Alexandra Kupke

271 Pages·2016·29.86 MB·German

by  Kupke, Alexandra

N
O Alexandra Kupke
I
T
K
E
F
N
I
-
V
Die Rolle des olfaktorischen Epithels in der
D
B
initialen Phase der Infektion mit dem
R
E
D
neurotropen Borna disease virus

I
E
B

S
L
E
H
T
I
P
E
H
C
E
I
R

S
E
D

E
L
L
O
R

E
I
D

E
K
P
U
K

A
R
édition scientifique D Inaugural-Dissertation zur Erlangung des Grades eines
VVB LAUFERSWEILER VERLAG N
A Dr. med. vet.
X
VVB LAUFERSWEILER VERLAG E beim Fachbereich Veterinärmedizin der Justus-Liebig-Universität Gießen
STAUFENBERGRING 15 ISBN: 978-3-8359-6444-0 L
D-35396 GIESSEN A
VVB
Tel: [phone] Fax: -5599890
[email protected]
www.doktorverlag.de 9 783835 964440
édition scientifique
VVB VVB LAUFERSWEILER VERLAG
VERLAG
Photo cover: ©
(cid:68)(cid:97)(cid:115)(cid:32)(cid:87)(cid:101)(cid:114)(cid:107)(cid:32)(cid:105)(cid:115)(cid:116)(cid:32)(cid:105)(cid:110)(cid:32)(cid:97)(cid:108)(cid:108)(cid:101)(cid:110)(cid:32)(cid:115)(cid:101)(cid:105)(cid:110)(cid:101)(cid:110)(cid:32)(cid:84)(cid:101)(cid:105)(cid:108)(cid:101)(cid:110)(cid:32)(cid:117)(cid:114)(cid:104)(cid:101)(cid:98)(cid:101)(cid:114)(cid:114)(cid:101)(cid:99)(cid:104)(cid:116)(cid:108)(cid:105)(cid:99)(cid:104)(cid:32)(cid:103)(cid:101)(cid:115)(cid:99)(cid:104)(cid:252)(cid:116)(cid:122)(cid:116)(cid:46)
(cid:68)(cid:105)(cid:101)(cid:32)(cid:114)(cid:101)(cid:99)(cid:104)(cid:116)(cid:108)(cid:105)(cid:99)(cid:104)(cid:101)(cid:32)(cid:86)(cid:101)(cid:114)(cid:97)(cid:110)(cid:116)(cid:119)(cid:111)(cid:114)(cid:116)(cid:117)(cid:110)(cid:103)(cid:32)(cid:102)(cid:252)(cid:114)(cid:32)(cid:100)(cid:101)(cid:110)(cid:32)(cid:103)(cid:101)(cid:115)(cid:97)(cid:109)(cid:116)(cid:101)(cid:110)(cid:32)(cid:73)(cid:110)(cid:104)(cid:97)(cid:108)(cid:116)(cid:32)(cid:100)(cid:105)(cid:101)(cid:115)(cid:101)(cid:115)(cid:32)
(cid:66)(cid:117)(cid:99)(cid:104)(cid:101)(cid:115)(cid:32)(cid:108)(cid:105)(cid:101)(cid:103)(cid:116)(cid:32)(cid:97)(cid:117)(cid:115)(cid:115)(cid:99)(cid:104)(cid:108)(cid:105)(cid:101)(cid:223)(cid:108)(cid:105)(cid:99)(cid:104)(cid:32)(cid:98)(cid:101)(cid:105)(cid:32)(cid:100)(cid:101)(cid:110)(cid:32)(cid:65)(cid:117)(cid:116)(cid:111)(cid:114)(cid:101)(cid:110)(cid:32)(cid:100)(cid:105)(cid:101)(cid:115)(cid:101)(cid:115)(cid:32)(cid:87)(cid:101)(cid:114)(cid:107)(cid:101)(cid:115)(cid:46)
(cid:74)(cid:101)(cid:100)(cid:101)(cid:32)(cid:86)(cid:101)(cid:114)(cid:119)(cid:101)(cid:114)(cid:116)(cid:117)(cid:110)(cid:103)(cid:32)(cid:105)(cid:115)(cid:116)(cid:32)(cid:111)(cid:104)(cid:110)(cid:101)(cid:32)(cid:115)(cid:99)(cid:104)(cid:114)(cid:105)(cid:102)(cid:116)(cid:108)(cid:105)(cid:99)(cid:104)(cid:101)(cid:32)(cid:90)(cid:117)(cid:115)(cid:116)(cid:105)(cid:109)(cid:109)(cid:117)(cid:110)(cid:103)(cid:32)(cid:100)(cid:101)(cid:114)(cid:32)(cid:65)(cid:117)(cid:116)(cid:111)(cid:114)(cid:101)(cid:110)(cid:32)
(cid:111)(cid:100)(cid:101)(cid:114)(cid:32)(cid:100)(cid:101)(cid:115)(cid:32)(cid:86)(cid:101)(cid:114)(cid:108)(cid:97)(cid:103)(cid:101)(cid:115)(cid:32)(cid:117)(cid:110)(cid:122)(cid:117)(cid:108)(cid:228)(cid:115)(cid:115)(cid:105)(cid:103)(cid:46)(cid:32)(cid:68)(cid:97)(cid:115)(cid:32)(cid:103)(cid:105)(cid:108)(cid:116)(cid:32)(cid:105)(cid:110)(cid:115)(cid:98)(cid:101)(cid:115)(cid:111)(cid:110)(cid:100)(cid:101)(cid:114)(cid:101)(cid:32)(cid:102)(cid:252)(cid:114)(cid:32)
(cid:86)(cid:101)(cid:114)(cid:118)(cid:105)(cid:101)(cid:108)(cid:102)(cid:228)(cid:108)(cid:116)(cid:105)(cid:103)(cid:117)(cid:110)(cid:103)(cid:101)(cid:110)(cid:44)(cid:32)(cid:220)(cid:98)(cid:101)(cid:114)(cid:115)(cid:101)(cid:116)(cid:122)(cid:117)(cid:110)(cid:103)(cid:101)(cid:110)(cid:44)(cid:32)(cid:77)(cid:105)(cid:107)(cid:114)(cid:111)(cid:118)(cid:101)(cid:114)(cid:102)(cid:105)(cid:108)(cid:109)(cid:117)(cid:110)(cid:103)(cid:101)(cid:110)
(cid:32)(cid:117)(cid:110)(cid:100)(cid:32)(cid:100)(cid:105)(cid:101)(cid:32)(cid:69)(cid:105)(cid:110)(cid:115)(cid:112)(cid:101)(cid:105)(cid:99)(cid:104)(cid:101)(cid:114)(cid:117)(cid:110)(cid:103)(cid:32)(cid:105)(cid:110)(cid:32)(cid:117)(cid:110)(cid:100)(cid:32)(cid:86)(cid:101)(cid:114)(cid:97)(cid:114)(cid:98)(cid:101)(cid:105)(cid:116)(cid:117)(cid:110)(cid:103)(cid:32)(cid:100)(cid:117)(cid:114)(cid:99)(cid:104)(cid:32)
(cid:101)(cid:108)(cid:101)(cid:107)(cid:116)(cid:114)(cid:111)(cid:110)(cid:105)(cid:115)(cid:99)(cid:104)(cid:101)(cid:32)(cid:83)(cid:121)(cid:115)(cid:116)(cid:101)(cid:109)(cid:101)(cid:46)
(cid:49)(cid:46)(cid:32)(cid:65)(cid:117)(cid:102)(cid:108)(cid:97)(cid:103)(cid:101)(cid:32)(cid:50)(cid:48)(cid:49)(cid:54)
(cid:65)(cid:108)(cid:108)(cid:32)(cid:114)(cid:105)(cid:103)(cid:104)(cid:116)(cid:115)(cid:32)(cid:114)(cid:101)(cid:115)(cid:101)(cid:114)(cid:118)(cid:101)(cid:100)(cid:46)(cid:32)(cid:78)(cid:111)(cid:32)(cid:112)(cid:97)(cid:114)(cid:116)(cid:32)(cid:111)(cid:102)(cid:32)(cid:116)(cid:104)(cid:105)(cid:115)(cid:32)(cid:112)(cid:117)(cid:98)(cid:108)(cid:105)(cid:99)(cid:97)(cid:116)(cid:105)(cid:111)(cid:110)(cid:32)(cid:109)(cid:97)(cid:121)(cid:32)(cid:98)(cid:101)
(cid:32)(cid:114)(cid:101)(cid:112)(cid:114)(cid:111)(cid:100)(cid:117)(cid:99)(cid:101)(cid:100)(cid:44)(cid:32)(cid:115)(cid:116)(cid:111)(cid:114)(cid:101)(cid:100)(cid:32)(cid:105)(cid:110)(cid:32)(cid:97)(cid:32)(cid:114)(cid:101)(cid:116)(cid:114)(cid:105)(cid:101)(cid:118)(cid:97)(cid:108)(cid:32)(cid:115)(cid:121)(cid:115)(cid:116)(cid:101)(cid:109)(cid:44)(cid:32)(cid:111)(cid:114)(cid:32)(cid:116)(cid:114)(cid:97)(cid:110)(cid:115)(cid:109)(cid:105)(cid:116)(cid:116)(cid:101)(cid:100)(cid:44)(cid:32)
(cid:105)(cid:110)(cid:32)(cid:97)(cid:110)(cid:121)(cid:32)(cid:102)(cid:111)(cid:114)(cid:109)(cid:32)(cid:111)(cid:114)(cid:32)(cid:98)(cid:121)(cid:32)(cid:97)(cid:110)(cid:121)(cid:32)(cid:109)(cid:101)(cid:97)(cid:110)(cid:115)(cid:44)(cid:32)(cid:101)(cid:108)(cid:101)(cid:99)(cid:116)(cid:114)(cid:111)(cid:110)(cid:105)(cid:99)(cid:44)(cid:32)(cid:109)(cid:101)(cid:99)(cid:104)(cid:97)(cid:110)(cid:105)(cid:99)(cid:97)(cid:108)(cid:44)(cid:32)
(cid:112)(cid:104)(cid:111)(cid:116)(cid:111)(cid:99)(cid:111)(cid:112)(cid:121)(cid:105)(cid:110)(cid:103)(cid:44)(cid:32)(cid:114)(cid:101)(cid:99)(cid:111)(cid:114)(cid:100)(cid:105)(cid:110)(cid:103)(cid:44)(cid:32)(cid:111)(cid:114)(cid:32)(cid:111)(cid:116)(cid:104)(cid:101)(cid:114)(cid:119)(cid:105)(cid:115)(cid:101)(cid:44)(cid:32)(cid:119)(cid:105)(cid:116)(cid:104)(cid:111)(cid:117)(cid:116)(cid:32)(cid:116)(cid:104)(cid:101)(cid:32)(cid:112)(cid:114)(cid:105)(cid:111)(cid:114)(cid:32)
(cid:119)(cid:114)(cid:105)(cid:116)(cid:116)(cid:101)(cid:110)(cid:32)(cid:112)(cid:101)(cid:114)(cid:109)(cid:105)(cid:115)(cid:115)(cid:105)(cid:111)(cid:110)(cid:32)(cid:111)(cid:102)(cid:32)(cid:116)(cid:104)(cid:101)(cid:32)(cid:65)(cid:117)(cid:116)(cid:104)(cid:111)(cid:114)(cid:115)(cid:32)(cid:111)(cid:114)(cid:32)(cid:116)(cid:104)(cid:101)(cid:32)(cid:80)(cid:117)(cid:98)(cid:108)(cid:105)(cid:115)(cid:104)(cid:101)(cid:114)(cid:46)
(cid:49)(cid:115)(cid:116)(cid:32)(cid:69)(cid:100)(cid:105)(cid:116)(cid:105)(cid:111)(cid:110)(cid:32)(cid:50)(cid:48)(cid:49)(cid:54)
(cid:169)(cid:32)(cid:32)(cid:50)(cid:48)(cid:49)(cid:54)(cid:32)(cid:98)(cid:121)(cid:32)(cid:86)(cid:86)(cid:66)(cid:32)(cid:76)(cid:65)(cid:85)(cid:70)(cid:69)(cid:82)(cid:83)(cid:87)(cid:69)(cid:73)(cid:76)(cid:69)(cid:82)(cid:32)(cid:86)(cid:69)(cid:82)(cid:76)(cid:65)(cid:71)(cid:44)(cid:32)(cid:71)(cid:105)(cid:101)(cid:115)(cid:115)(cid:101)(cid:110)
(cid:80)(cid:114)(cid:105)(cid:110)(cid:116)(cid:101)(cid:100)(cid:32)(cid:105)(cid:110)(cid:32)(cid:71)(cid:101)(cid:114)(cid:109)(cid:97)(cid:110)(cid:121)(cid:32)
(cid:233)(cid:100)(cid:105)(cid:116)(cid:105)(cid:111)(cid:110)(cid:32)(cid:32)(cid:115)(cid:99)(cid:105)(cid:101)(cid:110)(cid:116)(cid:105)(cid:102)(cid:105)(cid:113)(cid:117)(cid:101)
(cid:86)(cid:86)(cid:66)(cid:32)(cid:76)(cid:65)(cid:85)(cid:70)(cid:69)(cid:82)(cid:83)(cid:87)(cid:69)(cid:73)(cid:76)(cid:69)(cid:82)(cid:32)(cid:86)(cid:69)(cid:82)(cid:76)(cid:65)(cid:71)
(cid:83)(cid:84)(cid:65)(cid:85)(cid:70)(cid:69)(cid:78)(cid:66)(cid:69)(cid:82)(cid:71)(cid:82)(cid:73)(cid:78)(cid:71)(cid:32)(cid:49)(cid:53)(cid:44)(cid:32)(cid:68)(cid:45)(cid:51)(cid:53)(cid:51)(cid:57)(cid:54)(cid:32)(cid:71)(cid:73)(cid:69)(cid:83)(cid:83)(cid:69)(cid:78)
(cid:84)(cid:101)(cid:108)(cid:58)(cid:32)(cid:48)(cid:54)(cid:52)(cid:49)(cid:45)(cid:53)(cid:53)(cid:57)(cid:57)(cid:56)(cid:56)(cid:56)(cid:32)(cid:70)(cid:97)(cid:120)(cid:58)(cid:32)(cid:48)(cid:54)(cid:52)(cid:49)(cid:45)(cid:53)(cid:53)(cid:57)(cid:57)(cid:56)(cid:57)(cid:48)(cid:32)
(cid:101)(cid:109)(cid:97)(cid:105)(cid:108)(cid:58)(cid:32)(cid:114)(cid:101)(cid:100)(cid:97)(cid:107)(cid:116)(cid:105)(cid:111)(cid:110)(cid:64)(cid:100)(cid:111)(cid:107)(cid:116)(cid:111)(cid:114)(cid:118)(cid:101)(cid:114)(cid:108)(cid:97)(cid:103)(cid:46)(cid:100)(cid:101)
(cid:119)(cid:119)(cid:119)(cid:46)(cid:100)(cid:111)(cid:107)(cid:116)(cid:111)(cid:114)(cid:118)(cid:101)(cid:114)(cid:108)(cid:97)(cid:103)(cid:46)(cid:100)(cid:101)
Aus dem Institut für Veterinär-Pathologie
der Justus-Liebig-Universität Gießen

Betreuerin: Prof. Dr. habil. Christiane Herden

Die Rolle des olfaktorischen Epithels in der initialen Phase
der Infektion mit dem neurotropen Borna disease virus

INAUGURAL-DISSERTATION
zur Erlangung des Grades eines
Dr. med. vet.
beim Fachbereich Veterinärmedizin
der Justus-Liebig-Universität Gießen

eigereicht von

Alexandra Kupke
Tierärztin aus Schwelm

Gießen 2016
Mit Genehmigung des Fachbereichs Veterinärmedizin
der Justus-Liebig-Universität Gießen

Dekan: Prof. Dr. Dr. h.c. M. Kramer

Gutachter: Prof. Dr. habil. C. Herden
PD Dr. C. Rummel

Tag der Disputation: 04.04.2016

(cid:2)
Meiner Familie
Ich erkläre: Ich habe die vorgelegte Dissertation selbständig und ohne unerlaubte fremde
Hilfe und nur mit den Hilfen angefertigt, die ich in der Dissertation angegeben habe. Alle
Textstellen, die wörtlich oder sinngemäß aus veröffentlichten oder nicht veröffentlichten
Schriften entnommen sind, und alle Angaben, die auf mündlichen Auskünften beruhen, sind
als solche kenntlich gemacht. Bei den von mir durchgeführten und in der Dissertation
erwähnten Untersuchungen habe ich die Grundsätze guter wissenschaftlicher Praxis, wie sie
in der "Satzung der Justus-Liebig-Universität Gießen zur Sicherung guter wissenschaftlicher
Praxis" niedergelegt sind, eingehalten.
(cid:2)
Teile dieser Arbeit wurden bereits als Poster oder Vortrag vorgestellt:

KUPKE A., AHLEMEYER B., WENISCH S., BAUMGART-VOGT E., HERDEN C. (2011).
Etablierung von In-vitro-Methoden zur Charakterisierung der initialen Infektion mit dem
neurotropen Borna Disease Virus.
Poster auf der Sommerveranstaltung des Vereins der Freunde und Förderer der
Veterinärmedizin an der Justus-Liebig-Universität Gießen, 2011.

KUPKE A., WEWETZER K., AHLEMEYER B., WENISCH S., HERDEN C. (2012).
Establishment of in vitro methods to study the entry of neurotropic viruses into the central
nervous system (CNS) via the olfactory pathway.
Poster auf dem nationalen Symposium für Zoonosefoschung der nationalen
Forschungsplattform für Zoonosen, Berlin, 2012.

KUPKE A., EICKMANN M., WEWETZER K., WENISCH S., HERDEN C. (2013).
Untersuchungen zur initialen Phase der Infektion mit dem Borna Disease Virus (BDV).
Vortrag auf der 56. Jahrestagung der Fachgruppe Pathologie der Deutschen
Veterinärmedizinischen Gesellschaft, Fulda, 2013. Abstract veröffentlicht in Tierärztiche
Praxis Großtiere (3/13).

KUPKE A., EICKMANN M., WEWETZER K., WENISCH S., HERDEN C. (2013).
Borna disease virus (BDV) as a model for neurotropic viruses with olfactory entry.
Vortrag beim Neurokolloquium des Fachbereichs Veterinärmedizin der Justus-Liebig-
Universität Gießen, 2013.
(cid:2)

Inhaltsverzeichnis
(cid:2)
1. EINLEITUNG.......................................................................................................................1
(cid:2)
2. LITERATURÜBERSICHT ...................................................................................................3
(cid:2)
2.1 VIRALE EINTRITTSPFORTEN UND STRATEGIEN ZUR AUSBREITUNG INS ZNS..3
(cid:2)
2.1.1 Hämatogene Infektion des ZNS..............................................................................3
(cid:2)
2.1.1.1 Infektion von Endothelzellen.............................................................................3
(cid:2)
2.1.1.2 Permeabilitätsstörung der Blut-Hirnschranke...................................................4
(cid:2)
2.1.1.3 Leukozytenmigration (leukocyte trafficking)......................................................4
(cid:2)
2.1.1.4. Übertritt von Viren über den Plexus choroideus..............................................5
(cid:2)
2.1.2 Neurogene Infektion des ZNS.................................................................................5
(cid:2)
2.1.2.1 Eintritt über sensorische Nerven.......................................................................5
(cid:2)
2.1.2.2 Eintritt über motorische Nerven........................................................................5
(cid:2)
2.1.2.3 Intranasale Infektion des ZNS über olfaktorische Leitungsbahnen...................6
(cid:2)
2.1.3 Viren, die verschiedene Infektionswege nutzen......................................................9
(cid:2)
2.1.4 Aufnahme anderer potentiell schädlicher Agentien über das olfaktorische Epithel10
(cid:2)
2.2 AUFBAU DES OLFAKTORISCHEN EPITHELS..........................................................10
(cid:2)
2.2.1 Zellen des olfaktorischen Epithels.........................................................................11
(cid:2)
2.3 DIE BORNASCHE KRANKHEIT..................................................................................16
(cid:2)
2.3.1 Klinik......................................................................................................................16
(cid:2)
2.3.2 Die natürliche Infektion des Pferdes......................................................................17
(cid:2)
2.3.3 Epidemiologie........................................................................................................18
(cid:2)
2.3.3.1 Wirtsspektrum von Bornaviren........................................................................18
(cid:2)
2.3.3.2 Verbreitung der klassischen Bornaschen Krankheit.......................................19
(cid:2)
2.3.3.3 Bornavirus-Infektion des Menschen................................................................20
(cid:2)
2.3.3.4 Reservoire von Bornaviren.............................................................................21
(cid:2)
2.3.4 Tiermodelle zur Untersuchung von Bornavirus-Infektionen...................................22
(cid:2)
2.3.4.1 Die intrazerebrale Infektion neonataler Ratten...............................................23
(cid:2)
2.3.4.2 Die intrazerebrale Infektion adulter Ratten.....................................................24
(cid:2)
2.3.4.3 Die intranasale Infektion adulter Ratten..........................................................27
(cid:2)
2.3.4.4 Die intrazerebrale Infektion von Mäusen........................................................28
(cid:2)
2.3.5 Bornaviren.............................................................................................................29
(cid:2)
2.3.5.1 Virusaufbau und Genomorganisation.............................................................30
(cid:2)
2.3.5.2 Die Proteine des BDV.....................................................................................33
(cid:2)
2.3.5.3 Der Infektionszyklus des BDV.........................................................................36
(cid:2)
2.3.5.4 Virusausbreitung in vivo und in vitro...............................................................40
(cid:2)
3. MATERIAL UND METHODEN..........................................................................................42
(cid:2)
3.1 CHARAKTERISIERUNG DES OLFAKTORISCHEN EPITHELS DES PFERDES ......42
(cid:2)
3.1.1 Probengewinnung und Aufbereitung der Proben..................................................42
(cid:2)
3.1.2 Histopathologische Untersuchung.........................................................................44
(cid:2)
3.1.2.1 Quantitative Auswertung des olfaktorischen Epithels des Pferdes.................44
3.1.2.2 Untersuchung und quantitative Auswertung der Typen des olfaktorischen
(cid:2)
Epithels des Pferdes...................................................................................................45
(cid:2)
3.1.3 Immunhistologische Untersuchung der Pferdenasen............................................46
(cid:2)
3.1.3.1 Seren und Primärantikörper............................................................................47
(cid:2)
3.1.3.2 Tertiärantikörper und Detektionssysteme.......................................................49
(cid:2)
3.1.3.3 Immunhistologischer Nachweis von OMP (Olfactory marker protein)............49
(cid:3)(cid:2)
Inhaltsverzeichnis
(cid:2)
3.1.3.4 Immunhistologischer Nachweis von DCX (Doublecortin)...............................51
3.1.3.5 Immunhistologischer Nachweis von PCNA
(cid:2)
(Proliferating cell nuclear antigen)..............................................................................52
(cid:2)
3.1.3.6 Immunhistologischer Nachweis von TrkA (Tyrosinkinase-Rezeptor-A)..........52
(cid:2)
3.1.3.7 Immunhistologischer Nachweis weiterer Marker............................................53
(cid:2)
3.1.3.8 Semiquantitative Auswertung der Immunhistologie........................................54
(cid:2)
3.1.4 Immunhistologische Untersuchung der Rattennase..............................................55
(cid:2)
3.1.5 Statistische Datenanalyse der Charakterisierung des olfaktorischen Epithels......56
(cid:2)
3.2 EXPERIMENTELLE INTRANASALE INFEKTION VON LEWIS-RATTEN..................56
(cid:2)
3.2.1 Herstellung der Virussuspension und der Mock-Gehirnsuspension......................56
(cid:2)
3.2.1.1 Versuchstiere..................................................................................................56
(cid:2)
3.2.1.2 Versuchsbedingungen....................................................................................57
(cid:2)
3.2.1.3 BDV-Infektion..................................................................................................57
(cid:2)
3.2.1.4 Euthanasie und Sektion..................................................................................57
(cid:2)
3.2.1.5 Herstellung der Virussuspension....................................................................58
(cid:2)
3.2.2 Intranasale Infektion adulter Lewis-Ratten............................................................58
(cid:2)
3.2.2.1 Versuchstiere..................................................................................................58
(cid:2)
3.2.2.2 Versuchsbedingungen für die In-vivo-Versuche.............................................58
(cid:2)
3.2.2.3 BDV-Infektion der Versuchstiere.....................................................................58
(cid:2)
3.2.2.4 Mock-Infektion.................................................................................................59
(cid:2)
3.2.2.5 Euthanasie und Sektion..................................................................................59
(cid:2)
3.2.2.6 Gewinnung und Aufarbeitung des Probenmaterials.......................................59
(cid:2)
3.2.3 Histopathologische Untersuchung der Versuchstiere............................................61
(cid:2)
3.2.3.1 H&E-Färbung von Gehirn und Nase der Versuchstiere..................................61
(cid:2)
3.2.3.2 Auswertung.....................................................................................................61
(cid:2)
3.2.4 Immunhistologische Untersuchung der Versuchstiere..........................................61
(cid:2)
3.2.4.1 Immunhistologischer Nachweis von BDV-N...................................................61
(cid:2)
3.2.4.2 Auswertung der Immunhistologie....................................................................62
3.2.5 Immunhistologische Untersuchung des Proliferating cell nuclear antigen (PCNA)
(cid:2)
bei BDV-infizierten und Mock-infizierten Lewis-Ratten...................................................63
(cid:2)
3.2.5.1 Auswertung.....................................................................................................63
(cid:2)
3.2.6 In-situ-Hybridisierung der Versuchstiere (ISH)......................................................63
(cid:2)
3.2.6.1 Sondenherstellung..........................................................................................64
(cid:2)
3.2.6.2 Durchführung der ISH zum Nachweis der viralen RNA..................................67
(cid:2)
3.2.6.3 ISH der Nasen und Gehirne der intranasal infizierten Ratten.........................68
(cid:2)
3.2.6.4 Auswertung der ISH........................................................................................68
(cid:2)
3.2.7 Statistische Datenanalyse der In-vivo-Infektionsversuche....................................69
(cid:2)
3.3 DISSOZIATIONSKULTUR DES OLFAKTORISCHEN EPITHELS..............................70
(cid:2)
3.3.1 Etablierung der Dissoziationskultur des olfaktorischen Epithels...........................70
(cid:2)
3.3.1.1 Beschichtung der Deckgläschen.....................................................................70
(cid:2)
3.3.1.2 Kulturbedingungen..........................................................................................71
(cid:2)
3.3.1.3. Präparation der Dissoziationskultur...............................................................71
(cid:2)
3.3.2 Charakterisierung der Dissoziationskultur.............................................................73
(cid:2)
3.3.2.1 Reaktionsbedingungen der Immunfluoreszenz...............................................73
(cid:2)
3.3.2.2 Indirekte Immunfluoreszenz zur Darstellung der olfaktorischen Neurone......74
(cid:2)
3.3.2.3 Indirekte Immunfluoreszenz zur Darstellung nicht-neuronaler Zellen.............75
(cid:3)(cid:3) (cid:2)