leonardo alejandro rodríguez lópez

41 Pages·2015·1.07 MB·Spanish

2009A-2013A 005350891
UNIVERSIDAD DE GUADALAJARA
CENTRO UNIVERSITARIO DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y
AGROPECUARIAS

Identificación molecular de levaduras de la tuba

TRABAJO DE TITULACIÓN EN LA MODALIDAD DE
TESIS PROFESIONAL

PARA OBTENER EL TITULO DE

LICENCIADO EN BIOLOGÍA

PRESENTA
LEONARDO ALEJANDRO RODRÍGUEZ LÓPEZ

Las Agujas, Zapopan, Jalisco, Mayo del 2015
2009A-2013A 005350891
UNIVERSIDAD DE GUADALAJARA
CENTRO UNIVERSITARIO DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y
AGROPECUARIAS

Identificación molecular de levaduras de la tuba

TRABAJO DE TITULACIÓN EN LA MODALIDAD DE

TESIS PROFESIONAL

PARA OBTENER EL TITULO DE

LICENCIADO EN BIOLOGÍA

PRESENTA
LEONARDO ALEJANDRO RODRÍGUEZ LÓPEZ

DIRECTOR DE TESIS:
Dr. José Armando Arias García
ASESORA DE TESIS:
Dra. Olivia Rodríguez Alcántar

Las Agujas, Zapopan, Jalisco, Mayo del 2015

“Si una persona es perseverante, aunque
sea dura de entendimiento, se hará
inteligente; y aunque sea débil se
transformará en fuerte.”
Leonardo Da Vinci
DEDICATORIA
A mi madre Marina Patricia López Carrillo y hermano Víctor Hugo Rodríguez López que siempre
me apoyaron en mis proyectos y en mi carrera.
Este es el resultado de la perseverancia y dedicación por lo que me hace feliz.

A mi familia en general que siempre tuvo fe en mí de que fuera alguien en la vida.
AGRADECIMIENTOS

A todos mis maestros por su paciencia, tiempo y sus conocimientos que herede y que haré
trascender en mi vida.

A mi director de tesis, el Dr. Armando Arias García, por su dedicación, por la confianza en mí
para llevar a cabo este proyecto y por su poyo en los momentos difíciles.

A mi asesora de tesis, la Dra. Olivia Rodríguez Alcántar de la cual siempre tuve el apoyo
incondicional para ayudarme en todo momento.

A mis sinodales Dr.Conrado Soto Velazco, Dra. Josefina Casas Solís y M.C. Margarita Bonilla
Moreno, por el tiempo invertido y atenciones personalizadas que tuvieron conmigo.

A la Dra. Anne Santerre a la cual le debo mi pasión por la biología molecular y quien me apoyo
durante la fase experimental de esta tesis al facilitarme equipo faltante para mi investigación.

A mi tutor, el Dr. Ramón Reynoso Orozco por su apoyo y consejos en toda mi carrera, también
quiero agradecerle por enseñarme a seguir el buen camino de la ciencia.

Al Dr. Ricardo Solís Zamora por siempre apoyarme en todo momento durante mi investigación.

Finalmente, a todas las personas que me apoyaron en tiempos difíciles y en tiempos felices.
ÍNDICE
INTRODUCCIÓN........................................................................................................................................ 1
ANTECEDENTES ...................................................................................................................................... 1
1. QUÉ ES FERMENTACIÓN ........................................................................................................................ 1
1.2 MICROBIOLOGÍA Y TIPOS DE FERMENTACIONES .................................................................................... 2
1.3 IMPORTANCIA DE LAS FERMENTACIONES TRADICIONALES E INDUSTRIALES ............................................ 3
2. TUBA ................................................................................................................................................... 3
2.1 QUÉ ES LA TUBA Y SU ORIGEN ............................................................................................................. 3
2.2 CÓMO SE ELABORA LA TUBA ............................................................................................................... 4
2.3 IMPORTANCIA ECONÓMICA DE LA TUBA ................................................................................................ 5
2.4 MICROBIOLOGÍA DE LA TUBA ............................................................................................................... 5
3. LEVADURAS ......................................................................................................................................... 6
3.1 QUÉ SON LAS LEVADURAS .................................................................................................................. 6
3.2 PAPEL DE LAS LEVADURAS EN LAS FERMENTACIONES .......................................................................... 6
3.3 DIVERSIDAD DE FERMENTACIONES TRADICIONALES E INDUSTRIALES ..................................................... 7
4. IDENTIFICACIÓN DE LEVADURAS ............................................................................................................ 8
4.1 TÉCNICAS CONVENCIONALES .............................................................................................................. 8
4.2 TÉCNICAS MOLECULARES ................................................................................................................... 9
4.2.1 Secuenciación de los genes ribosomales ................................................................................. 9
4.2.2 RFLPs ...................................................................................................................................... 10
4.2.3 PCR-DGGE ............................................................................................................................. 10
4.2.4 PCR en tiempo real ................................................................................................................. 11
4.3 IMPORTANCIA DE LAS TÉCNICAS MOLECULARES ................................................................................. 11
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA..................................................................................................... 12
JUSTIFICACIÓN ...................................................................................................................................... 13
HIPÓTESIS .............................................................................................................................................. 14
OBJETIVO GENERAL ............................................................................................................................. 15
OBJETIVOS ESPECÍFICOS: ............................................................................................................... 15
MATERIALES Y METODOS ................................................................................................................... 16
1. MEDIOS DE CULTIVO: ...................................................................................................................... 16
A) YPD (Extracto de Levadura, peptona con dextrosa) ................................................................ 16
B) GPYA (Glucosa, Peptona, Extracto de Levadura con Agar) ................................................... 16
C) GPYA con cloranfenicol ........................................................................................................... 16
2. AISLAMIENTO DE CEPAS .................................................................................................................. 16
3. IDENTIFICACIÓN DE LEVADURAS POR MEDIO DE RFLPS .................................................................... 17

i
RESULTADOS ......................................................................................................................................... 19
DISCUSIÓN .............................................................................................................................................. 22
CONCLUSIÓN ......................................................................................................................................... 24
LITERATURA CITADA ............................................................................................................................ 25
ANEXO ..................................................................................................................................................... 32
ANEXO 1. ............................................................................................................................................. 32

ii
INTRODUCCIÓN

El arte de producir bebidas fermentadas, se ha desarrollado a través de los años y convertido
mayoritariamente en una tecnología. Las materias primas que se utilizan en las bebidas
fermentadas son sustratos ricos en azúcares, los cuales son procesados por levaduras y como
producto final etanol, a este proceso se le llama fermentación (Waites et al.,, 2001; Wainwright,
1995). Entre las fermentaciones están los que son a base de jugo de piña como el tepache, a
base de granos como el pozol, el tejuino y otros preparados como la tuba a partir de la savia de
una planta (Wiseman, 1988).
La tuba es una bebida introducida a México en el siglo XVI desde las Filipinas, adoptándola
fácilmente durante los años. Actualmente es una bebida fermentada tradicional que se vende y se
consume en los estados de Colima y Jalisco.
Las técnicas de identificación de levaduras presentes en la fermentación para la producción de
alimentos y bebidas alcohólicas y no alcohólicas utilizan frecuentemente métodos de identificación
convencionales basados en la morfología, la esporulación y actividad fisiológica de las levaduras.
El desarrollo reciente de las técnicas moleculares basadas en la PCR (Reacción en Cadena de
Polimerasa) ha proporcionado oportunidades para la identificación de cepas de levaduras y
permiten ser más específicas y con una sustancial reducción en el tiempo requerido cuando se
compara con los métodos convencionales (Ezeronye y Legras, 2008). El número de estudios
sobre la diversidad microbiológica de levaduras en savias en México y específicamente en “tuba”
es muy limitado, por lo anterior, se propone identificar las especies de levaduras presentes en una
fermentación mediante herramientas moleculares.
ANTECEDENTES
1. Qué es fermentación

La fermentación es una tecnología en los alimentos muy antigua, la cual se encuentra presente en
prácticamente todas las culturas del mundo. En la actualidad, los alimentos fermentados como el
vino, la cerveza, el pan y el yogurt se producen de manera industrial y se encuentran al alcance
de muchas personas en el mundo. Sin embargo, existen otros alimentos fermentados que se
producen en menor escala, de forma artesanal, semicomercial, o bien, sólo se consumen por
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