UNIVERSITEIT GENT FACULTEIT DIERGENEESKUNDE Academiejaar 2012 – 2013 WILDE DIEREN IN GEVANGENSCHAP: MOGELIJKE INVLOED VAN DIEET OP DE INTESTINALE MICROBIOTA door Amalia VAN ES Promotoren: Drs. Anne Becker Literatuurstudie in het kader Prof. Dr. Geert Huys van de Masterproef © 2013 Amalia van Es UNIVERSITEIT GENT FACULTEIT DIERGENEESKUNDE Academiejaar 2012 – 2013 WILDE DIEREN IN GEVANGENSCHAP: MOGELIJKE INVLOED VAN DIEET OP DE INTESTINALE MICROBIOTA door Amalia VAN ES Promotoren: Drs. Anne Becker Literatuurstudie in het kader Prof. Dr. Geert Huys van de Masterproef © 2013 Amalia van Es Universiteit Gent, haar werknemers of studenten bieden geen enkele garantie met betrekking tot de juistheid of volledigheid van de gegevens vervat in deze masterproef, noch dat de inhoud van deze masterproef geen inbreuk uitmaakt op of aanleiding kan geven tot inbreuken op de rechten van derden. Universiteit Gent, haar werknemers of studenten aanvaarden geen aansprakelijkheid of verantwoordelijkheid voor enig gebruik dat door iemand anders wordt gemaakt van de inhoud van de masterproef, noch voor enig vertrouwen dat wordt gesteld in een advies of informatie vervat in de masterproef. VOORWOORD Via deze weg wil ik iedereen bedanken die heeft meegewerkt aan het tot stand komen van deze literatuurstudie. Zonder iedereens hulp en steun was deze literatuurstudie niet tot het uiteindelijke resultaat gekomen. Als eerste wil ik mijn promotor Drs. Anne Becker en mijn mede promotor Prof. Dr. Geert Huys bedanken voor al hun tijd, begeleiding, kennis en vertrouwen. Ook bedank ik graag mijn vriend, Martijn Mooij voor het nakijken van mijn literatuurstudie, zijn suggesties en onvoorwaardelijke steun. Ten slotte wil ik graag mijn ouders bedanken, niet enkel voor hun hulp met deze literatuurstudie, maar vooral voor hun vertrouwen in het volbrengen van mijn studie. INHOUDSOPGAVE SAMENVATTING…………………………………………………………………..………………..…… p. 1 DEFINITIELIJST………………………………………………………………………………………….. p. 2 INLEIDING…………………………………………………………………………………………....…... p. 3 LITERATUURSTUDIE…………………………………………………………….……………………. p. 4 1. Anatomie van het gastro-intestinaal stelsel…………………………………………..……... p. 4 2. Nutritionele samenstelling van een dieet…………………………………………………….. p. 5 3. Intestinale microbiota……...……………...……………………………………………....……. p. 8 3.1. Methoden voor intestinaal microbiologisch onderzoek…………………………… p. 8 3.1.1. Cultuur-onafhankelijke methoden…………………………………………. p. 9 3.1.2. Cultuur-afhankelijke methoden…………………………………………….. p. 12 3.2. Intestinale microbiële verhoudingen volgens de dietaire klasses…….……….... p. 13 4. Intestinale fermentatie……………………………………………….…………………….…… p. 16 4.1. Intestinale fermentatie bij niet-herkauwers…………………………………..……... p. 16 4.2. Intestinale fermentatie bij herkauwers……………………………………………… p. 16 5. Externe invloeden op de intestinale microbiota.………………………………………..…….. p. 17 6. Case-studies……………………………………………………………………………………. p. 19 6.1. Grizzly beer………………………………………………………….…………………. p. 20 6.2. Chimpansee..…………..…………………………………………………….………… p. 21 6.3. Psittaciformen..…..…………………….……………………………………….……… p. 23 6.4. Wolf……………………………………………………..………………………….……. p. 23 BESPREKING…………………………………………………………………………………...………… p. 26 REFERENTIELIJST………………………………………………………………………………….…… p. 28 SAMENVATTING Voor het behoud van een goede gezondheid bij mens en dier is er een optimale intestinale microbiële balans nodig. Vele externe invloeden zoals antibiotica, stress, pre- en probiotica, pesticiden en het dieet hebben een inwerking op de symbiotische verhoudingen tussen de intestinale microbiota en hun gastheer. Wanneer deze verhoudingen verstoord raken kan er dysbiose ontstaan wat kan leiden tot de kolonisatie van potentieel pathogene bacteriën, zoals Escherichia coli en Clostridium perfringens, welke ziektes kunnen veroorzaken en mogelijks kunnen leiden tot mortaliteit. De intestinale microbiota heeft als primordiale functie het fermenteren van niet of moeilijk verteerbaar materiaal van plantaardige, en in mindere mate, dierlijke oorsprong. De resulterende fermentatieproducten, zoals de korte keten vetzuren acetaat, propionaat en butyraat, hebben een invloed op de kolonisatie van de microbiota en op de intestinale homeostase van het gastheer metabolisme. De verhoudingen in dewelke deze fermentatieproducten worden gevormd zijn medebepalend voor zowel de diversiteit als de dynamiek van de intestinale microbiota. De bacteriële samenstelling en diversiteit van het gastro-intestinaal kanaal kan onderzocht worden aan de hand van cultuur-onafhankelijke en/of cultuur-afhankelijke methodes. Tegenwoordig worden steeds meer diersoorten met uitsterven bedreigd, waardoor het belang van conservatie van deze soorten in zoos toeneemt. De algemene gezondheid en voortplanting van deze dieren in gevangenschap is echter niet optimaal. Onderzoek naar de invloed van gevangenschap, en het dieet in het bijzonder, op de intestinale microbiota van in het wild levende dieren kan hier een bijdrage leveren. In deze literatuurstudie worden de grizzly beer, de chimpansee, de psittaciformen en de wolf als specifieke cases geselecteerd, om de mogelijke invloed van dieet de intestinale microbiota van wilde dieren in gevangenschap te bespreken. KERNWOORDEN: intestinale microbiota, fermentatie, gevangenschap, cultuur-(on)afhankelijke methodologie 1 DEFINITIELIJST Microbiota Een gemeenschap van fylogenetisch en functioneel verschillende bacteriën die samen voorkomen in een bepaald ecosysteem, zoals vb. het gastro- intestinaal stelsel. Kolonisatie De adhesie van bacteriën aan artificiële of biologische oppervlakken. Bacteriën kunnen het gastro-intestinaal stelsel koloniseren, d.m.v. hechtingsmechanismen en door het overwinnen van de defensiemechanismen van de gastheer. Symbiose Een vorm van samenleving tussen twee types organismen, zoals de gastheer en zijn microbiota, waarbij beide organismen door deze samenwerking een voordeel behalen. Dysbiose Een verstoring van de diversiteit en/of functionaliteit van de microbiota o.a. tussen de gastheer en de bacteriën in het gastro-intestinaal stelsel, wat tot ziekte kan leiden. SCFA’s Korte keten vetzuren, waaronder acetaat, propionaat en butyraat, geproduceerd door bacteriële fermentatie. Dietaire klasses De classificatie van dieren op basis van de samenstelling van hun natuurlijke dieet. 16S rRNA gen Een component van het 30S small subunit (SSU) van de prokaryote ribosomen die als taxonomische of fylogenetische merker wordt gebruikt voor species identificatie en classificatie. Het 16S rRNA gen is 1500 baseparen lang met zowel constante als variabele regio’s (V). Psittaciformen Een orde onder de vogels, waaronder de papegaaien, amazones, kaketoes, lorikies, lories, macaws en de parkieten vallen. 2 INLEIDING De intestinale microbiota speelt een belangrijke rol in het behoud van een goede algemene gezondheid. De micro-organismen fermenteren enzymatisch onverteerde fracties van het dieet, versterken ons immuunsysteem, voorkomen de groei van pathogene bacteriën, reguleren de ontwikkeling van het spijsverteringsstelsel en produceren vitamines voor de gastheer (1,2). Voor een optimale functie van de intestinale bacteriën, is een uitgebalanceerd dieet onontbeerlijk. De verschillende nutriënten in onze voeding sturen immers de ontwikkeling van de intestinale microbiota (3). Een niet uitgebalanceerd dieet kan ervoor zorgen dat pathogene bacteriën de kans krijgen om te koloniseren en ziekte te veroorzaken. Steeds meer diersoorten worden met uitsterven bedreigd en worden, om de diersoort te kunnen behouden, gehouden in zoos. Wanneer echter vrijlevende wilde dieren in gevangenschap worden gehouden, verandert hun natuurlijke dieet in een door de mens samengesteld dieet en wordt het dier blootgesteld aan allerhande externe factoren zoals antibiotica, pesticiden, gedrags- en omgevingsveranderingen. Deze stress inducerende factoren leiden tot verhoogde cortisol waarden, welke invloed hebben op de aanwezige intestinale microbiota (4). Dergelijke factoren kunnen aldus de symbiose tussen darmmicrobiota en gastheer verstoren en de resulterende dysbacteriose kan bijdragen in de verandering van de intestinale microbiota welke ziekte in de hand kan werken (5). In de biologie wordt op basis van het natuurlijke dieet een classificatie van mens en dier gemaakt waarvan de drie grootste klasses carnivoor, omnivoor en herbivoor zijn. Het spijsverteringsstelsel, met inbegrip van het intestinale ecosysteem, is aangepast aan het type voedsel dat het dier consumeert (6,7). Door middel van cultuur-afhankelijk en cultuur-onafhankelijke microbiologisch onderzoek probeert men te achterhalen welke bacteriën aanwezig zijn bij deze klasses en welke invloed het houden van wilde dieren in gevangenschap heeft op het microbiële evenwicht (Figuur 1). Met deze literatuurstudie wordt er gekeken naar de invloed van gevangenschap op de intestinale microbiota bij de grizzly beer (8,9,10,11), chimpansee (12,13,14,15), psittaciforme (16,17,18,19) en de wolf (20,21,22,23,24). Dit om te kunnen achterhalen welke maatregelen er getroffen kunnen worden om de gezondheid van wilde dieren in gevangenschap te kunnen optimaliseren. Fig. 1 Schema van de wisselwerking tussen voeding, metabolisme en de intestinale microbiota bij in het wild l evende dieren en dieren in gevangenschap, welke onderzocht kan worden a.d.h.v. in vitro en functionele studies. 3 LITERATUURSTUDIE 1. ANATOMIE VAN HET GASTRO-INTESTINAAL STELSEL Het gastro-intestinaal stelsel is het systeem dat instaat voor de vertering en opname van voedingsstoffen in het lichaam. De vertering vindt plaats door samenwerking van verschillende organen in het lichaam, waaronder de maag en darmen. De meeste voedingsstoffen in de voeding kunnen niet rechtstreeks in het lichaam worden opgenomen en de darm speelt hierin een belangrijke rol. De morfologie van het gastro-intestinaal stelsel bij zoogdieren verschilt aanzienlijk van soort tot soort, maar het vertoont ook structurele gelijkenissen. De morfologie wordt beïnvloed door de aard van het voedsel, frequentie van voedselopname, de nood om voedsel op te slaan en het lichaamsgewicht (25). Het gastro-intestinaal stelsel bestaat uit verschillende delen, zoals de slokdarm (oesophagus), maag (omasum), dunne darm (duodenum), dikke darm (colon) en de endeldarm (rectum). De totale lengte van het spijsverteringsstelsel is o.a. afhankelijk van het dieet (Figuur 2) (25). Carnivoren (vleeseters) hebben een korte en simpele darm nodig voor het snel verteerbare en eiwitrijke vlees, terwijl herbivoren (planteneters) gebaat zijn met een langer en ruimer darmstelsel, omdat de vertering van planten trager verloopt. Veelal zijn er ook één of meerdere “fermentatiekamers’’ waar het plantaardig materiaal onderhevig is aan microbiële fermentatie. Het varken is een omnivoor (alleseter) en heeft een darm die in lengte tussen die van een carnivoor en een herbivoor ligt. Het gastro-intestinaal stelsel van vogels heeft een andere opbouw dan dat van de zoogdieren, het bestaat uit de slokdarm, krop, proventriculus, ventriculus, darmen, ceca, rectum en cloaca (Figuur 1E) (26). De ceca bij psittaciformen zijn rudimentair en het rectum komt overeen met de dikke darm bij de zoogdieren (26). Fig. 2 Variaties in de morfologie van het gastro-intestinaal stelsel bij verschillende species. (A) hond, (B) paard, (C) schaap, (D) varken, (E) vogel (vrij naar (25)). Een primordiale functie van het gastro-intestinaal stelsel is het verteren en opnemen van voedingsstoffen. Dit gebeurt via de enzymatische vertering en bacteriële fermentatie. De plaats waar de bacteriële fermentatie plaatsvindt, heeft invloed op de nutriënten benuttingscapaciteit van het lichaam (25). Bij mono-gastrische dieren verloopt een beperkte bacteriële fermentatie hoofdzakelijk plaats in het colon. Bij herkauwers vindt de bacteriële fermentatie hogerop in het gastro-intestinaal stelsel plaats, met name in de pens. Bij andere herbivoren zoals het paard en het konijn gebeurt de bacteriële fermentatie pas ter hoogte van het cecum, waardoor de fermentatieproducten enkel 4
Description: