheiros das aventuras internacionais, em especial à Tânia, Aida, Arancha, Carmen, Maria, Marta, Elia e Manu, que sempre me fizeram sentir em casa. À Ana Sofia Tedim e Patricia Ruiz-Garbajosa, pela colaboração activa em muitos trabalhos, pelo apoio e entreajuda constantes. Uma menção especial à amiga de longa data Ângela Novais que foi essencial na minha integração no laboratório mas também no quotidiano das estadias em Madrid, obrigada pelos bons momentos que aí passamos, pelo apoio e amizade inesgotáveis! A investigadores de outros países com os quais convivi em reuniões de trabalho, Vicky Francia, Guido Werner, Jenny Laverde, Rob Willems, Lars Jensen, Anette Hammerum e Camila Lester, obrigada pela oportunidade de partilhar conhecimentos científicos e pela simpatia com que sempre me trataram. A todos os alunos de Mestrado Integrado em Ciências Farmacêuticas da Faculdade de Farmácia do Porto, Rosa Silva, Rosa Correia, Márcia Monteiro, João Pires e Ana Cunha, que comigo colaboraram. A todos os familiares e amigos (os mesmos de sempre e de longos anos) que me apoiaram e compreenderam a minha ausência em momentos importantes. À Fundação para a Ciência e Tecnologia, agradeço o apoio financeiro concedido ao longo de quatro anos de investigação bem como ajudas de custo para estadias e congressos no estrangeiro. ! viii! Por último, mas com um lugar muito especial neste capitulo da minha vida, agradeço à minha família. No Bruno, nos meus pais e irmão, reconheço a força motriz que me permitiu iniciar e encerrar este projecto. Não há palavras para expressar o apoio incondicional que esteve sempre presente e que de forma discreta, mas decisiva, contribuiu para este sucesso. Ainda à Mariana que já mostra vida dentro de mim e que me alentou nesta recta final. Para vocês, o meu mais sincero e profundo obrigada. Um trabalho de investigação nunca é um trabalho solitário, mas sim a confluência do esforço e dedicação de muitos. A todos que de alguma forma contribuíram para este projecto nos últimos anos, um muito OBRIGADA! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! “Como todas as coisas contribuíram para o seu crescimento, você deveria incluir todas as coisas em seu agradecimento.” (Wallace Wattles, 1860-1911)! ! ix!
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