Sequencing and analysis of the complete mitochondrial genome of the Oriental fruit fly, Bactrocera dorsalis (Hendel) (Diptera: Tephritidae)

2007·0.36 MB·

by  Lang, Xu

昆 虫 学 报 !"#$%&#’(’)’*+"$,+&+"$，!"#"$%&’’(，)（’ *）：())+(,- .//0’1)12,&3,
"""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""
桔小实蝇线粒体基因组全序列及其分析
徐 浪-，余道坚-，!，张润杰&，李建光5，康 林-，陈志!-，焦 懿-
（-L 深圳出入境检验检疫局动植中心，广东深圳 )-*’’-；
&L 中山大学昆虫学研究所，有害生物控制与利用国家重点实验室，广州 )-’&()；
5L 北京出入境检验检疫局，北京 -’’’&,）
摘要：桔小实蝇 -$"#.’"/.$0’.1$)+1线粒体基因组全序列对研究实蝇分子系统进化具有重要意义。本研究通过M0!
测序和克隆技术，对桔小实蝇8%M0!全序列进行了测定和分析。结果表明：桔小实蝇线粒体基因组全长-)3-) NG
（O>=49=P序列号：MQ*1)()3）。基因组碱基组成为53L5R!，-,L&R6，-’L&RO，51L5RI，由-5个蛋白编码基因、&&
个%J0!基因、&个@J0!基因以及一个非编码的控制区域（!SI2@:EB区）组成。(个蛋白编码基因和-5个%J0!基
因从T链编码，其余,个蛋白编码基因和3个%J0!基因从0链编码。位于T链上的蛋白编码基因具有近似的!、I
含量，而位于0链上的蛋白编码基因的!的含量明显高于I的含量。以8%M0!6U!基因为例，比较了桔小实蝇与
其他-1种实蝇的亲缘关系，结果显示其与同亚属（果实蝇亚属 -$"#.’"/.$）内的其他近缘种相互间的同源性很高。
关键词：双翅目；实蝇科；桔小实蝇；线粒体基因组
中图分类号：Q3,, 文献标识码：! 文章编号：’1)12,&3（, &’’(）’*2’())2’(
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桔小实蝇 -$"#.’"/.$ 0’.1$)+（1 [>=H>;）属双翅目 可危害1,个科&)’余种果树和蔬菜（张清源，-33*；
（M:G%>@9）实蝇科（I>GB@:%:H9>）果实蝇属 -$"#.’"/.$ 果 梁光红等，&’’5；林进添等，&’’)；潘志萍等，&’’,）。
实蝇亚属-$"#.’"/.$，是国际上重要的检疫性害虫， 该虫原产亚洲热带地区，目前分布于印度次大陆、东
基金项目：国家奥运科技项目（&’’14!3’14’,）；国家“3(5”项目（&’’&64---1’)）；国家自然科学基金项目（5’1(--,&）
作者简介：徐浪，女，-3*5年生，硕士，主要从事昆虫分类和植物检疫研究，7289:;：<9=>>?@>’1&5A?9BCCDEC8DE=
!通讯作者 !"%BC@FC@EC@@>$GC=H>=E>，I>;D：’())2*&--(33’；7289:;：?"H<’*A#89:;DEC8
收稿日期 J>E>:K>H：&’’,2-&2&(；接受日期 !EE>G%>H：&’’(2’*2’&
J8/ 昆虫学报 8("#9-"*1*$*.’(#:’-’(# 80卷
南亚、南太平洋地区和夏威夷群岛等（!"#$%&’(%)( *(+ 全序列，并对其结构进行分析，结果报道如下。所得
,))&’，-./0），我国主要分布在南方 . 省区（湖南、广 序列已在 W’(T*(5 登录，此为 W’(T*(5 第一次收录
东、广西、海南、福建、四川、云南、贵州、台湾）（1#’2 和公布的由中国学者测定的昆虫9&1:;全序列。
*(+ 3*(4)45，-..6；汪兴鉴，-../；侯伯华和张润杰，
7008）。 ! 材料与方法
动物9&1:; 属母系遗传，是共价闭合的双链
1:;分子，核酸序列和组成比较保守，基因的排列 !"! 供试虫源和标本保存
顺序比较稳定而且紧密，无重组和单拷贝。由于其 桔小实蝇虫源来自 7008 年 J 月广东省深圳市
结构和进化上的特点，9&1:;已成为研究动物起源 龙眼果实上的幼虫，经实验室饲养至成虫，成虫羽化
进化以及群体遗传分化的理想对象（<$=$>*( !" #$?， 后饥饿-A7天，处死后用无水酒精保存标本。
-..-；张亚平和施立明，-..7；施伟和叶辉，7006；朱 !"# 基因组$%&提取
振华等，7008）。昆虫 9&1:; 大小约为 -8@6 A -/@B 单头成虫用于基因组1:;的提取，1:;提取和
5C，其基因组大小的变化受;DEF#$4"区长度变化的 模板质量检查方法参照 XP等（7008）。1:;样品置
影响十分显著（G)>%&’(")>9’，-..7）。;D EF#$4"区的 于R60Y冰箱保存、备用。
长度最短为B.. CH，最长达6 /0- CH，两者相差6 707 !"’ 引物设计
CH，前者见于 %&’()*$!+’,’*- .!&"/()’，后者见于黑尾果 通用引物设计参照 U$9)( 等（-..6），同时比对
蝇 0&*/*+)’$# 1!$#-*.#/"!（& I"*(= *(+ 3’2$&&，-..J）。 已公开报道的地中海实蝇 6? (#+’"#"# 和油橄榄果
昆虫线粒体基因组由 7 个 #K:; 基因（>#K:; 和 实蝇7? *$!#! 的9&1:;全序列中的同源片段，引物
%#K:;）、77 个 &K:; 基因、-B 个蛋白编码基因［!L&C 部分位点做适当调整。通用引物不能全部测定桔小
基因（细胞色素 2 基因，4L&)4"#)9’ )M$+*%’ 2）， 实蝇线粒体基因组全序列，部分引物需自行设计。
;EN*%’/ 和 ;EN*%’O（;EN 酶亚基基因 / 和 O，;EN 本研究共用引物77对，引物序列如表-所示。引物
%L(&"*%’ %PCP($&% / *(+ O），!Q!、!Q"和 !Q#（细胞 分别由上海英骏生物技术有限公司和北京奥科生物
色素氧化酶亚基基因! A #，4L&)4"#)9’ )M$+*%’ 技术有限公司合成。
%PCP($& ! R #），:1-A/ 和 :16S（:;13降解酶基 !"( )*+反应体系及反应条件的优化
因-A/ 和 6S，:;13 +’"L+#)=’(*%’ %PCP($& -R/ *(+ N!K反应的扩增体积为78 S，包含-ZN!K缓
$
6S）］，共BJ个基因和-个包含复制启动子的非编码 冲液，7 99)>[S \=7D，0@7 99)>[S +:EN，上下游引物
区（;DEF#$4"区）组成（G)>%&’(")>9’ *(+ !>*#L，-.O8； 各0@7 9)>[S，- ] E*^酶（E*5*#*），模板1:; 70A60
$
G)>%&’(")>9’，-..7；T’*#+ !" #$?，-..B；UH*()% !" #$?， (=。少数引物在进行 N!K 扩增反应时对模板 1:;
7000；:*#+$ !" #$?，700B；T*’ !" #$?，7006）。;>)($和 和引物的量作适当调整。
;&&*#+（$ -.J-）将9&1:;两条链中密度较小者命名为 N!K扩增条件为.6Y预变性.0 %，共运行B0个
轻链（S链），另一条命名为重链（3链）。考虑到昆 循环。每一循环包括：.8Y变性B0 %，88Y退火B0 %，
虫9&1:; 没有明显的 S 链与 3 链之分，U$9)( 等 J7Y延伸B0 %，最后一次循环后J7Y延伸8 9$(。部
（-..6）根据昆虫 9&1:;中多数基因都是从一条链 分引物通过改变退火温度以达到最佳扩增效果（表
上转录的特点，将这一条链定义为 V链，另一条链定 -）。N!K产物在-@7_琼脂凝胶上电泳检测扩增效
义为:链。 果。
自G)>%&’(")>9’和 !>*#（L -.O8）第一个报道了果 !", )*+产物纯化回收
蝇 0&*/*+)’$# 3#452# 9&1:;全序列以来，W’(T*(5已 N!K产物纯化分两种情况。一种是 N!K 产物
收录了 O0 余种昆虫 9&1:; 全序列，其中双翅目昆 琼脂糖凝胶电泳结果没有杂带，用 ‘a;^P$45 N!K
虫有-8个种。在双翅目实蝇科昆虫中，地中海实蝇 NP#$b$4*&$)(试剂盒（德国，‘a;Wc:）纯化 N!K 产物；
6!&#"’"’/ (#+’"#"#（UH*()% !" #$?，700B，W’(T*(5序列号 另一种是 N!K 产物电泳结果有杂带，用 W’>
:! 000O8J）和油橄榄果实蝇 7? *$!#（! :*#+$ !" #$?， cM&#*4&$)(试剂盒（德国，‘a;Wc:）纯化。
R
700B，W’(T*(5 序列号 :! 008BBB）的线粒体基因组 !"- 序列测定
R
全序列已有报道。我们利用昆虫通用引物，通过 N!K产物经纯化以后，即可进行直接测序，测序
N!K产物直接测序和克隆，测定了桔小实蝇 9&1:; 反应均在1:;自动测序仪（美国，;TaBJB0）上进行。
V期 徐浪等：桔小实蝇线粒体基因组全序列及其分析 >;>
大多数引物扩增得到的 !"# 产物均用直接测序方 @?， ’!+：;?(/222/8828/"/"2/2/8//2/"(@?）测
法获得目标序列片段。所有测序重复 $%&次以获 序。
得较为准确的序列。 本研究以渐进测序的方式将桔小实蝇线粒体基
引物 ’#()($*+$&,-&(-(&*+ 扩增得到 $&’ .#-/ 因组全序列分段测出，其测序策略见图 $。图中线
至-0&区域（包括/1 2(.345区）采用克隆测序。将 条下方数字表示用表$中对应序号引物测出的0-/
目标片段经 !"##6酶切后连接到 789:(;<（= 1）载 片段，单线代表直接测序片段，双线代表克隆测序片
体上，重组质粒载体在进行亚克隆以后，用载体上的 段。共利用引物&&对，分&&段测序。
通用引物 2>,’!+（2>：;?(2//2/"8/"2"/"2/2/"(
表! 桔小实蝇线粒体基因组全序列"#$扩增引物一览表
%&’()! *+,-./"#$01+2)1,/.1 !"#$%&#’%"(&%)"*+) 2-3456.20()-)7)8.2)
上游引物 序列（;?!@?） 位置4 下游引物 序列（;?!@?） 位置" 退火温度 长度"
AB.CD.E7.3FG.’GHIGJ4GK（;?!@?） !BK3L3BJ #GMG.KG7.3FG. ’GHIGJ4GK（;?!@?） !BK3L3BJ 2F（N）OGJPL5（Q7）
$ 2:()(&R+D 8"2//22//8"2/"288822"/2 &RST&@$ "$(-($;+RD 2822""2/"2/22""88"2"/ $+R$T$+&$ ;RN $@$>
& 2U()($*+RD 2/"//2"2/2"8""2///"22"/8"" $;R@T$;&V "$(-(&@&SD /"282///2/2/28/28/8"2"/ &@SRT&*$& ;RN S$V
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$R -;()(>*S>Q 8"2"2"22/822/2/8"28" >;S$T>+$R -*(-(V>$VD 8"22/22"/2"/8228"2"/ V>*STV>+V ;+N $$$+
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$& -*()(VS**D 88/8"22"//"/28/8"222 VS;+TVS>; "Y(-($RS&RD 2""2"////28/2/22282""2"/ $RS*;T$RS+V *VX+N $V+;
$@ -O()(S;@@Q 8282/"8//22/2/8///"2/// S+&VTS+;R -+(-($R@@VQ ///22822/22/88222822888 $R*@&T$R*;* ;;N VRS
$* "Y()($R+$&D ""//22//2/222"/8"/28/28/// $R+$&T$R+@> "Y(-($$@&VD /8"///2//////2/2"/22" $$@;@T$$@>@ ;RN >$*
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$+ "Y()($$;*;D /"/28//2288/8"/"8/""/82 $$;*VT$$;>R -$(-($&;S;D 8288"222222//"2"222288//"8 $&+$$T$&+@+ ;&XVN $RV@
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$V O#()($&VV>D ""882"28//"2"/8/2"/282 $&VV&T$&SR@ O#(-($@>VRQ /""228282/2"/888222/2 $@SR*T$@S&* ;VN $RR*
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&$ ’#()($*+$&D /8882/2"2//2""2/8222 $*+$VT$*+@> -&(-(&*+Q /828/22/88822""2822/22/ @RVT@@R ;RN $>$@
&& ’#()($*V@RQ /2"//2//2////22"///8"" $*S@RT$*S;$ /2(-($;>>SQ "/222//8288282/282//" $;V&RT$;V*R ;RN V$>
D’3FBJ等设计引物（$SS*）；Q自行设计引物；4在桔小实蝇线粒体基因组全序列中的对应位置（本研究）；"该对引物测得的片段长度。D
0GK3PJGEQZ’3FBJ（$SS*）；Q’G[=(EGK3PJGE；425G7BK3L3BJ4B..GK7BJE3JPLB $\ %#&’()*’ FL0-/（L53KCB.]）；" "B..GK7BJE3JPKGHIGJ43JP[GJPL5\
图$ 桔小实蝇FL0-/测序策略
A3P\ $ ’GHIGJ43JPKL.DLGP3GKB= $("+&#",&(%#&’()*’ FL0-/
!9: 345序列数据处理及比较 序图谱和重复测序@ 次以上，以出现概率高的碱基
用0-/KLD. 软件中的 9E3LKGH 程序进行序列编 作为该位点的碱基。将本研究获得的桔小实蝇
辑，用’GHFDJ程序将所测出的相邻序列进行自动拼 FL0-/全序列与油橄榄果实蝇和地中海实蝇的
接，成为完整的线粒体基因组全序列。因测序误差 FL0-/全序列进行比对分析。
造成相同位点碱基不一致的片断，需要人工核对测
5"* 昆虫学报 -#$"./$&0&*&1+#"2+/+#" "+卷
-?K和 AF’(N7=<），从 ’链编码的基因有 ’&!、’&4、
! 结果与分析 ’&4V、’&"、?<F’(、@<F’( 和 # 个 AF’( 基因（包括
AF’(N-?/、AF’(NPI@、AF’(NS<B、AF’(N7I<、AF’(NS=.、
!"# 桔小实蝇$%&’(基因组结构 AF’(NV.KNPW’、AF’(NY9@ 和 AF’(NZ1?、AF’(NX.<N
桔小实蝇线粒体基因组全长!" #!" $%，为一环 WP’）。
形的双链 &’(（图 )）。其长度比油橄榄果实蝇
表! 桔小实蝇线粒体基因组分区
（!" *!" $%）长 !++ $%，比地中海实蝇（!" #*+ $%）短 )*+,- ! .-/-0-123/435 !"#$%&#’%"(&%)"*+) $2%3673/802*,1-/3$-
," $%。桔小实蝇线粒体基因组全序列已录入 基因[控制区 位置" !! 基因[控制区 位置"
-./.[PB/A<B?<.:9B/ SB@9A9B/ !!-./.[PB/A<B?<.:9B/ SB@9A9B/
-./01/2数据库，序列号为&3*4"5"#。
AF’(NT?. !\,, !! AF’(N(@/ ,!,,\,)6+
AF’(N-?/ ,4\!6)!! AF’(NX.<N(-’ ,)6!\,)#*
AF’(NU.A !##\),5!! AF’(N-?K ,)##\,6,"
’&) ),*\!)#+!! AF’(NS=. ,6*4\,44*
AF’(N7<% !6+!\!6,!!# ’&" ,44#\*!,*
AF’(NPI@ !6,)\!4)!!4 AF’(NY9@ *!*4\*)4#
AF’(N7I< !45+\!"6!!, ’&4 *)"+\#"#+
PQT !"6"\6+,!!# ’&4V #"*4\#**+
AF’(NV.KNWWF 6+5+\6!6!!" AF’(N7=< #**6\##45
PQTT 6!4+\6*)!!# AF’(NS<B ##4*\!++!6
AF’(NVI@ 6*64\6#+!!4 ’&, !++!,\!+"6#
AF’(N(@% 6#+"\6#5!!! PIA$ !+"4+\!!,54
(7S* 6#5)\4!6!!6 AF’(NX.<NWP’ !!,5"\!!54!
(7S, 4!)5\4*+!!6 ’&! !!5"5\!),#,
PQTTT 4*+4\""#!!) AF’(NV.KNPW’ !)5+5\!)55!
AF’(N-?I ",+)\",,!!, ?<F’( !)55)\!4!+4
’&6 ",,5\,+!!!* AF’(NZ1? !4!+"\!4!5,
AF’(N(?1 ,+!#\,+*!!6 @<F’( !4!55\!4#,,
AF’(N(<: ,+#!\,!"!!4 (M7N<9>=区 !4#,5\!"#!"
图) 桔小实蝇线粒体&’(基因组遗传图谱 "在!; (&%)"*+)线粒体基因组全序列上的对应位置（本研究）。"7=.
%B@9A9B/>B<<.@%B/D9/:AB !; (&%)"*+) EA&’(（A=9@HB<2）;
89:; ) -./.A9>E1%BCA=.E9AB>=B/D<91?:./BE.BC
!"#$%&#’%"(&%)"*+) 昆虫EA&’(中，AF’(NX.（< WP’）基因大多位于 O
图中的白色箭头、灰色箭头和箭头之间所夹竖线分别代表蛋 链。但在桔小实蝇 EA&’( 中，该基因发生倒位，转
白编码基因、<F’(基因和AF’(基因。正数表示基因间的间
隔数目，负数表示基因重叠的数目。G=9A. 1<<BH@，:<.I 1<<BH@ 移到 ’链上。这一现象与油橄榄果实蝇相似，而地
1/D$1<@@=BH%<BA.9/>BD9/:，<F’(1/DAF’(:./.@，<.@%.>A9J.?I； 中海实蝇中无类似现象。
%B@9A9J./KE$.<@ 9/D9>1A. A=. D9@A1/>. BC :./.@ 1A :./. LK/>A9B/@；
!"! 桔小实蝇$%&’(基因组核苷酸组成
/.:1A9J./KE$.<@9/D9>1A.A=.BJ.<?1%BC:./.@1A:./.LK/>A9B/@;
在桔小实蝇线粒体基因组全序列中，各碱基的
桔小实蝇 EA&’( 由 )) 个 AF’(，) 个 <F’(，!6 总含量分别是 6#]6^(，!,])^P，!+])^-，64]6^
个蛋白编码基因以及一个包含起始复制和转录的控 7，(7总含量高达56],^，表现出昆虫线粒体基因组
制区（(M7N<9>=区）组成（表)）。从 O链编码的基因 中著名的“(M 7偏好性”（P<B_9.< 1/D P<B_9.<，!##6；
有PQ! R "、’&)、’&6、’&,、(7S,、(7S*、PIA, 和 X9EB/ ’$ "*;，!##4）。其中，!6 个蛋白编码基因的
!6 个 AF’( 基因（包括 AF’(NT?.、AF’(NU.A、AF’(N (7总含量为 5!])^，<F’( 中为 55]*^，( M 7N<9>=
7<%、AF’(NV.KNWWF、AF’(NVI@、AF’(N(@%、AF’(N-?I、 区更是高达**]!^。
AF’(N(?1、AF’(N(<:、AF’(N(@/、AF’(NX.<N(-’、AF’(N 图6所示为桔小实蝇线粒体基因组除 AF’(外
图6 桔小实蝇线粒体基因组蛋白编码基因(7含量示意图
89:; 6 -<1%=9>1?<.%<.@./A1A9B/BCA=.%.<>./A1:.9/(1/D7BC%<BA.9/>BD9/::./.@BC !"#$%&#’%"(&%)"*+) EA&’(
.期 徐浪等：桔小实蝇线粒体基因组全序列及其分析 +/)
的其他!"个区域#$含量示意图。由图可以看出，% 基因序列以CD!基因序列最多，因此本研究对桔小
链中的蛋白编码基因具有近似的 #$ 含量，其平均 实蝇及其近缘种 CD!基因的相似度进行比较（表
值为分别为&’()*和&+("*，而 ,链中的蛋白编码 &）。在进行比较的 !/ 个种中，包括小条实蝇属
基因的#的含量明显高于 $的含量，两者数值分别 %!&#"’"’(和果实蝇属 )#*"&+*!&#。在 )#*"&+*!&# 属 !-
是-.(-*和’"(/*。 种实蝇中，除油橄榄果实蝇是 ,#*-$-( 亚属，瓜实蝇
!"# 桔小实蝇线粒体基因组 $%&’结构分析 和南瓜实蝇是 .!-/+0#*-( 亚属以外，其余!!种均为
在桔小实蝇012,#的’’个 13,#中，除亮氨酸 )#*"&+*!&# 亚属。
（456）和丝氨酸（758）所对应的 13,#有 ’个以外，其 桔小实蝇与同一亚属（果实蝇亚属 )#*"&+*!&#）
他的氨基酸都只有一个 13,# 与之对应。’! 个 的其他近缘种之间的同源性很高，其中又以与杨桃
13,#均有规则的三叶草结构，仅 13,#975（8 #:,）无 实蝇、芒果实蝇、木瓜实蝇、菲律宾实蝇的同源性最
2臂，由.个核苷酸取代了该位置，这是节肢动物线 高，均在)&(+*以上（表 &）。在形态学分类上，这 /
粒体基因组的一个普遍特征（,;8<= !" #$>，’??&）。 个种属于桔小实蝇复合种团（)> 0+&(#$’( EF0GH5I）
!"( 桔小实蝇)$*&’全序列在分子系统进化研究 （285J ;@< K;@EFEB，!))-）。桔小实蝇与另外-个不
中的应用 同亚属的物种之间的同源性都低于 ./*，其中与南
由于:5@A;@B中收录的桔小实蝇近缘种线粒体 瓜实蝇的同源性最低，只有.’()*。
表# 桔小实蝇及+,-./-0收录近缘种12!基因的相似度（对角线上）和分歧度（对角线下）
3/45,# 67)75/87$9（/4:;,<7/=:-/5）/-<<7;,8=,->,（4,5:?<7/=:-/5）:@12! =,-,A:@ !"#$%&#’%"(&%)"*+)
/-<$B,8,5/$,<AC,>7,A<,C:A7$,<7-+,-./-0
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!/ !"(’ !"(" !"(! !/(" !"() !)(& !"() !"(’ !"(’ !.(/ ’!(. !+(& !-(! !-(.
!：杨桃实蝇 )#*"&+*!&#*#&#12+$#!；’：番石榴实蝇 )> *+&&!*"#；&：桔小实蝇 )> 0+&(#$’(；-：短条面包果实蝇 )> 3&#-!43!$0’；/：香蕉实蝇 )>
1-(#；"：小昆士兰实蝇 )> 4!+5-1!&#$’(；+：芒果实蝇 )> +**’6’"#$’(；.：木瓜实蝇 )> 6#6#7#!；)：菲律宾实蝇 )> 65’$’66’4!4(’(；!?：昆士兰实蝇
)> "&7+4’；!!：三带实蝇 )> -12&+(#；!’：油橄榄果实蝇 )> +$!#!；!&：瓜实蝇 )> *-*-&2’"#!；!-：南瓜实蝇 )> "#-；!/：地中海实蝇 %!&#"’"’(
*#6’"#"#>
判断相互之间亲缘关系的远近（,;8<= !" #$>，’??&）。
# 讨论 目前，实蝇的分类以成虫形态学特征为主要鉴
定依据，!/ 种实蝇 CD!基因序列比对分析结果表
在桔小实蝇线粒体 2,# 中，#$ 含量近似的基 明，果实蝇属 )#*"&+*!&# 亚属内 CD!基因同源性大
因都是位于 %链上，#$含量差异很大的基因都位于 都高于不同亚属间，这一结果与形态学分类的结果
,链上，而且在油橄榄果实蝇和地中海实蝇中也有 基本一致（表 &）。但由于实蝇种类多，形态分类还
类似的现象。其可能的原因是受进化压力的影响， 没有统一标准，各家意见不一，有些种类的分类地位
自然选择对蛋白编码基因施加不同的替代压力，使 较为混乱，如寡鬃实蝇族（2;E=@=）内属或亚属之间的
得不同区域产生碱基选择的偏好性。这一现象也许 关系。同时，实蝇新属和新种描述还在增加（285J，
会对分子系统发生的研究产生积极的作用，将相关 !).)；K;@EFEB ;@< 285J，’??&），特别是一些复合种团
物种的线粒体单一基因进行分析，由其碱基组成来 的分类还存在争议，如桔小实蝇复合种团中的木瓜
9W% 昆虫学报 5-"#32"’8’$’1)-#?)2)-# &%卷
实蝇和杨桃实蝇可以交配，产生后代；有的种类需借 （H"==/#）：7EWS:
助分布和寄主才能区分。桔小实蝇复合种团的区分 .31B0BY)V，)4>QK+J，$%%R: +1>QC>1"?3151>Q?=>B2>?，B0’X213(201?
3154>B045?0@M>=A42(213>（)2=(>43：M>=A42(253>）@40’+"?(43/23，*>Q
需借助更能反映实蝇生命本质的分子生物学方法
Z>3/315315(A>H0"(A[3B2@2B# 5.7"# 32"’8’$#，R%：7L7E7&S:
（!" !" #$#，$%%&）。桔小实蝇线粒体基因组全序列
.0"F.，ZA31CKG，$%%&: [0(>1(23/52?(42X"(201?0@(A>@4"2(@/N (#-",’-!,#
的测定，为实蝇分子进化和分子鉴定研究提供了更
>’,7#$)7（)2=(>43：M>=A42(253>）21,A2133?=4>52B(>5XN,VJT;\# 5-"#
多的标记基因。 3-’$’1)-#?)2)-#，$（& 9）：7&W8E7&9L［: 侯柏华，张润杰，$%%&:
实蝇’()*+基因序列数量仍有限，限制了实蝇 基于,VJT;\的桔小实蝇在中国适生区的预测# 生态学报，&
分子进化研究。而且部分已知序列可能需要进一步 （9）：7&W8E7&9L］
V231C6.，,A>1 G.，!31C G]，."31C G,，G2 ];，$%%R: +5D31B>? 21
修订，如油橄榄果实蝇和地中海实蝇 ’()*+全序列
4>?>34BA 0@ (#-",’-!,# >’,7#$)7（.>15>/）21 ,A213# 32"’8’$’1)-#$
均已两次修订，因此，应用某些 ’()*+ 序列特异性 %’.,2#$’/3#7"@0)2#，7（$ $）：8%E8S［: 梁光红，陈家骅，杨建全，
位点进行分子种类区分时，还需反复实验验证该位 黄居昌，季清娥，$%%R: 桔小实蝇国内研究概况# 华东昆虫学
点的稳定性，以排除个体基因突变或者测序误差的 报，7（$ $）：8%E8S］
影响。同时应用单一基因进行系统进化研究仍有局 V21 MG，Z>1C V，V231C 6^，V" !!，F21 H!，$%%&: ;@@>B(? 0@
>1(0’0=3(A0C>12B 1>’3(05>? 01 (A> 042>1(3/ @4"2( @/N， (#-",’-!,#
限性，如单一 ,-!基因不适用于桔小实蝇、杨桃实
（(#-",’-!,#）>’,7#$)7（.>15>/）# 5-"# 32"’8’$’1)-# ?)2)-#，LS（&）：
蝇、木瓜实蝇、菲律宾实蝇、芒果实蝇等复合种团以
9RWE9L7［: 林进添，曾玲，梁广文，陆永跃，宾淑英，$%%&: 病
及桔小实蝇不同地理种群的系统分析（余道坚， 原线虫对桔小实蝇种群的控制作用# 昆虫学报，LS（&）：9RWE
$%%&）。要解决实蝇科昆虫中类似桔小实蝇复合种 9L7］
团等低级阶元的系统进化问题，需要寻找进化速率 *3452U，,343=>//2+，)3//32K，$%%R: MA>’2(0BA015423/C>10’>0@(A>0/2D>
@/N (#-",’-!,#’$!#!：(Q0A3=/0(N=>?@40’52?(31(C>0C43=A2B3//0B3(201?#
更快的基因（如 *+). 亚基基因）或片段（微卫星
:27!-"&’$# ()’$#，7（$ W）：W%&EW77:
)*+）等，甚至同时应用多个进化速度不等的基因进
[31 Z[，Z>1C V，^>1 H!，$%%W: T2B40?3(>//2(> )*+ =0/N’04=A2?’ 21
行遗传分析。
52@@>4>1( =>?(2B25>_4>?2?(31( ?(4321? 0@ (A> 042>1(3/ @4"2( @/N (#-",’-!,#
>’,7#$)7（.>15>/）（)2=(>43：M>(42=A2(253>）# 5-"#32"’8’$’1)-#?)2)-#，
!" !"#$%&’()*+,-()./01 L（8 &）：S9LES99［: 潘志萍，曾玲，温硕洋，$%%W: 桔小实蝇抗性
品系的微卫星)*+分析# 昆虫学报，L（8 &）：S9LES99］
23456789:;<=>?@ABCDEFG
HA2^，!>.，$%%L: 6>1>(2B52@@>4>1(23(20121@2D>C>0C43=A2B=0="/3(201?0@
参 考 文 献（!"#"$"%&"’） (A> 042>1(3/ @4"2( @/N， (#-",’-!,# >’,7#$)7（.>15>/）（)2=(>43：
M>=A42(253>）21 !"1131 =40D21B># 5-"# 32"’8’$’1)-# ?)2)-#，L9（R）：
+/012!，+((34526，7897: ;<=4>??201 0@ (A>’2(0BA015423/ C>10’>21.>/3 RSLERSS［: 施伟，叶辉，$%%L: 云南桔小实蝇五个地理种群的遗
B>//?："# ;D25>1B> @04 B0’=/>(> (431?B42=(201 0@ ’2(0BA015423/ )*+# 传分化研究# 昆虫学报，L（9 R）：RSLERSS］
%# &’$# ()’$#，&&：$&7E$9%: H2’01 ,，U43(2 U，F>BY>1X3BA +，,4>?=2 F，V2" .，K00Y [，788L:
F3>GH，I2’J，H0A1.)，G21FK，$%%L: MA>’2(0BA015423/C>10’>0@(A> ;D0/"(201，Q>2CA(21C，315 =AN/0C>1>(2B "(2/2(N 0@ ’2(0BA015423/ C>1>
@24>@/N，*+,’-’!$)#,./#：B0’=/>(>)*+?>O">1B>，C>10’>04C312P3(201， ?>O">1B>? 315 3 B0’=2/3(201 0@ B01?>4D>5 =0/N’>43?> BA321 4>3B(201
315=AN/0C>1>(2B313/N?2?Q2(A0(A>421?>B(?# &’$# *0+$’1!2!"# 34’$#， =42’>4?# 522# 32"’8’$# ?’-# 58#，S9：7E&7:
R$：89SE8S&: H=310?V，I0"(40"’X3?6，I0(?N@3Y2?T，$%%%: MA>’2(0BA015423/ C>10’>
F>345,F，T2// )，,0//21? U.，788R: MA> ’2(0BA015423/ C>10’> 0@ (A> 0@ (A> T>52(>4431>31 @4"2( @/N，@!,#")")7 -#6)"#"## :27!-" &’$# ()’$#，
’0?O"2(052’60!$!71#89)#!：)*+?>O">1B>，C>10’>04C312P3(201，315 8：7R8E7LL:
B0’=342?01?Q2(A’2(0BA015423/?>O">1B>?0@0(A>421?>B(?# :27!-"&’$# ‘2C2/31V，H(01>Y21C T，.34=>1521C .，.3QY>? I，^2/?01 +,，7887:
()’$#，$：7%RE7$L: +@42B31 =0="/3(201? 315 (A> >D0/"(201 0@ A"’31 ’2(0BA015423/ )*+#
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32"’8’$#，（& $）：797E78$: ^31C\G，788W: MA> @4"2( @/2>?（)2=(>43：M>=A42(253>）0@ (A> ;3?( +?231
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56)78!$$)/!,#：B0’=/>(>?>O">1B>315 C>10’>04C312P3(201# <!2!")-7， 788W: 东亚地区双翅目实蝇科昆虫# 动物分类学报，$7（增刊）：
7RR：89E779: 7ERRS］
)4>QK+J，78S8: MA>(40=2B3/@4"2(@/2>?（)2=(>43：M>=A42(253>：)3B213>）0@ ^0/?(>1A0/’> )K，,/34N )-，78S&: H>O">1B> >D0/"(201 0@ C,’7’60)$#
(A>+"?(43/3?231 315 -B>31231 K>C201?# &!8# =># &.7#，$W：7E ’2(0BA015423/)*+# <!2!")-7，7%8：9$&E9LL:
&$7: ^0/?(>1A0/’> )K，788$: +12’3/ ’2(0BA015423/ )*+：?(4"B("4> 315
)4>QK+J，.31B0BY)V，788L: MA>(#-",’-!,#>’,7#$)7B0’=/><0@@4"2(@/2>? >D0/"(201# :2"# ;!4# @+"’$#，7L7：79RE$7W:
（)2=(>43：M>=A42(253>：)3B213>）21 +?23# (.$$# 32"’8’$# ;!7#，$ !")G，,A>1ZV，ZA31CKG，!21^!，$%%&: K>3/_(2’>O"3/2(3(2D>[,K@04
>期 徐浪等：桔小实蝇线粒体基因组全序列及其分析 SM;
!"# $%&’#(!$)% *%+ $+#%!$,$(*!$)% ), !"#$%&#’%" ()*+*((*,’,-*- *%+ 基，刘金耀，陈华忠，高泉准，孙国坤，洪赞侨，孙德华，陈加
!"#$%&#’%"&##*(*$"+*-（-$’!#.*：/#’".$!$+*#）0&$%123456.##%*&&*78 福，;RR>? 桔小实蝇生物学特性8 华东昆虫学报，（S A）：M9=M>］
."//+’-!0++8 1&&+8，9:：;<:=;<>? O"*%13H，2"$UF，;RRA? F$!)(")%+.$*E-XJ’)E7K).’"$&K&$%*%$K*E&：*
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（-$’!#.*：/#’".$!$+*#）4*&#+ )% F)E#(0E*. /#("%$G0#&8 H"- /"#&$&， ;RRA? 动物线粒体 -XJ多态性的研究概况8 动物学研究，;:
6.*+0*!#2("))E),!"#I"$%#&#J(*+#K7),2($#%(#&，4#$L$%18 ;;=;M， （:）：A>R=AR>］
:A=9N［? 余道坚，A<<9? 检疫性实蝇分子生物学快速鉴定技术的 O"0OP，3#P，O"*%1O3，A<<9? F)E#(0E*.$+#%!$,$(*!$)%),&$Y !"#$%&#’%"
研究8 中国科学院研究生院博士学位论文8 ;;=;M，:A=9N］ &’#($#&（-$’!#.*：/#’".$!$+*#）W*&#+ )% K!-XJ8 9#$" 5,$&2&+&6*#"
O"*%1-，P#Q$!!6F，;RRS? B%&#(!K$!)(")%+.$*E()%!.)E.#1$)%：J.#T$#Q), 3*,*#"，N（> :）：:>M=:R<［? 朱振华，叶辉，张志英，A<<9? 基于
$!&&!.0(!0.#，#T)E0!$)%*%+0&#,0E%#&&$%#T)E0!$)%*.7&!0+$#&8 !*&#)’28 K!-XJI7!W的六种果实蝇的分子鉴定（双翅目：实蝇科）8 昆虫
34-$8 5#&+8，A（9 A）：RR=;A<? 学报，N（> :）：:>M=:R<］
O"*%1C3，U$%O@，U$0@3，I"#%PO，6*)CO，20% 6V，P)%1OC，20%
-D，I"#% @D，;RR>? 2!0+7 )% !"# W$)E)17 ), ).$#%!*E ,.0$! ,E78 （责任编辑：袁德成）
5,$&2&+&6*#"+7&0%,"+&/5"-$8)*,"，（S A）：M9=M>［? 张清源，林振