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ALEXANDRA ROSA DA SILVA Análise da cinética de replicação do parvovírus canino em cultivo de células CRFK através da PCR em tempo real São Paulo 2011 ALEXANDRA ROSA DA SILVA Análise da cinética de replicação do parvovírus canino em cultivo de células CRFK através da PCR em tempo real Dissertação apresentada ao Programa de Pós- Graduação em Epidemiologia Experimental Aplicada ás Zoonoses da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo para obtenção do título de Mestre em Ciências Departamento: Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal Área de concentração: Epidemiologia Experimental Aplicada às Zoonoses Orientador: Prof. Dr. Leonardo José Richtzenhain São Paulo 2011 Autorizo a reprodução parcial ou total desta obra, para fins acadêmicos, desde que citada a fonte. DADOS INTERNACIONAIS DE CATALOGAÇÃO-NA-PUBLICAÇÃO (Biblioteca Virginie Buff D’Ápice da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo) T.2497 Silva, Alexandra Rosa da FMVZ Evaluation of the replication kinetic of canine parvovirus in CRFK cell culture using real-time PCR / Alexandra Rosa da Silva. -- 2011. 106 f. : il. Dissertação (Mestrado) - Universidade de São Paulo. Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal, São Paulo, 2011. Programa de Pós-Graduação: Epidemiologia Experimental Aplicada às Zoonoses. Área de concentração: Epidemiologia Experimental Aplicada às Zoonoses. Orientador: Prof. Dr. Leonardo José Richtzenhain. 1. Parvovírus canino. 2. PCR. 3. Sequenciamento. 4. PCR- tempo real. 5. Replicação em cultivo celular. I. Título. ERRATA SILVA, A. R. Análise da cinética de replicação do parvovírus canino em cultivo de células CRFK através da PCR em tempo real. 2011. 106 f. Dissertação(Mestrado) – Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, São Paulo, 2011. Página Parágrafo Onde se lê Leia-se Ficha 2º Evaluation of the replication Análise da cinética de replicação do parvovírus canino catalográfica kinetic of canine parvovirus in em cultivo de células CRFK através da PCR em tempo CRFK cell culture using real- real time PCR FOLHA DE AVALIAÇÃO Nome: SILVA, Alexandra Rosa da Título: Análise da cinética de replicação do parvovírus canino em cultivo de células CRFK através da PCR em tempo real. Dissertação apresentada ao Programa de Pós- Graduação em Epidemiologia Experimental Aplicada às Zoonoses da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo para obtenção do título de Mestre em Ciências Data:____/____/____ Banca Examinadora Prof. Dr. ____________________________Instituição: __________________ Assinatura: _________________________Julgamento: __________________ Prof. Dr. ___________________________ Instituição: ___________________ Assinatura:_________________________ Julgamento: __________________ Prof. Dr. ___________________________ Instituição: ___________________ Assinatura:_________________________Julgamento:_________________ Dedicatória Dedico esse trabalho aos queridos pais João, Sebastiana e Cristino, ao meu príncipe José Flaviano e aos cães, os grandes amores da minha vida. AGRADECIMENTOS À Deus, por me iluminar e me dar forças para seguir em frente nos momentos mais difíceis. Aos meus pais e meu padrinho querido, que sempre me apoiaram em tudo o que eu quis fazer. Amo vocês. Ao meu príncipe José Flaviano, que esteve presente ao meu lado durante todo esse trabalho. Amo você. Ao meu orientador Dr. Leonardo Richtzenhain pela paciência, seriedade e por ter me dado um voto de confiança. Eu o admiro muito! Ao Enio, quem eu aprendi a entender e muito me ajudou em todas as etapas desse trabalho. Obrigada por toda a dedicação e paciência em todos os momentos. Aos queridos Dr. Roberto Corrêa e Dr. Paulo Corrêa por permitirem que eu realizasse esse trabalho em parceria com a empresa. Não tenho palavras para expressar meu agradecimento pela oportunidade que me deram. Deus os abençoe sempre! À minha grande incentivadora e “chefa” Sandra Fernandez, sem seu apoio incondicional nada disso teria sido possível. Muitíssimo obrigada por tudo! Aos “meus” queridos funcionários – Antônio, Benedito, Denis, Edvaldo, Edinelson, Geiza, Geraldo, Ivani, Moisés, Silvano e Willian. Vocês se empenharam em trabalhar corretamente nos momentos em que precisei me ausentar da empresa para as atividades na Universidade. Muito obrigada, sem a dedicação de vocês não teria sido possível chegar aqui! Ao grande amigo Joaquim Cruz e à Cristiane Ribeiro pelas explicações e a grande ajuda nas titulações de Parvovírus, e ao querido Domingues pela paciência, a amizade e por abrir as portas do Controle de Qualidade sempre que precisei. À Silvia Nunes e toda sua equipe pela presteza, pelo preparo das amostras e por sempre me atender prontamente quando precisei. Ao Dirceu por todas as explicações e a boa-vontade em me atender e ajudar. Ao Diego Santana que sempre correu atrás dos pedidos de compras dos reagentes para a execução do meu trabalho. À Adriana Bravos que algumas vezes “entrou em pânico” quando os Beagles adoeceram, mas que se dedicou a cuidar deles quando eu estava ausente da empresa, e por todas as outras coisas que fez para me ajudar. Muito obrigada! À Jane por todas as explicações e pelo apoio principalmente nas últimas semanas antes do depósito, muito obrigada de coração. Àqueles que não trabalham mais no Laboratório Biovet, mas que muito contribuíram – Sheyla Grellet, Luiz Visintin, Antenor e Ana Paula Gonçalves. Vocês foram fundamentais para a realização desse trabalho. Muito obrigada! À toda equipe do LABMAS, em especial à Sheila, Elizabeth Marconi, Gisele, Sueli, Iracema, Karen e Haila. Ao professor Paulo Brandão e ao professor Fábio Gregori sempre muito atenciosos e me atenderam diversas vezes que precisei. À Cíntia Fávero e Alessandra Marnie Castro que se dedicaram até altas horas e nos finais de semana para prepararem o plasmídeo. Também não tenho palavras para agradecer todo o empenho, boa vontade e dedicação que me dispensaram, e por todas as explicações. À Camila Oliveira, que desde o início da pós-graduação sempre me ajudou, e sobretudo nos momentos antes do depósito foi uma grande amiga e parceira. À professora Dra. Solange Genari pela pós-graduação no Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal da FMVZ-USP Aos professores, funcionários e colegas do Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo. À secretaria do Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal da FMVZ-USP pelo apoio durante esse período. À biblioteca da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia/USP, pelo carinho e a atenção dispensados durante a correção da dissertação. À secretaria de pós-graduação da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo pelo apoio durante esse período.
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